陳貴發(fā) 張翠宏

作者單位：惠州市第三人民醫(yī)院老年病科和全科醫(yī)學科，廣東 惠州 516001

腦梗死是一種臨床常見的致殘性腦血管疾病，患者通常起病較急、嚴重程度高、治療難度大[1，2]。有研究顯示，高齡、高血壓、高血脂、肥胖等均為腦梗死的危險因素，顱內(nèi)外動脈粥樣硬化為腦梗死主要危險因素[3，4]。作為腦梗死的主要病理基礎，動脈粥樣硬化的標志及進展表現(xiàn)分別為斑塊形成、血管狹窄[5]。動脈粥樣硬化性腦梗死（ACI）患者多表現(xiàn)為偏癱、語言障礙等，嚴重威脅患者身體健康甚至生命安全，因此對ACI 發(fā)病機制進行研究，探尋新的診療靶點對ACI 早期診斷、臨床治療及預后改善具有重要意義[6，7]。本研究檢測老年ACI 患者載脂蛋白E（APOE）、抵抗素（Resistin）、微小RNA-24（miR-24）表達水平，旨在探討三者在老年ACI 患者中的表達及與病情嚴重程度的相關性。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2020年8月～2021年8月于我院進行治療的老年ACI 患者80 例為ACI 組，選取同期于我院進行診治的無癥狀性頸動脈狹窄（ACS）患者80 例為ACS 組，另選取同期于我院進行健康體檢的志愿者80 例為對照組，3 組年齡、性別、BMI、吸煙史、飲酒史、高血壓、冠心病史比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與對照組比較，ACS 組、ACI組TC、TG 水平較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；ACI 組患者TC、TG 水平高于ACS 組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 研究對象一般資料比較

納入標準：ACI 組患者均符合中華醫(yī)學會對ACI 的診斷標準[8]，并經(jīng)我院影像學檢查確診；ACS組患者經(jīng)我院頸動脈影像學檢查確診為ACS；對照組研究對象無腦血管病史；所有研究對象病歷資料齊全，年齡＞60 歲。本研究所有患者均知情同意。

排除標準：①病歷資料不全者；②具有腦血管手術史者；③外傷導致的腦梗死者；④免疫性疾病者；⑤接受過相關治療者；⑥頭頸部惡性腫瘤者。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 于就診當日取3 組研究對象清晨空腹靜脈血5ml，離心處理15min（3 000r/min）后，-30℃保存待檢。

1.2.2 免疫透射比濁法檢測APOE 水平 制備3 個潔凈試管并依次標記為對照A 管、對照B 管、檢測管，3 管中均加入350μl 緩沖液，并于對照A 管中加入蒸餾水20μl，對照B 管中加入標準液20μl，檢測管中加入稀釋后的血清20μl，3 管搖晃均勻后使用37℃保溫箱孵育15min，比色后340、700nm 波長處測定免疫復合物濁度，根據(jù)吸光度計算APOE水平。

1.2.3 酶標分析儀檢測Resistin 水平 酶標板中添加1∶10 稀釋的血清標本或100μl 標準液，之后將酶標板置于37℃保溫箱中孵育，30min 后取出洗板，各孔添加50μl 蒸餾水及一抗并搖晃均勻，再次使用37℃保溫箱孵育0.5h 后洗板，然后添加100μl酶標抗體后靜置10min，洗板后添加100μl 底物液，并置于避光環(huán)境中靜置20min，添加100μl 終止液混勻，測定待測酶標板450nm 處吸光值，檢測Resistin 水平。

1.2.4 RT-PCR 法檢測miR-24 表達 Trizol 法提取總RNA 后檢測RNA 純度及濃度，逆轉錄處理（42℃環(huán)境下孵育0.5h，80℃ 5s，置于冰上冷卻）后進行擴增處理，2-△△Ct方法計算miR-24 表達，內(nèi)參U6。miR-24 引物序列為上游引物：5'-ATGAACTTTCTG CTGTCTTGG-3'，下游引物：5'-TCACCGCCTCGGCT TGTCACA-3'。

1.2.5 斑塊、血管狹窄程度評價 對患者進行頸動脈彩超檢查，評價患者有無斑塊及斑塊性質。血管狹窄程度評價標準：重度狹窄：70%≤血管狹窄率＜100%；中度狹窄：50%≤血管狹窄率＜70%；輕度狹窄：血管狹窄率＜50%。

1.3 統(tǒng)計學方法使用SPSS 26.0 軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以±s描述，多組對比行F檢驗，組間對比行獨立樣本t檢驗。相關性研究采用Pearson 相關性分析。預測價值分析采用受試者工作特征（ROC）曲線，獲取曲線下面積、置信區(qū)間、靈敏度、特異度。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 3 組APOE、Resistin、miR-24 水平對比與對照組比較，ACS 組、ACI 組APOE、Resistin、miR-24表達水平較高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；ACI組患者APOE、Resistin、miR-24 表達水平高于ACS組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 3 組APOE、Resistin、miR-24 表達水平對比（±s）

表2 3 組APOE、Resistin、miR-24 表達水平對比（±s）

組別例數(shù)APOE（mg/dl） Resistin（μg/ml） miR-24對照組803.65±0.5715.69±2.371.15±0.13 ACS 組804.57±0.6623.77±2.681.37±0.17 ACI 組806.32±0.8133.19±3.121.92±0.25 F 28.37544.25628.369 P 0.0010.0010.001

2.3 APOE、Resistin、miR-24 表達水平與ACI 患者臨床特征關系研究與無斑塊患者比較，有斑塊患者APOE、Resistin、miR-24 表達水平較高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與穩(wěn)定性斑塊、輕中度血管狹窄、預后良好患者比較，不穩(wěn)定性斑塊、重度血管狹窄、預后不良患者APOE、Resistin、miR-24 表達水平較高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 APOE、Resistin、miR-24 表達水平與ACI 患者臨床特征關系（±s）

表3 APOE、Resistin、miR-24 表達水平與ACI 患者臨床特征關系（±s）

臨床特征例數(shù)APOE（mg/dl）Resistin（μg/ml）miR-24斑塊無295.59±0.72 28.63±2.921.74±0.21有517.12±0.93 37.52±3.352.15±0.33 t 7.64511.9406.024 P 0.0010.0010.001斑塊穩(wěn)定性穩(wěn)定236.79±0.87 35.27±3.121.96±0.28不穩(wěn)定287.53±0.98 39.66±3.572.34±0.37 t 2.8214.6224.060 P 0.0070.0010.001血管狹窄程度輕、中度565.53±0.69 28.03±2.851.69±0.19重度247.08±0.91 38.59±3.422.28±0.35 t 8.34314.2909.745 P 0.0010.0010.001預后情況良好495.28±0.71 27.83±2.791.53±0.17不良317.45±0.95 39.02±3.512.30±0.35 t 11.66015.800123.170 P 0.0010.0010.001

2.4 ACI 患者APOE、Resistin、miR-24 表達水平相關性分析ACI 患者APOE 和Resistin、APOE 和miR-24、Resistin 和miR-24 均呈正相關（r=0.465、0.641、0.467，P=0.001、0.001、0.001）。見圖1。

圖1 ACI 患者APOE、Resistin、miR-24 表達水平相關性

2.5 APOE、Resistin、miR-24 對ACI 患者預后的預測價值分析與APOE、Resistin、miR-24 單項檢測相比，聯(lián)合檢測對ACI患者預后預測的靈敏度較高，特異性較低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4、圖2。

圖2 APOE、Resistin、miR-24 對ACI 患者預后的預測價值ROC 曲線圖

表4 APOE、Resistin、miR-24 對ACI 患者預后的預測價值

3 討論

ACI 是一種由動脈粥樣硬化、血栓形成、腦組織血管閉塞等導致的腦組織供血不足、局部缺血性壞死性疾病[9，10]。老年人群為ACI 的主要發(fā)病群體，近年來隨著我國人口老齡化不斷發(fā)展，每年新增ACI病例數(shù)不斷上升，引起廣大專家學者的關注[11，12]。ACI 患者主要表現(xiàn)為感覺障礙、眩暈、失語、四肢麻木等，目前臨床尚無特效的治療手段，患者病情易反復，預后較差，因此越來越多的專家學者開始通過分子生物學等方向對ACI 發(fā)病機制、診療靶點進行研究[13，14]。

血脂水平異常為ACI 的主要危險因素，有研究表示，低密度脂蛋白（LDL）水平異常上升為動脈粥樣硬化的重要因素，APOE 為LDL 受體的配體，其水平變化與血脂水平變化具有一定相關性[15，16]。APOE 大多由機體腦組織、肝組織合成產(chǎn)生，廣泛存在LDL 中，與腦梗死的發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系。有研究顯示，APOE 的基因多態(tài)性與腦梗死后神經(jīng)功能具有密切聯(lián)系，抑制APOE 水平對腦梗死患者神經(jīng)功能的恢復具有促進作用[17]。本研究顯示，老年ACI 患者APOE 水平較高，并且不穩(wěn)定性斑塊、重度血管狹窄、預后較差患者APOE 水平相對較高，說明老年ACI 患者APOE 水平異常升高，且APOE 水平變化與患者斑塊性質、血管狹窄程度及患者預后情況有關，由此本研究推測檢測APOE 水平對老年ACI 患者的病情診斷、預后預測具有重要意義。

Resistin 是一種多肽激素，主要由機體脂肪組織分泌產(chǎn)生，能夠誘發(fā)胰島素抵抗，有研究顯示，Resistin 水平變化與動脈粥樣硬化具有密切聯(lián)系，在腦梗死發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[18]。有學者在研究中表示，Resistin 水平變化與腦梗死患者頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性具有密切聯(lián)系，檢測Resistin 水平有助于預測腦梗死患者預后[19]。本研究顯示，相比ACS 患者，老年ACI 患者Resistin 水平較高，且不穩(wěn)定性斑塊、重度血管狹窄、預后較差患者Resistin 水平相對較高，說明Resistin 在ACI中呈異常高表達，并且Resistin 表達水平與ACI 患者斑塊性質、血管狹窄程度有關，檢測Resistin 水平對ACI 患者病情診斷、預后評價具有重要意義。

微小RNA（miRNA）作為內(nèi)源性RNA 分子，與機體免疫系統(tǒng)、細胞生物學行為、炎癥反應等密切相關[20，21]。miR-24 為miRNA 家族的重要成員，其表達變化與血管平滑肌細胞生物學行為具有密切聯(lián)系，有研究表示，miR-24 可作為血管疾病診斷、治療的重要靶點[22]。本研究顯示，老年ACI 患者miR-24 表達較高，并且不穩(wěn)定性斑塊、重度血管狹窄、預后較差患者miR-24 表達相對較高，說明miR-24 在ACI 患者中呈異常高表達，其表達變化與ACI 患者斑塊性質、血管狹窄程度及患者預后情況具有一定關系。

本研究還發(fā)現(xiàn)，APOE 與Resistin、miR-24，Resistin與miR-24在老年ACI 患者中的表達呈正相關，三者聯(lián)合檢測對老年ACI 患者預后預測的靈敏度較高，特異性較低，由此本研究推測APOE、Resistin、miR-24 可能共同參與ACI 的發(fā)生發(fā)展，聯(lián)合檢測對ACI 患者預后具有較高的預測價值。

綜上所述，老年ACI 患者APOE、Resistin、miR-24 表達水平明顯異常，三者表達水平與患者臨床特征密切相關，且三者具有一定相關性，聯(lián)合檢測APOE、Resistin、miR-24 對老年ACI 患者預后具有一定的預測價值。