曾 昊,何劍橋,崔柏楊,郭嘉寧,郭金凡,周華波,韋祖樟,歐陽(yáng)康,黃偉堅(jiān),陳 櫻*
(1廣西動(dòng)物疫病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,廣西 南寧 530004;2南寧市華波寵物醫(yī)院,廣西 南寧 530004)
【研究意義】流感病毒(Influenza virus)屬于正黏病毒科(Orthomyxoviridae)負(fù)股單鏈RNA病毒,依據(jù)核蛋白抗原性的不同,可分為A型、B型、C型和D型(Compans et al.,1977;van de Sandt et al.,2015;Asha and Kumar,2019),其中A型流感病毒主要感染野生水禽,并將其作為天然宿主(Webster et al.,1992)。目前已鑒定出18個(gè)HA亞型和11個(gè)NA亞型的流感病毒(Tong et al.,2013;Zhu et al.,2013),其中H9N2 亞型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)在我國(guó)大部分地區(qū)已呈地方性流行,在家禽及一些哺乳動(dòng)物中以低致病性形式存在,并未引起廣泛關(guān)注,但可持續(xù)在這些宿主中不斷衍化以適應(yīng)新宿主,對(duì)家禽和哺乳動(dòng)物的毒力及傳播力也不斷增強(qiáng)。除了衍化成為具有結(jié)合人源受體特性和可通過氣溶膠在雪貂間進(jìn)行傳播外(Wan et al.,2008),H9N2亞型流感病毒還可廣泛承受同個(gè)亞型或不同亞型間基因片段的重配,從而產(chǎn)生攜帶不同H9N2亞型譜系片段的新基因型病毒(Su et al.,2015;Li et al.,2017)。犬呼吸道內(nèi)同時(shí)擁有結(jié)合人流感和禽流感的受體(Wasik et al.,2017),可作為流感病毒的中間宿主。當(dāng)2種或多種流感病毒同時(shí)存在于犬體內(nèi)時(shí),不同基因片段的重配會(huì)導(dǎo)致新型流感病毒產(chǎn)生。此外,犬作為人類的伴侶動(dòng)物,在流感病毒的生態(tài)循環(huán)過程中發(fā)揮重要作用,當(dāng)H9N2亞型流感病毒突破中間宿主屏障時(shí)勢(shì)必會(huì)對(duì)人類的健康造成潛在威脅。因此,了解犬源H9N2亞型流感病毒的分子變異特征和致病性,可為揭示H9N2亞型流感病毒突破禽—人宿主屏障的分子機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】根據(jù)流感病毒8個(gè)基因片段的不同來(lái)源,Gu等(2014)對(duì)H9N2亞型流感病毒建立了一種基因型劃分方法,以BJ/94類譜系的H9N2亞型為A基因型,基因片段來(lái)源不同則定義為其他基因型。按照這種劃分方法,我國(guó)目前流行的H9N2亞型流感病毒至少可劃分為23種基因型(A~W)(Guan et al.,1999;Gu et al.,2014;Liu et al.,2016)。最初,A基因型在我國(guó)H9N2亞型流感病毒中占主導(dǎo)到位,但1998年后H基因型(A基因型的PB2、PB1、PA和NP基因片段由F/98類譜系所替代)逐漸取代A基因型,成為優(yōu)勢(shì)基因型(Liu et al.,2003)。研究表明,F(xiàn)/98類譜系病毒較BJ/94類譜系病毒在雞群中擁有更高的復(fù)制和傳播力(Sun et al.,2010),因此H基因型擁有更強(qiáng)的禽類宿主適應(yīng)能力。2007年出現(xiàn)的S基因型(在H基因型的基礎(chǔ)上替換了G1類譜系的PB2和M基因片段)具有很強(qiáng)的傳播性,可在家禽中穩(wěn)定傳播,成為目前我國(guó)H9N2亞型流感病毒的主要基因型(Gu et al.,2014)。H9N2亞型流感病毒能感染多種哺乳動(dòng)物,包括犬、貓、雪貂和豬等(Wan et al.,2008;Yu et al.,2008;Sun et al.,2013;Zhou et al.,2015;孔子榮等,2020),更重要的是H9N2亞型流感病毒能跨越宿主感染人類(Sun and Liu,2015;Song and Qin,2020)。此外,H9N2亞型流感病毒可提供病毒基因,導(dǎo)致H5N1亞型流感病毒出現(xiàn)遺傳多樣性(Lei and Shi,2011),同時(shí)為H7N7、H5N2、H7N9和H10N8亞型流感病毒提供內(nèi)部基因,產(chǎn)生新的基因型流感病毒(Li et al.,2014;Xu et al.,2015;Yang et al.,2017)。至今,已有不同亞型流感病毒感染犬的研究報(bào)道,如H5N1、H5N2和H9N2亞型AIV,其中H5N1亞型AIV甚至可引起犬死亡(Songserm et al.,2006;Chen et al.,2010,2015;Zhao et al.,2012)。2013年在廣西地區(qū)分離獲得犬源H9N2亞型流感病毒,且H9亞型陽(yáng)性率逐年升高,2012年的檢出率甚至高達(dá)44.85%(Sun et al.,2013)。楊新艷等(2012)的犬血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示遼寧錦州地區(qū)犬血清H9亞型病毒陽(yáng)性檢出率為1.3%;Zhou等(2015)對(duì)我國(guó)江西、福建、浙江和江蘇地區(qū)家禽養(yǎng)殖場(chǎng)附近的流浪犬和流浪貓進(jìn)行血清學(xué)調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)犬血清中H9亞型病毒陽(yáng)性檢出率為3.9%,且4.71%的貓血清能與分離獲得的H3N2亞型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)抗原抗體反應(yīng),故推測(cè)犬在流感病毒傳播中充當(dāng)中間宿主的角色。Saberi等(2019)對(duì)伊朗東南部地區(qū)的犬血清學(xué)調(diào)查顯示H9N2病毒陽(yáng)性檢出率為38.23%。此外,Amirsalehy等(2012)在實(shí)驗(yàn)室條件下以H9N2亞型AIV感染犬,結(jié)果發(fā)現(xiàn)接種組和接觸組犬均出現(xiàn)打噴嚏、咳嗽和流鼻涕等臨床癥狀,且在犬鼻拭子和糞便中均能檢測(cè)到病毒存在。Zhang等(2013)進(jìn)行同樣試驗(yàn),但結(jié)果顯示僅在肺臟組織中檢測(cè)到H9N2亞型AIV,在鼻拭子和咽拭子未檢測(cè)到病毒?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前,H9N2亞型流感病毒已在家禽中廣泛流行,但國(guó)內(nèi)外有關(guān)H9N2亞型流感病毒感染犬后其分子變異特征及致病性的研究鮮見報(bào)道?!緮M解決的關(guān)鍵問題】通過病毒分離鑒定、全基因組擴(kuò)增及測(cè)序,對(duì)比分析犬源H9N2亞型流感病毒與H9N2亞型AIV間的遺傳進(jìn)化關(guān)系和關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)變化特點(diǎn),旨在掌握犬源H9N2亞型流感病毒的分子變異特征及致病性,為今后探究流感病毒的禽—犬跨種傳播機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
2017年8月—2019年1月從廣西各地采集流浪犬鼻拭子,共393份。犬腎細(xì)胞(Madin-darby caine kidney,MDCK)由廣西疾病預(yù)防控制中心惠贈(zèng);6周齡SPF級(jí)BALB/c雌性小鼠購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司;反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP預(yù)混劑和DNA Marker購(gòu)自TaKaRa公司;核酸提取試劑盒購(gòu)自Axy-Prep公司;RNA酶抑制劑購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)股份有限公司;瓊脂糖凝膠粉末購(gòu)自生工生物工程(上海)股份有限公司;EB替代染料購(gòu)自APPLYGEN公司;DMEM液體培養(yǎng)基購(gòu)自Corning公司;胎牛血清、0.05%胰酶和TPCK胰酶購(gòu)自Gibco公司;血清白蛋白購(gòu)自Solarbio公司;細(xì)胞板、細(xì)胞瓶及吸管等細(xì)胞生物耗材購(gòu)自NEST公司;RT-PCR擴(kuò)增引物委托上海杰李生物技術(shù)有限公司合成。
按照核酸提取試劑盒說(shuō)明提取病毒總RNA,使用通用引物Uni12(5'-AGCAAAAGCAGG-3')將其反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,利用針對(duì)A型流感病毒M基因片段的特異性引物(5'-ATGAGYCTTYTAACCGAGGTC GAAACG-3'和5'-TGGACAAANCGTCTACGCTGC AG-3')進(jìn)行PCR擴(kuò)增。RT-PCR鑒定呈陽(yáng)性的樣品經(jīng)0.22 μm除菌濾器過濾后,接種至MDCK細(xì)胞,盲傳3代后收集細(xì)胞上清液進(jìn)行鑒定。
使用Hoffmann等(2001)設(shè)計(jì)的特異性引物擴(kuò)增分離毒株全基因組。其中,PB2、PB1和PA基因分兩段進(jìn)行擴(kuò)增,其余5個(gè)基因片段直接擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)膠回純化后送至生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。
使用DNASTAR Lasergene 7.1中的SeqMan對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行拼接,處理后的全長(zhǎng)序列在NCBI(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)上進(jìn)行BLAST同源比對(duì)。選用國(guó)內(nèi)外的22株參考毒株,包括主要的H9N2 亞型各譜系代表性毒株BJ/94[A/chicken/Beijing/1/1994(H9N2)]、Y280[A/duck/Hong Kong/Y280/97(H9N2)]、G1[A/quail/Hong Kong/G1/1997(H9N2)]、G9[A/chicken/Hong Kong/G9/1997(H9N2)]、Y439[A/duck/Hong Kong/Y439/1997(H9N2)]、TY/WI/66[A/turkey/Wisconsin/1/1966(H9N2)]、F/98[A/chicken/Shanghai/F/1998(H9N2)]及廣西早期犬源分離毒株GX1[A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)],采用MEGA 7.0的鄰接法(Neighborjoining)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹,Bootstrap設(shè)為1000次。
將小鼠隨機(jī)平均分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,每組9只。采取麻醉滴鼻方式,試驗(yàn)組每只小鼠接種50 μL病毒液(含1.0×106PFU),對(duì)照組每只接種50 μL PBS。從攻毒當(dāng)天至攻毒后14 d,觀察小鼠臨床癥狀并記錄其體質(zhì)量,體質(zhì)量下降25%及以上則默認(rèn)其死亡(Li et al.,2012;Chen et al.,2015;Mitake et al.,2020),給予安樂死處理。攻毒后第3 d和第5 d每組隨機(jī)剖殺3只小鼠,采集腦、上鼻竇、肺臟、肝臟、心臟、腎臟及脾臟組織,通過空斑試驗(yàn)測(cè)定病毒效價(jià)。
2017年8月—2019年1月從疑似患流感癥狀[咳嗽、打噴嚏、流鼻涕,以及發(fā)熱(體溫>39 ℃)]的流浪犬中采集393份犬鼻拭子樣品,經(jīng)RT-PCR檢測(cè)顯示有36份樣品呈陽(yáng)性,陽(yáng)性率為9.16%。將RT-PCR檢測(cè)呈陽(yáng)性的犬鼻拭子樣品接種至MDCK細(xì)胞,結(jié)果僅有1份流浪犬樣品接種MDCK細(xì)胞后出現(xiàn)皺縮、拉長(zhǎng)等明顯病變(圖1-A),而陰性對(duì)照孔無(wú)明顯變化(圖1-B)。對(duì)接種第3代后收集到的細(xì)胞上清液進(jìn)行RT-PCR鑒定,結(jié)果擴(kuò)增獲得約250 bp的目的片段(圖1-C),將該毒株命名為A/canine/Guangxi/LZ11/2018(簡(jiǎn)寫為L(zhǎng)Z11)。對(duì)分離毒株LZ11全基因組進(jìn)行分段擴(kuò)增,結(jié)果顯示所有擴(kuò)增片段大?。▓D1-D)均與理論值相符。
圖1 犬源流感病毒分離鑒定及其全基因擴(kuò)增電泳結(jié)果Fig.1 Isolation,identification and amplification electrophoresis of complete genome of canine-origin influenza virus
BLAST同源比對(duì)分析結(jié)果(表1)表明,分離毒株LZ11的HA、NA基因分別與A/chicken/Hubei/01/2015(H9N2)和A/chicken/JinShui/JS1002/2018(H9N2)對(duì)應(yīng)基因序列的相似性最高,其相似性分別為99.43%和98.33%;而PB2、PB1、M 和NS 基因與H7N9 亞型AIV對(duì)應(yīng)基因序列的相似性最高,達(dá)98.55%~99.51%;PA和NP基因則與A/chicken/Anhui/LH99/2017(H9N2)對(duì)應(yīng)基因序列的相似性最高,分別為99.21%和99.53%。
表1 分離毒株LZ11的8個(gè)基因片段同源比對(duì)分析結(jié)果Table 1 Homology comparison of eight gene fragments of LZ11 isolate
將分離毒株LZ11與國(guó)內(nèi)外22株參考毒株進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,結(jié)果表明,分離毒株LZ11的HA、NA和NS基因?qū)儆贐J/94類譜系,PB2和M基因?qū)儆贕1類譜系,PB1、PA和NP基因?qū)儆贔/98類譜系,其中PB1、PA和NP基因節(jié)段組成與近年來(lái)我國(guó)流行的S基因型H9N2亞型AIV一致。分離毒株LZ11的HA、NS、PB2、M、PB1、PA和NP基因片段來(lái)源均與廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)相同(圖2),僅NA基因片段來(lái)源不同,分離毒株LZ11的NA基因片段來(lái)源于BJ/94類譜系,而A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)的來(lái)源于G9類譜系。
圖2 基于H9N2亞型流感病毒8個(gè)基因片段相似性構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹Fig.2 Phylogenetic trees of eight gene fragments based on homology of canine-origin H9N2 subtype influenza virus
對(duì)分離毒株LZ11與H9N2亞型各譜系代表毒株和廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)的HA蛋白裂解位點(diǎn)、HA蛋白受體結(jié)合位點(diǎn)、NA蛋白耐藥位點(diǎn)及M蛋白耐藥位點(diǎn)進(jìn)行比較,結(jié)果(表2)發(fā)現(xiàn),分離毒株LZ11的HA蛋白在第324~331位存在1個(gè)裂解位點(diǎn)(PSRSSR↓GL),符合低致病性流感病毒的特征。與代表毒株相比,分離毒株LZ11的HA蛋白受體結(jié)合位點(diǎn)在第153、194、220和228位較保守,但在第183、190、195和226位的變異程度較大,尤其是第226位為亮氨酸(L),使得分離毒株LZ11具有優(yōu)先結(jié)合人類α-2,6唾液酸受體的能力。此外,分離毒株LZ11 的NA 蛋白耐藥位點(diǎn)保持為119E、151D、276E、292R和294N,說(shuō)明其仍對(duì)神經(jīng)氨酸酶抑制劑敏感;由于分離毒株LZ11的M2蛋白發(fā)生31S→N突變,故推測(cè)其已對(duì)金剛烷胺類藥物產(chǎn)生耐藥性。
表2 分離毒株LZ11與各參考毒株的HA、NA和M2蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)比較Table 2 Comparison of key amino acids sites of HA,NA and M2 proteins in LZ11 isolate and reference strains
對(duì)分離毒株LZ11與H9N2亞型各譜系代表毒株和廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)的PB2、PB1和PA蛋白進(jìn)行比較,結(jié)果(表3)發(fā)現(xiàn),與H9N2亞型AIV代表毒株相比,分離毒株LZ11的PB1蛋白發(fā)生588A→F突變和PA蛋白發(fā)生356K→R突變,與其他代表毒株完全不同;但與A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)相比,PB2蛋白292V、PB1蛋白368V和PA蛋白409N并未發(fā)生突變,說(shuō)明分離毒株LZ11保留了部分哺乳動(dòng)物適應(yīng)性突變位點(diǎn),同時(shí)其他哺乳動(dòng)物適應(yīng)性位點(diǎn)出現(xiàn)新的氨基酸位點(diǎn)突變。
表3 分離毒株LZ11與各參考毒株的PB2、PB1和PA蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)比較Table 3 Comparison of key amino acids sites of PB2,PB1 and PA proteins in LZ11 isolate and reference strains
分離毒株LZ11經(jīng)滴鼻方式接種小鼠后,攻毒組的小鼠未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,也無(wú)任何臨床癥狀;僅在攻毒后2 d出現(xiàn)輕微的體質(zhì)量下降,平均體質(zhì)量下降4.4%,但至攻毒后3 d小鼠體質(zhì)量逐漸恢復(fù)至正常水平(圖3-A),與對(duì)照組小鼠一致。對(duì)攻毒組和對(duì)照組小鼠的所有臟器進(jìn)行病毒空斑滴定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離毒株LZ11能在攻毒組小鼠的肺臟和上鼻竇組織中進(jìn)行有效復(fù)制,其中攻毒后3 d的肺臟滴度較攻毒后5 d的高,滴度高達(dá)3.82 lg PFU/mL,上鼻竇的病毒滴度最高為5.98 lg PFU/mL(圖3-B)。說(shuō)明分離毒株LZ11能較好地在哺乳動(dòng)物呼吸道復(fù)制。
圖3 小鼠致病性試驗(yàn)結(jié)果Fig.3 Test of pathogenicity in mice
H9N2亞型AIV屬于低致病性流感病毒,在家禽中廣泛流行。隨著流感病毒在禽—犬間的不斷傳播,H9N2亞型AIV犬陽(yáng)性血清不斷被檢出(楊新艷等,2012;Zhou et al.,2015;Saberi et al.,2019),但從犬體內(nèi)分離獲得H9N2亞型流感病毒并進(jìn)行致病性分析的研究相對(duì)較少。本研究從流浪犬中分離獲得毒株LZ11(A/canine/Guangxi/LZ11/2018)并進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析,結(jié)果表明,分離毒株LZ11的8個(gè)基因節(jié)段與A/chicken/Anhui/LH99/2017(H9N2)高度同源(99.53%~94.65%),且其基因型是我國(guó)當(dāng)前流行的S基因型(Gu et al.,2014),即分離毒株LZ11為犬源H9N2亞型流感病毒,且屬于近年流行的S基因型。研究發(fā)現(xiàn),2013年感染人類的H7N9亞型AIV是由H9N2亞型AIV提供的內(nèi)部基因所形成,盡管供體的來(lái)源多樣,但均屬于S基因型(Gu et al.,2014;孔子榮等,2020)。值得注意的是,分離毒株LZ11與廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)的基因型并不一致,A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)來(lái)自歐亞類禽譜系A(chǔ)IV的重組H9N2亞型流感病毒(Sun et al.,2013),而分離毒株LZ11是來(lái)源于3個(gè)譜系的三重組毒株。分離毒株LZ11的NA基因來(lái)源于BJ/94類譜系,而A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)來(lái)源于G9類譜系,但其余7個(gè)基因片段(HA、NS、PB2、M、PB1、PA和NP)的來(lái)源相同??梢?,隨著H9N2亞型AIV在家禽中的不斷演化,其主要基因型(S型)正試圖感染新的宿主。犬不僅是流感病毒生態(tài)循環(huán)過程中的重要中間宿主,還在AIV從禽類跨種感染哺乳動(dòng)物的傳播過程中發(fā)揮重要作用。
為進(jìn)一步了解分離毒株LZ11的分子變異特征,將其關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)與H9N2亞型各譜系代表毒株及廣西早期犬源分離毒株A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)進(jìn)行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離毒株LZ11的HA蛋白出現(xiàn)226Q→L突變,具有增強(qiáng)人類SAα2,6Gal受體親和力的分子特征(Teng et al.,2013;Zhou et al.,2015),即具備與人源受體結(jié)合的能力。盡管分離毒株LZ11的PB2蛋白保持了627E和701D,但存在292I→V突變。292I→V突變能使病毒擁有更高的病毒聚合酶活性及更強(qiáng)的抑制IFN-β誘導(dǎo)能力,從而增強(qiáng)H9N2亞型流感病毒在哺乳動(dòng)物宿主體內(nèi)的復(fù)制能力(Gao et al.,2019)。同時(shí)有研究表明,PB2蛋白588A→V突變能增加H9N2亞型流感病毒對(duì)小鼠的毒力及其在小鼠體內(nèi)的復(fù)制能力(Xiao et al.,2016),但分離毒株LZ11的PB2蛋白588A→F突變是否起到與PB2蛋白588A→V突變相似的作用還有待進(jìn)一步探究。此外,2株犬源H9N2亞型流感病毒[分離毒株LZ11和A/canine/Guangxi/1/2011(H9N2)]的PB1蛋白均發(fā)生368I→V突變。盡管368I→V突變是H5N1亞型AIV在雪貂上的適應(yīng)性標(biāo)記,但研究發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)在H9N2亞型AIV中逐年增加,從1999年之前的2.8%增加至1999—2012年期間的21.0%,在2013—2019年期間已高達(dá)67.0%(Sun et al.,2020)。分離毒株LZ11的PA蛋白還存在356K→R突變,該位點(diǎn)的突變已被證實(shí)可提高病毒對(duì)小鼠的毒力及其在人類細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制能力(Xu et al.,2016)。綜上所述,這些哺乳動(dòng)物適應(yīng)性位點(diǎn)的突變暗示著犬源H9N2亞型流感病毒可能擁有更強(qiáng)的哺乳動(dòng)物適應(yīng)能力。
本研究的小鼠致病性試驗(yàn)再次驗(yàn)證了犬源H9N2亞型流感病毒對(duì)小鼠的適應(yīng)能力,雖然對(duì)小鼠的致病性不強(qiáng),但可在小鼠體內(nèi)較好地復(fù)制。李三木等(2021)對(duì)廣西早期犬源H9N2亞型流感病毒進(jìn)行小鼠致病性評(píng)估,結(jié)果表明犬源H9N2亞型流感病毒對(duì)小鼠均未引起死亡,且僅有部分毒株能在小鼠體內(nèi)有效復(fù)制。本研究卻發(fā)現(xiàn)分離毒株LZ11感染小鼠3 d后,在肺臟和上鼻竇的病毒滴度分別為3.82和5.98 lg PFU/mL,即病毒復(fù)制能力強(qiáng)于廣西早期的犬源分離毒株。但也有研究發(fā)現(xiàn)從豬體內(nèi)分離獲得的H9N2亞型流感病毒可引起小鼠明顯的臨床癥狀,甚至造成死亡(Deng et al.,2010;Wei et al.,2012)。說(shuō)明不同來(lái)源和不同宿主適應(yīng)后的H9N2亞型流感病毒對(duì)小鼠的致病性可能存在差異。對(duì)于H9N2亞型AIV跨種感染犬,可能會(huì)出現(xiàn)無(wú)癥狀感染現(xiàn)象而被忽視,促使其更易獲得適應(yīng)新宿主的機(jī)會(huì),因今后有必要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)犬源H9N2亞型流感病毒的監(jiān)測(cè),及早切斷禽—犬傳播,為有效防控流感病毒犬—人跨種傳播打下基礎(chǔ)。
分離獲得的犬源H9N2亞型流感病毒屬于近年流行的S基因型,其8個(gè)基因節(jié)段分屬于3種譜系(BJ/94類譜系、G1類譜系和F/98類譜系),且存在多個(gè)哺乳動(dòng)物適應(yīng)性相關(guān)氨基酸位點(diǎn)突變,具備感染哺乳動(dòng)物的分子特征,可在小鼠臟器內(nèi)有效復(fù)制。鑒于人類與犬的密切關(guān)系,今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)犬源H9N2亞型流感病毒的監(jiān)測(cè)與防控。