張德偉?朱澤兵?郭婭?肖琦?袁林?唐小平

摘要：本文采用氣相色譜法測(cè)定胃蛋白酶中丙酮的殘留量。結(jié)果表明，樣品中丙酮的分離度高，濃度在100～1000 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9992），方法回收率為96.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%，與定量分析要求相適應(yīng)。采用氣相色譜法測(cè)定胃蛋白酶中丙酮的含量，樣品的處理簡(jiǎn)便、快捷，檢測(cè)結(jié)果靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，為現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 胃蛋白酶;丙酮;氣相色譜法

【中圖分類號(hào)】Q946.81+4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2022）05--01

胃蛋白酶（Pepsin）具有助消化的生理功能，在工業(yè)上還廣泛應(yīng)用于方便食品、奶制品、助消化藥和口香糖加工制造[1]。目前，國內(nèi)外對(duì)胃蛋白酶的研究主要集中在臨床療效、藥理領(lǐng)域，對(duì)質(zhì)量狀況的研究較少，現(xiàn)報(bào)道有采用單掃描極譜法測(cè)定胃蛋白酶中丙酮?dú)埩舻膱?bào)道[2]， 但該法所采用的檢測(cè)設(shè)備普及率低，專屬性不強(qiáng)。因此，本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜法測(cè)定胃蛋白酶中丙酮的殘留量，為該產(chǎn)品的質(zhì)量安全提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1材料與試劑

胃蛋白酶樣品，購于西南地區(qū)生產(chǎn)胃蛋白酶的主流廠家A、B、C、D，各2個(gè)批次。N-甲基吡咯烷酮 （分析純，Honeywell公司生產(chǎn)）;丙酮（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

CP224S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;GC-2010Plus氣相色譜儀（日本島津科技有限公司）;HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，安捷倫科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

精密稱取丙酮對(duì)照試劑0.50g，置50 mL容量瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為10 mg/mL的混合溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

分別精密量上述儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置10 mL的容量瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮稀釋至刻度，配成濃度分別為100、200、400、600、800、1000 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.3 樣品的處理

精密稱取胃蛋白酶0.5 g，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮5 mL，密封，渦旋使溶解，作為供試品溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件

頂空進(jìn)樣瓶汽化室溫度80 ℃，汽化時(shí)間20 min;進(jìn)樣口溫度200 ℃;分流-不分流進(jìn)樣（SSL）：進(jìn)樣量1 mL，分流比25：1;色譜柱采用程序升溫模式：初始溫度40 ℃，保留時(shí)間7 min，以10℃/min速率升溫至80 ℃，再以25 ℃/min速率升溫至200 ℃，保持5 min;FID檢測(cè)器，溫度250 ℃[3-5]。

2.2 線性關(guān)系

分別精密量取“1.3.2”項(xiàng)下的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液各5 mL，置20 mL頂空進(jìn)樣瓶中，按擬定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，測(cè)得的峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制線性回歸方程為Y=2866Х-8289， 相關(guān)系數(shù)r=0.9992，結(jié)果見圖1。

2.3 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

通過對(duì)3個(gè)平行樣進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表2。丙酮回收率在96.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD是1.4%，該方法的回收率和精密度良好。

2.4 方法檢出限

按S/N=3， 取對(duì)照試劑溶液逐級(jí)進(jìn)行稀釋， 按擬定氣相色譜條件進(jìn)行測(cè)定， 測(cè)得丙酮在該方法中的檢出限為0.1μg/mL。

2.5 樣品中丙酮的測(cè)定

取A、 B、 C、 D四個(gè)生產(chǎn)廠家的胃蛋白酶樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 不同廠家生產(chǎn)的胃蛋白酶原料中丙酮?dú)埩袅克酱嬖谳^大差異。

3 結(jié)論

胃蛋白酶生產(chǎn)過程中主要使用丙酮進(jìn)行沉淀結(jié)晶[6-8]，分離干燥后易形成微小的泡狀微粒，鎖住了殘留的有機(jī)溶劑，很難完全散發(fā)出來。本研究以50%N-甲基吡咯烷酮為溶劑，將樣品置于頂空瓶中加熱溶解，讓有機(jī)相全部釋放出來，形成飽和的蒸汽，保證各組分不流失，頂空進(jìn)樣對(duì)氣相色譜儀污染較小，測(cè)定更加科學(xué)、準(zhǔn)確，檢測(cè)靈敏度高，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、快速度，可作為胃蛋白酶中丙酮留量測(cè)定方法進(jìn)行推廣。

參考文獻(xiàn)：

[1] 喻東. 生物堿對(duì)胃蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)及光譜性質(zhì)的影響[D]. 成都： 四川大學(xué)， 2005.

[2] 田玉瓊，湯曉勤，向仕學(xué).胃蛋白酶中丙酮?dú)埩袅康膯螔呙铇O譜法測(cè)定[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志，2006（06）：756-757.

[3] 林瑛，楊學(xué)靈，楊雪珠.氣相色譜法測(cè)定胰酶中的丙酮溶劑殘留量[J].廣州化學(xué)，2013，38（02）：34-36.

[4] 周緒云，馬曉茜.氣相色譜法測(cè)定洛索洛芬鈉中7種殘留溶劑的含量[J].中南藥學(xué)，2021，19（07）：1450-1453.

[5]? 田潔，丁紅雨，趙麗元，郝愛魚，王戈.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定阿托伐他汀鈣原料藥中殘留溶劑[J].中國藥物評(píng)價(jià)，2015，32（03）：135-138.

[6] 王瑩. 豬胃蛋白酶分離純化新工藝建立及技術(shù)參數(shù)研究[D].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)，2009.

[7] 辛秀蘭.生物分離與純化技術(shù) [ M] ， 科學(xué)出版社， 2005， 8： 64-65.

[8] 王瑩， 張麗萍.胃蛋白酶分離純化技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國食品添加劑， 2008（01）： 110-113.

作者簡(jiǎn)介：張德偉， 副主任中藥師， 主要研究方向?yàn)槭称匪幤焚|(zhì)量檢測(cè)分析。

基金項(xiàng)目： 重慶市萬州區(qū)2020年度科技創(chuàng)新項(xiàng)目（wzstc-2020059）， 重慶市科學(xué)技術(shù)局2021年度重慶市藥品科研項(xiàng)目

*通信作者： 朱澤兵， 主管中藥師， 主要研究方向?yàn)槭称匪幤焚|(zhì)量檢測(cè)分析。

2036501186243