劉冬華　湯杰　蔣鵬飛　呂怡　苗大亨　彭俊　彭清華

〔摘要〕 目的 觀察青光安顆粒劑對(duì)抗青光眼術(shù)后濾過(guò)道組織自噬相關(guān)蛋白Beclin1/微管相關(guān)蛋白輕鏈B（light chain 3B，LC3B）表達(dá)的影響。方法 將30只成功建立慢性高眼壓模型的新西蘭白兔隨機(jī)平均分為5組，除空白組（A組）外，其余各組均行常規(guī)小梁切除術(shù)，陽(yáng)性對(duì)照組（B組）術(shù)中放置絲裂霉素C棉片，單純手術(shù)組（C組）僅行常規(guī)小梁切除術(shù)，青光安組（D組）術(shù)后灌胃青光安顆粒劑混懸液，陰性對(duì)照組（E組）術(shù)后灌胃蒸餾水。干預(yù)14 d后，Western blot法檢測(cè)濾過(guò)道組織Beclin1、LC3B-I、LC3B-II的表達(dá)量，RT-qPCR法檢測(cè)Beclin1及LC3B mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果 各手術(shù)組Beclin1蛋白平均表達(dá)量均顯著高于A組（P<0.05），B組Beclin1蛋白平均表達(dá)量顯著高于C組、D組與E組（P<0.05），D組Beclin1蛋白平均表達(dá)量高于C、E組（P<0.05）;各手術(shù)組LC3B-II/LC3B-I均顯著高于A組（P<0.05），B組LC3B-II/LC3B-I顯著高于C、D、E組（P<0.05），D組LC3B-II/LC3B-I高于C、E組（P<0.05）。各手術(shù)組Beclin1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于A組（P<0.05），B組Beclin1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于C組與E組（P<0.05），B組Beclin1 mRNA相對(duì)表達(dá)量與D組無(wú)明顯區(qū)別（P>0.05）;各手術(shù)組LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于A組（P<0.05），B組LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于C組與E組（P<0.05），B組LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量與D組無(wú)明顯區(qū)別（P>0.05）。結(jié)論 青光安顆粒劑能通過(guò)促進(jìn)濾過(guò)道組織Beclin1蛋白及mRNA的表達(dá)，誘導(dǎo)瘢痕組織的自噬，維持濾過(guò)道的通暢。

〔關(guān)鍵詞〕 青光眼;青光安顆粒劑;慢性高眼壓兔模型;微管相關(guān)蛋白輕鏈B;Beclin1

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R285.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.03.002

〔Abstract〕 Objective To observe the effect of Qingguang’an Granule on the expression of autophagy-related protein Beclin1/light chain 3B （LC3B） in filtration duct tissue after anti-glaucoma surgery. Methods Thirty New Zealand white rabbits successfully established a chronic high intraocular pressure model were randomly divided into 5 groups. Except for the blank group （group A）， all other groups underwent routine trabeculectomy. The positive control group （group B） was placed mitomycin C cotton tablets during operation， the simple operation group （group C） only underwent conventional trabeculectomy， the Qingguang’an group （group D） was given Qingguang’an Granule suspension after surgery， the negative control group （group E） was given distilled water after operation. After 14 days of intervention， Western blot method was used to detect the expression levels of Beclin1， LC3B-I， and LC3B-II in filtration duct tissue， and the relative expression levels of Beclin1 and LC3B mRNA were detected by RT-qPCR. Results The average expression of Beclin1 protein in each operation group was significantly higher than that in group A （P<0.05）， the average expression of Beclin1 protein in group B was significantly higher than that in group C， group D and group E （P<0.05）， and the average expression of Beclin1 protein in group D was significantly higher than that in group C and group E （P<0.05）; LC3B-II/LC3B-I in each operation group was significantly higher than that in group A （P<0.05）， LC3B-II/LC3B-I in group B was higher than that in group C， group D and group E （P<0.05）， LC3B-II/LC3B-I in group D was higher than that in group C and group E （P<0.05）. The relative expression of Beclin1 mRNA in each operation group was significantly higher than that in group A （P<0.05）， the relative expression of Beclin1 mRNA in group B was significantly higher than that in group C and group E （P<0.05）， the relative expression of Beclin1 mRNA in group B was not significantly different from that in group D （P>0.05）; the relative expression of LC3B mRNA in each operation group was significantly higher than that in group A （P<0.05）， and the relative expression of LC3B mRNA in group B was significantly higher than that in group C and group E （P<0.05）， the relative expression of LC3B mRNA in group B was not significantly different from group D （P>0.05）.? Conclusion Qingguang’an Granule can induce the autophagy of scar tissue by promoting the expression of Beclin1 protein and mRNA in the filtration duct tissue， and maintain the patency of the filtration duct tissue.

〔Keywords〕 glaucoma; Qingguang’an Granule; rabbit model of chronic high intraocular pressure; light chain 3B; Beclin1

青光眼是世界排名第二位的致盲性眼病，發(fā)病率僅次于白內(nèi)障，全球約1/2的盲人因青光眼所致[1]。青光眼濾過(guò)性手術(shù)（glaucoma filtration surgry， GFS）是常見(jiàn)的抗青光眼手術(shù)方式，有較好的降眼壓作用[2]，但術(shù)后濾過(guò)道容易瘢痕化導(dǎo)致手術(shù)失敗。青光安顆粒劑是彭清華教授歷經(jīng)多年研究所研制的中藥復(fù)方制劑，既往研究表明，青光安顆粒劑能顯著降低高眼壓模型兔GFS后濾過(guò)道瘢痕化[3-4]，但其具體機(jī)制尚不明確。本研究通過(guò)構(gòu)建慢性高眼壓家兔模型，觀察青光安顆粒劑對(duì)GFS后濾過(guò)道瘢痕組織自噬相關(guān)蛋白Beclin1和微管相關(guān)蛋白輕鏈B（light chain 3B， LC3B）表達(dá)的影響，以期能闡明青光安顆粒劑在青光眼濾過(guò)手術(shù)中抗瘢痕作用的部分機(jī)制。

1 材料

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

40只SPF級(jí)新西蘭白兔，12周齡，雌雄各半，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：43608300000801。動(dòng)物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室。

1.2? 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑

青光安顆粒劑，按現(xiàn)代制備工藝制成顆粒劑，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供。Tris（貨號(hào)：V900483）、APS（貨號(hào)：SAB1300902）、SDS（貨號(hào)：8.17034）、TEMED（貨號(hào)：1.10732）、Tween-20（貨號(hào)：P9416）、丙烯酰胺（貨號(hào)：A9099）、甘氨酸（貨號(hào)：G7126）、甲叉雙丙烯酰胺（貨號(hào)146072）、Beclin1（貨號(hào)：SAB1306537）、LC3B（貨號(hào)：L7543），均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;SuperECL Plus超敏發(fā)光液（美國(guó)Thermo pierce公司，貨號(hào)：P1052-100）;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（貨號(hào)：11939823001）、UltraSYBR Mixture（貨號(hào)：CW2601），均購(gòu)自中國(guó)北京康為世紀(jì)生物科技有限公司;核酸染料（中國(guó)北京普利萊公司，貨號(hào)：PB11141）。

1.3? 主要儀器

臺(tái)式冷凍離心機(jī)（廣東黑馬生物科技有限公司，型號(hào)：TTGL-18R）;電泳儀（美國(guó)Bio-rad公司，型號(hào)：T164-5050）;電泳槽（北京六一生物科技有限公司，型號(hào)：TDYCZ-24EN）;轉(zhuǎn)膜儀（北京六一生物科技有限公司，型號(hào)：TDYCZ-40A）;眼科顯微手術(shù)器械（日本新芝公司，型號(hào)：TDY89-1）;熒光定量RCP儀（美國(guó)Thermo公司，型號(hào)：TPIKO REAL 96）;熒光PCR板（美國(guó)Thermo公司，型號(hào)：TSPL0960）;恒溫水浴箱（河南金博事業(yè)有限公司，型號(hào)：THH-S2）;手持裂隙燈（北京六一生物科技有限公司，型號(hào)：TDYCP-31DN）;接觸式眼壓筆（美國(guó)Reichert公司，型號(hào)：Tono-pen AVIA）。

2 方法

2.1? 慢性高眼壓兔模型建立[5]

前房注射2%透明質(zhì)酸鈉0.2 mL，每周1次，連續(xù)兩周以建立高眼壓模型，使用Tono-pen AVIA 接觸式眼壓筆，于早上9：00至12：00間進(jìn)行眼壓測(cè)量，眼壓連續(xù)1周高于22 mmHg（2.93 kPa）為造模成功。

2.2? 青光眼濾過(guò)手術(shù)動(dòng)物模型建立[6]

縮瞳后以2.0%戊巴比妥麻醉動(dòng)物，充分麻醉后以開(kāi)瞼器撐開(kāi)眼球，以鼻上方穹隆部為基底制作結(jié)膜瓣，以角膜緣為基底制作鞏膜瓣，切除小梁及周邊虹膜組織;10-0縫合線縫合鞏膜;調(diào)整鞏膜縫線直至鞏膜瓣濾過(guò)通暢。連續(xù)縫合結(jié)膜，涂典必殊眼膏（比利時(shí)愛(ài)爾康公司，規(guī)格：3.5 g，每次涂1 cm長(zhǎng)的藥膏）。手術(shù)動(dòng)物模型的建立由同一人完成，從手術(shù)后第2天起，每日給術(shù)眼點(diǎn)典必殊滴眼液（比利時(shí)愛(ài)爾康公司，規(guī)格：5 mL，每次1滴）4次，復(fù)方托吡卡胺滴眼液（日本參天制藥株式會(huì)社，規(guī)格：10 mL，每次1滴）1次。

2.3? 實(shí)驗(yàn)分組

成功建立慢性高眼壓兔模型后，剔除不符合標(biāo)準(zhǔn)（3只）及死亡的兔子（2只）后，最終隨機(jī)數(shù)字表法選取30只模型兔，分為5組，其中空白組（A組）、陽(yáng)性對(duì)照組（B組）、單純手術(shù)組（C組）、青光安組（D組）和陰性對(duì)照組（E組）各6只。

2.4? 動(dòng)物給藥

A組動(dòng)物不做特殊處理;B組動(dòng)物行常規(guī)小梁切除術(shù)后，術(shù)中待鞏膜瓣切好后，于鞏膜瓣與結(jié)膜瓣處置入0.4 mg/mL絲裂霉素C棉片，定時(shí)3 min后予以大量生理鹽水充分沖洗;C組動(dòng)物僅行常規(guī)小梁切除術(shù);D組動(dòng)物行常規(guī)小梁切除術(shù)，術(shù)后第1開(kāi)始予以青光安顆粒劑中藥混懸液灌胃，按10 mL/kg 給藥，2次/d，連續(xù)給藥14 d;E組動(dòng)物行常規(guī)小梁切除術(shù)，術(shù)后第1天開(kāi)始每日予以青光安顆粒劑同等容量的蒸餾水灌胃，2次/d，連續(xù)14 d。

2.5? 取材方法

術(shù)后第15天處死動(dòng)物，取右眼球?yàn)V過(guò)泡處角鞏膜組織約0.025 g，清洗組織，常規(guī)用冰預(yù)冷PBS，然后加入RIPA裂解液（200 μL），再將組織置于勻漿器中反復(fù)研磨，直至組織塊消失;然后經(jīng)過(guò)裂解、離心15 min（半徑為95 mm，轉(zhuǎn)速為12 000 r/min），再取0.5 mL所得上清液分裝轉(zhuǎn)移，置于離心管中，部分剩余者留存?zhèn)溆?，保存?20 ℃左右，待需要時(shí)取出測(cè)定蛋白濃度。

2.6? Western blot法檢測(cè)Beclin1、LC3B蛋白表達(dá)

上樣后，將已變性蛋白進(jìn)行電泳。濃縮膠電泳需要80 V電壓，分離膠電泳電壓比濃縮膠電泳高40 V。當(dāng)溴酚藍(lán)電泳至膠底部時(shí)可停止。然后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜、一抗孵育（稀釋比例為1∶1000）、二抗孵育（稀釋比例為1∶6000）等步驟后，予以顯像曝光，得出最后結(jié)果。

2.7? RT-qPCR檢測(cè)Beclin1和LC3B mRNA表達(dá)

取0.02 g組織，加入1 mL Trizol用勻漿器研磨勻漿充分混勻，提取總RNA，以組織總mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄cDNA。引物設(shè)計(jì)與合成：Beclin1上游5’-TGCCCTATGGAAATCACTCGT-3’，下游5’-GTCT?

CGCCCTTTTCAACCTC-3’，基因產(chǎn)物長(zhǎng)度168? bp;LC3B上游5’-ACGTCCACCCAATCAGTCC-3’，下游5’-TTACTGGCGACTCAGAATGCAA-3’，基因產(chǎn)物長(zhǎng)度172 bp;內(nèi)參基因GAPDH上游5’-TGGAATCCACT?

GGCGTCTTCAC-3’，下游5’-AGGATGCGTTGC?

TGACAATCTTGA-3’，基因產(chǎn)物長(zhǎng)度195 bp。制定實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)體系：使用iQ5 PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增程序如下：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃預(yù)變性3 s，60 ℃退火30 s，共40個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增完成后進(jìn)行熔解曲線分析及相對(duì)表達(dá)量分析，△Ct=目的基因Ct-內(nèi)參基因Ct;-ΔΔCt=（對(duì)照組）ΔCt-各樣品ΔCt。

2.8? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以“x±s”表示：兩兩比較采用成組t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn);多組比較采用ANOVA（LDS）檢驗(yàn)。均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 術(shù)后第1天濾過(guò)泡情況

術(shù)后各組兔子右眼結(jié)膜稍有充血，角膜清，無(wú)混濁水腫，前房?jī)?nèi)無(wú)積血，右眼濾過(guò)泡，扁平彌散，濾過(guò)通暢。見(jiàn)圖1。

3.2? 青光安顆粒劑對(duì)Beclin1、LC3B-I、LC3B-II蛋白表達(dá)及LC3B-II/LC3B-I的影響

各手術(shù)組Beclin1蛋白平均表達(dá)量均顯著高于A組（P<0.05），B組Beclin1蛋白平均表達(dá)量顯著高于C組、D組與E組（P<0.05），D組Beclin1蛋白平均表達(dá)量高于C、E組（P<0.05）;各手術(shù)組LC3B-I蛋白平均表達(dá)量均顯著低于A組（P<0.01），B組

LC3B-I蛋白平均表達(dá)量低于C組、D組與E組（P<0.05），D組LC3B-I蛋白平均表達(dá)量低于E組（P<0.05）。各手術(shù)組LC3B-II蛋白平均表達(dá)量均顯著高于A組（P<0.05），B組LC3B-II蛋白平均表達(dá)量顯著高于C、D、E組（P<0.05），D組LC3B-II蛋白平均表達(dá)量高于C、E組（P<0.05）;各手術(shù)組LC3B-II/LC3B-I均顯著高于A組（P<0.05），B組LC3B-II/LC3B-I顯著高于C、D、E組（P<0.05），D組LC3B-II/LC3B-I高于C、E組（P<0.05）。見(jiàn)表1、圖2-3。

3.3? 青光安顆粒劑對(duì)Beclin1、LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

各手術(shù)組Beclin1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于A組（P<0.05），B組Beclin1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于C組與E組（P<0.05），B組Beclin1 mRNA相對(duì)表達(dá)量與D組無(wú)明顯區(qū)別（P>0.05）;各手術(shù)組LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高于A組（P<0.05），B組LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于C組與E組（P<0.05），B組LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量與D組無(wú)明顯區(qū)別（P>0.05）。見(jiàn)表2。

4 討論

目前，GFS是臨床常用的抗青光眼手術(shù)方式之一，其原理是通過(guò)人為的建立濾過(guò)通道來(lái)到達(dá)控制眼壓的目的，但是需要手術(shù)區(qū)的切口不完全愈合才能長(zhǎng)久的維持有效濾過(guò)，濾過(guò)手術(shù)后濾過(guò)道瘢痕的增生常常導(dǎo)致濾過(guò)手術(shù)的失敗[7]。為此，國(guó)內(nèi)外眼科學(xué)者積極致力于青光眼濾過(guò)手術(shù)后抗瘢痕藥物的研制。目前，用于青光眼濾過(guò)手術(shù)后抗瘢痕的藥物有抗代謝藥、抗凝血類(lèi)藥物、拮抗生長(zhǎng)因子藥物、類(lèi)固醇與非甾體類(lèi)抗炎藥和中藥等。中藥相對(duì)其他幾種藥物而言，毒副作用相對(duì)較小，因此成為了當(dāng)下研究的熱點(diǎn)。

彭清華教授團(tuán)隊(duì)歷經(jīng)多年研究探索，認(rèn)為青光眼的中醫(yī)核心病機(jī)為“氣陰兩虛，脈絡(luò)瘀滯，玄府閉塞，神水瘀積”[8-10]，“益氣養(yǎng)陰、活血利水”是青光眼的中醫(yī)治療基本大法，并據(jù)此法研制出青光安顆粒劑[11]。該顆粒劑由黃芪、白術(shù)、茯苓、生地黃、地龍、紅花、赤芍及車(chē)前子等藥物組成。前期臨床研究表明，青光安顆粒劑可明顯降低眼壓[12-13]，對(duì)青光眼術(shù)后濾過(guò)功能的長(zhǎng)遠(yuǎn)維持有明顯幫助[14]，其4種有效組分均能在小梁切除術(shù)后通過(guò)抑制Tenon嚢成纖維細(xì)胞的表達(dá)減少濾過(guò)泡瘢痕形成[15]，且未發(fā)現(xiàn)青光安顆粒劑4種有效組分對(duì)眼部組織的毒副作用，說(shuō)明其安全性優(yōu)于傳統(tǒng)藥物，可能成為提高GFS成功率的一個(gè)安全有效的全新藥物。

目前，青光安顆粒劑減少濾過(guò)泡瘢痕形成的分子機(jī)制尚不清楚，本實(shí)驗(yàn)以自噬為切入點(diǎn)，通過(guò)檢測(cè)自噬相關(guān)靶點(diǎn)蛋白Beclin1、LC3B及其mRNA的表達(dá)，探討了青光安顆粒劑對(duì)在自噬水平上對(duì)GFS后的抗濾過(guò)道瘢痕作用。Western blot檢測(cè)顯示：B組與D組瘢痕組織中Beclin1蛋白含量和LC3B-II/LC3B-I明顯升高;RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示：B組與D組瘢痕組織中Beclin1 mRNA明顯升高，D組LC3B mRNA相對(duì)表達(dá)量雖然高于C組和E組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與LC3B不能靈敏地評(píng)價(jià)自噬的發(fā)生有關(guān)。從Beclin1及LC3B-II/LC3B-I表達(dá)結(jié)果來(lái)看，青光安顆粒劑與絲裂霉素C均能提高濾過(guò)道自噬，從而阻止濾過(guò)道瘢痕化。

濾過(guò)道的自噬可減少瘢痕組織的形成，而B(niǎo)eclin1、LC3B-I及LC3B-II是瘢痕組織自噬的關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白，Beclin1可明顯促進(jìn)自噬體膜的形成，是自噬啟動(dòng)的核心分子，也是哺乳動(dòng)物參與自噬的特異性基因，Beclin1缺乏會(huì)導(dǎo)致自噬活性受到明顯抑制[16]。在Beclin1介導(dǎo)的自噬性細(xì)胞死亡過(guò)程中，LC3B可以為自噬泡膜的延長(zhǎng)貢獻(xiàn)作用，最終促使自噬體成熟，LC3B在細(xì)胞內(nèi)分別以LC3B-I和LC3B-II兩種形式存在，LC3B-I是LC3B-II的前體蛋白，活化后即為L(zhǎng)C3B-II，因LC3B-II定位于前自噬體和自噬體，其含量與自噬泡的數(shù)量呈正相關(guān)，隨自噬體系膜的增加而增加，為了消除測(cè)量絕對(duì)數(shù)值對(duì)結(jié)果的影響，目前，多以LC3B-II/LC3B-I來(lái)作為評(píng)價(jià)自噬是否正常發(fā)生的指標(biāo)，LC3B-II/LC3B-I在一定程度上代表了細(xì)胞的自噬活性。

綜上，青光安顆粒劑能通過(guò)促進(jìn)濾過(guò)道組織Beclin1的表達(dá)，提高LC3B-II/LC3B-I比值，誘導(dǎo)瘢痕組織的自噬，從而減少濾過(guò)泡瘢痕形成，維持濾過(guò)道的通暢。

參考文獻(xiàn)

[1] WRIGHT D M， KONSTANTAKOPOULOU E， MONTESANO G， et al. Visual field outcomes from the multicenter， randomized controlled laser in glaucoma and ocular hypertension trial （LiGHT）[J]. Ophthalmology， 2020， 127（10）： 1313-1321.

[2] RATHI S， ANDREWS C A， GREENFIELD D S， et al. Trends in glaucoma surgeries performed by glaucoma subspecialists versus nonsubspecialists on medicare beneficiaries from 2008 through 2016[J]. Ophthalmology， 2021， 128（1）： 30-38.

[3] 羅? 萍，彭清華，李? 波，等.青光安顆粒劑對(duì)慢性高眼壓兔眼濾過(guò)性手術(shù)后作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，20（S1）：121-122.

[4] 劉? 艷，彭清華.青光安有效組份對(duì)兔眼濾過(guò)性手術(shù)后眼壓和濾過(guò)道瘢痕組織成纖維細(xì)胞的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（12）：2610-2613，2864.

[5] 路? 暉，李樹(shù)寧，傅? 濤，等.大鼠青光眼濾過(guò)手術(shù)模型的制作[J].眼科研究，2008，26（2）：88-91.

[6] KAPLOWITZ K， KHODADADEH S， WANG S， et al. Use of subconjunctival injections of 5-fluorouracil to rescue and prolong intraocular pressure reduction for a failing Ahmed glaucoma implant[J]. Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology， 2017， 255（6）： 1185-1191.

[7] GROVER D S， KORNMANN H L， FELLMAN R L. Historical considerations and innovations in the perioperative use of mitomycin C for glaucoma filtration surgery and bleb revisions[J]. Journal of Glaucoma， 2020， 29（3）： 226-235.

[8] 李銀鑫，蔣鵬飛，曾志成，等. 青光安Ⅱ號(hào)方有效組分對(duì)青光眼模型DBA/2J小鼠視網(wǎng)膜中RhoA、ROCK及Caspase-3蛋白表達(dá)的影響[J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，40（6）： 673-678.

[9] 歐陽(yáng)云，彭? 俊，黃學(xué)思，等. 青光安緩釋劑對(duì)抗青光眼術(shù)后濾過(guò)道瘢痕化TGF-β/Smad信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)蛋白的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2019，34（9）：3986-3989.

[10] 蔣鵬飛，彭? 俊，曾志成，等.青光安Ⅱ號(hào)方治療青光眼的分子機(jī)制研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2021，36（7）：4219-4222.

[11] 喻? 娟，彭清華.青光安顆粒劑對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的HTFs增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志（電子版），2019，9（2）：79-85.

[12] 項(xiàng)? 宇，劉家琪，李? 萍，等.青光安顆粒劑對(duì)自發(fā)型青光眼小鼠眼壓的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，38（1）：17-20.

[13] 劉? 艷，彭清華.青光安有效組份對(duì)兔眼濾過(guò)性手術(shù)后眼壓和濾過(guò)道瘢痕組織成纖維細(xì)胞的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31（12）：2610-2613，2864.

[14] YU J， XIA F， LI X， et al. Effects of Qingguang'an containing serum on the expression levels of autophagy-related genes in human Tenon's fibroblasts induced by transforming growth factor beta 1[J]. Journal of Traditional Chinese Medicine， 2021， 41（2）： 236-245.

[15] 蔣鵬飛，黃學(xué)思，彭? 俊，等.青光安有效組分對(duì)兔青光眼術(shù)后濾過(guò)道瘢痕組織中膠原纖維、成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1表達(dá)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2019，26（5）：59-63.

[16] KE D S， JI L M， WANG Y， et al. JNK1 regulates RANKL-induced osteoclastogenesis via activation of a novel Bcl-2-Beclin1-autophagy pathway[J]. Faseb Journal， 2019， 33（10）： 11082-11095.