劉佳奇 劉玉峰 何忠偉 李猛超 殷蕊 孫桂清 宮春光

摘 要：在水溫19～31 ℃，鹽度32‰條件下，探究熱脅迫對平均體質量為（1.56±0.81）g，平均體長為（5.53±0.81）cm的松江鱸（Trachidermus fasciatus）子二代幼魚免疫功能的影響。結果顯示：當熱脅迫水溫達到28 ℃時，松江鱸幼魚體內總抗氧化能力、總超氧化物歧化酶及還原型谷胱甘肽的水平出現(xiàn)顯著上升;但隨著熱脅迫水溫升高以及養(yǎng)殖時間增加，機體內免疫活性酶無法有效清除體內產生的氧自由基，松江鱸幼魚免疫酶活性和抗氧化功能會受到顯著的抑制，導致松江鱸幼魚免疫功能下降。同時，因體內存在大量氧自由基，使得機體內的脂質過氧化物水平和炎癥因子基因表達量顯著性上升，導致機體出現(xiàn)氧化損傷，對松江鱸幼魚存活造成威脅。

關鍵詞：松江鱸（Trachidermus fasciatus）;熱脅迫;免疫功能

松江鱸（Trachidermus fasciatus）隸屬脊索動物門（Chordata），硬骨魚綱（Osteichthyes），鲉形目（Scorpaeniformes），杜父魚科（Cottidae），松江鱸魚屬（Trachidermus），為近海暖溫性底層洄游魚類[1]，主要分布于我國渤海、黃海和東海，在日本以及朝鮮周邊部分海域亦有分布[2]。因其營養(yǎng)價值高[3]，肉質鮮美，而廣受歡迎。

近年來，由于受到興建水利設施致使松江鱸洄游受阻、水體污染及過度捕撈的影響，松江鱸自然種群數(shù)量急劇下降，人們開始嘗試進行松江鱸食性、人工繁殖等方面的研究[4-6]。我國松江鱸自然分布地域的夏季水溫往往會超過32 ℃，但熱脅迫對松江鱸影響的研究卻鮮有報道，基于此，本試驗嘗試探究熱脅迫對松江鱸幼魚相關免疫酶及炎癥因子的影響，以為完善松江鱸繁育及人工養(yǎng)殖技術提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

試驗用松江鱸幼魚來自中國水產科學研究院北戴河中心實驗站100日齡松江鱸子二代，平均體質量為（1.56±0.81）g，平均體長為（5.53±0.81）cm。

1.2 試驗試劑

0.9%NaCl生理鹽水，總抗氧化能力（T-AOC）檢測試劑盒、總超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒、還原型谷胱甘肽（GSH）測定試劑盒、脂質過氧化物（LPO）試劑盒、總蛋白（TP）測定試劑盒（以上活性酶測定試劑盒均購自南京建成生物工程有限公司），TRIZOL試劑（英濰捷基（上海）貿易有限公司），氯仿、異丙醇、DEPC 水、Loading buffer、DNA 分子標準量Marker（上海生工生物工程股份有限公司），無水乙醇（國藥生物試劑有限公司），Nanodrop（賽默飛世爾科技（中國）有限公司），TB green、PrimerScript RT reagent KIT（TAKARA生物公司）。

1.3 試驗方法

選取大小均等、體質健康的松江鱸幼魚，其平均體質量為（1.56±0.81） g，平均體長為（5.53±0.81）cm。在水溫為19 ℃、鹽度為32‰的沙濾海水中暫養(yǎng)14 d，不間斷充氧，正常投喂，每隔24 h使用等溫海水進行換水，換水量為80%。暫養(yǎng)結束后選取健康幼魚進行熱脅迫試驗，每組50尾松江鱸幼魚，設置3個平行試驗組，使用恒溫加熱棒進行溫度控制，水溫每日上升（1.0±0.2）℃;設計試驗水溫梯度為19、22、25、28 ℃和31 ℃;各試驗組分別于試驗開始的第0 d、第3 d、第6 d、第9 d以及第12 d進行軀干樣品采集。樣品采集后放入2.0 mL凍存管內于液氮中進行保存，樣品全部采集完成后，進行組織樣品的總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（SOD）、還原型谷胱甘肽酶（GSH）、脂質過氧化物（LPO）及炎癥因子（TFIL）基因表達量的檢測。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗得出的數(shù)據(jù)結果以平均值（Mean）表示，采用 SPSS 17.0 和 Excel 2010進行處理。

2 結果與分析

2.1 熱脅迫對松江鱸幼魚總抗氧化能力的影響

如圖1所示，在熱脅迫過程中，19、22 ℃和25 ℃處理組在第0、3、6、9、12 d五個試驗時間點松江鱸幼魚的總抗氧化能力（T-AOC）水平變化均不存在顯著性差異（P>0.05）。28 ℃處理組在熱脅迫進行到第6 d時，T-AOC水平出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05）。31 ℃處理組在熱脅迫第3 d T-AOC水平出現(xiàn)了顯著上升（P<0.05），但隨著熱脅迫時間的延長與第0 d相比，在第9、12 d則出現(xiàn)顯著性下降（P<0.05），松江鱸幼魚T-AOC水平隨著時間的增加出現(xiàn)先上升后下降趨勢，并且在第12 d T-AOC水平達到整體最低水平。

2.2 熱脅迫對松江鱸幼魚總超氧化物歧化酶活性的影響

如圖2所示，在熱脅迫過程中，19、22 ℃和25 ℃處理組在第0、3、6、9、12 d五個試驗時間點松江鱸幼魚的總超氧化物歧化酶（SOD）活性變化均不存在顯著性差異（P>0.05）。在28 ℃處理組中，與第0 d相比，在熱脅迫進行到第6 d時，SOD活性出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05）。31 ℃處理組在熱脅迫第3 d SOD活性出現(xiàn)了顯著上升（P<0.05），但隨著熱脅迫時間的延長在第6、9、12 d出現(xiàn)連續(xù)的顯著性下降（P<0.05），松江鱸幼魚SOD活性隨著時間的增加出現(xiàn)先上升后下降趨勢，并且在第12 d SOD活性達到整體最低水平。

2.3 熱脅迫對松江鱸幼魚還原型谷胱甘肽酶活性的影響

如圖3所示，在熱脅迫過程中，19 ℃及22 ℃處理組在第0、3、6、9、12 d五個試驗時間點松江鱸幼魚的還原型谷胱甘肽酶（GSH）活性變化均不存在顯著性差異（P>0.05）。在25 ℃處理組中，與第0 d相比，在熱脅迫進行到第12 d時，GSH活性出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05）。在28 ℃處理組中，與第0 d相比，在熱脅迫進行到第6 d時，GSH活性出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05）。31 ℃處理組在熱脅迫第3 d GSH活性出現(xiàn)了顯著上升（P<0.05），但隨著熱脅迫時間的延長在第6、9、12 d則出現(xiàn)連續(xù)的顯著性下降（P<0.05）。

2.4 熱脅迫對松江鱸幼魚脂質過氧化物水平的影響

如圖4所示，在熱脅迫過程中，19、22 ℃和25 ℃三組處理組在第0、3、6、9、12 d五個試驗時間點松江鱸幼魚的脂質過氧化物（LPO）水平變化均不存在顯著性差異（P>0.05）。在28 ℃處理組中，與第0 d相比，在熱脅迫進行到第6 d時，LPO水平出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05），并在第9、12 d出現(xiàn)連續(xù)的顯著性上升（P<0.05）。在31 ℃處理組中，除第6 d外，在熱脅迫第3、9、12 d LPO水平均出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05）。

2.5 熱脅迫對松江鱸幼魚炎癥因子基因表達量的影響

如圖5所示，在熱脅迫過程中，除22 ℃處理組的第3 、6、9 d松江鱸幼魚的炎癥因子（TFIL）基因表達量變化不存在顯著性差異外（P>0.05），19 ℃及22 ℃處理組中其余各試驗時間點之間均存在顯著性差異（P<0.05）。在25 ℃處理組中，與第0 d相比，在熱脅迫進行到第6 d時，TFIL基因表達量出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05），隨之在第12 d出現(xiàn)顯著性下降（P<0.05）。在28 ℃處理組中，在熱脅迫分別進行到第6、9、12 d時，TFIL基因表達量均出現(xiàn)顯著性下降（P<0.05）。在31 ℃處理組中，與第0 d相比，在熱脅迫分別進行到第6、9、12 d時，TFIL基因表達量均出現(xiàn)顯著性上升（P<0.05），但整體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。

3 討論

在對水產動物進行人工養(yǎng)殖的過程中，水體溫度是影響水產動物生長的關鍵環(huán)境因素之一[7]。當養(yǎng)殖水溫處于適宜范圍內時，隨著養(yǎng)殖水溫的升高，水產動物的餌料利用率和攝食率會相應提高[8]。但養(yǎng)殖水溫過高，會刺激機體相關免疫活性酶水平上升，以應對熱脅迫引發(fā)的應激反應[9]，且隨著熱脅迫時間的延長及水溫的升高，體內過多的氧自由基無法被相關免疫活性酶有效清除，會導致機體免疫功能下降并受到氧化損傷[10]。

在已有的研究中松江鱸苗種的適宜生長水溫為10～20 ℃[11]，張飛明等[12]認為松江鱸的理論存活水溫為35 ℃以下;而在實際養(yǎng)殖過程中發(fā)現(xiàn)，松江鱸幼魚在水溫達到31 ℃時出現(xiàn)死亡，因此本試驗設計了5個水溫梯度，分別為19、22、25、28 ℃及31 ℃。在本試驗中，當熱脅迫水溫達到28 ℃時，松江鱸幼魚體內T-AOC、SOD及GSH的水平出現(xiàn)顯著上升;但隨著熱脅迫水溫升高以及熱脅迫時間的延長，松江鱸機體內免疫活性酶無法有效清除體內產生的氧自由基，松江鱸幼魚免疫酶活性和抗氧化功能會受到顯著的抑制，導致其免疫功能下降，這一結果與姜旭陽等[13]探究急性高溫脅迫對虹鱒和硬頭鱒幼魚抗氧化酶活性的影響研究結果相似。同時，因體內存在大量氧自由基，使得機體內的LPO水平和TFIL基因表達量顯著性上升，導致機體出現(xiàn)氧化損傷，對松江鱸幼魚存活造成威脅。本試驗結果表明，松江鱸幼魚的培育水溫控制在28 ℃以下是比較適宜的。

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（收稿日期：2021-12-26）

基金項目：國家海洋水產種質資源庫;河北省特色水產現(xiàn)代種業(yè)科技創(chuàng)新團隊（21326307D）;河北省現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系特色海產品創(chuàng)新團隊（HBCT2018170206）。

作者簡介：劉佳奇（1995-），男，碩士研究生，研究方向：漁業(yè)發(fā)展。E-mail：1094846521@qq.com。

通信作者：宮春光（1971-），男，副教授，研究方向：病害防控與健康養(yǎng)殖。E-mail：gongcg2005@163.com。