武改麗，霍志鵬，王 玉，何 毅

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617； 2.天士力醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司研究院，現(xiàn)代中藥開發(fā)中心，天津 300410； 3.天士力醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，創(chuàng)新中藥關(guān)鍵技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300410； 4.天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072）

藁本內(nèi)酯（LIG）屬于苯酞類成分之一，在中藥當(dāng)歸、川芎等傘形科植物中含量較高，約為1%，是其主要活性成分之一［1］。中藥當(dāng)歸、川芎應(yīng)用廣泛，LIG 存在順?lè)串悩?gòu)結(jié)構(gòu)，Z-LIG 具有空間優(yōu)勢(shì)構(gòu)象，比E-LIG更加穩(wěn)定，在中藥材中含量遠(yuǎn)高于E-LIG，相關(guān)研究多以 Z-LIG 為基礎(chǔ)開展研究［2］。LIG 口服利用度為53.72%，藥物半衰期為5.61 h，血腦屏障系數(shù)（BBB）為1.25，類藥性指數(shù)為0.07，分子的極性表面積為30.21（小于60 表示其在滲透細(xì)胞膜時(shí)表現(xiàn)良好）［3］，表明LIG 生物利用度較高，穿透力強(qiáng)，是藥物開發(fā)的良好候選者，極具研究?jī)r(jià)值和開發(fā)潛力。

神經(jīng)系統(tǒng)是維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)的重要環(huán)節(jié)之一，當(dāng)神經(jīng)系統(tǒng)受到腦血管疾病、神經(jīng)退化疾病或神經(jīng)損傷的破壞時(shí)，難以維持機(jī)體的正常運(yùn)作，可能引發(fā)腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病等神經(jīng)損傷疾病，不僅對(duì)人類健康造成損害，也給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)?，F(xiàn)代藥理研究表明，LIG 主要通過(guò)抗氧化、抗炎、抗凋亡、改善記憶損傷、改善血腦屏障通透性等作用，對(duì)腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病等中樞神經(jīng)損傷疾病有潛在的防治作用。本文就近年來(lái)LIG 神經(jīng)保護(hù)作用的研究進(jìn)展予以綜述，為L(zhǎng)IG 或含LIG 的相關(guān)中藥和制劑的開發(fā)研究以及我國(guó)中藥寶庫(kù)的挖掘利用提供參考。

1 LIG 對(duì)神經(jīng)損傷疾病的的藥效研究

1.1 LIG 可改善腦卒中的神經(jīng)損傷 腦卒中是神經(jīng)系統(tǒng)的常見疾病，是由血管原因引起的急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)局灶性損傷導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)缺陷，是致殘率最高的疾病，也是危害居民健康的主要疾病之一。LIG 分子量小，能夠通過(guò)血腦屏障，可顯著減少小鼠缺血再灌注后腦梗死面積，顯著降低缺血腦組織中的丙二醛（MDA）水平，提高缺血腦組織抗氧化酶谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）和超氧化物歧化酶（SOD）活性。LIG能顯著增加B 淋巴細(xì)胞瘤-2 基因（Bc1-2）的表達(dá)，降低兔抗人單克隆抗體（Bax）和胱天蛋白酶3（Caspase-3）的免疫反應(yīng)活性，保護(hù)大腦神經(jīng)元及其他組織［4］。

Li 等［5］研究使用 LIG（10 mg/kg）干預(yù)腦內(nèi)注射自體血誘導(dǎo)的腦出血模型小鼠，與假手術(shù)組比較，LIG（10 mg/kg） 干預(yù)組給藥 3 d 后神經(jīng)功能評(píng)分和Bederson 評(píng)分顯著下降，給藥1～3 d 明顯改善了平衡能力、肌肉能力和協(xié)調(diào)能力；與模型組比較，LIG（10 mg/kg）給藥3 d 后可顯著降低腦水含量，減輕腦出血后的腦水腫，顯著降低神經(jīng)元密度缺失。研究結(jié)果表明，LIG（10 mg/kg）能夠顯著改善腦出血模型小鼠神經(jīng)損傷，對(duì)出血性中風(fēng)具有有效的保護(hù)作用。

Ren 等［6］研究給予 LIG（65.3±10.8）pg/mg 干預(yù)小鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞后，5 溴-2'-脫氧尿苷（BrdU+）細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞遷移、傷口愈合能力、細(xì)胞血管數(shù)量顯著增加；LIG 干預(yù)腦缺血模型大鼠試驗(yàn)中，LIG 組給予（52.1±7.1）pg/mg，與模型組比較，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和磷酸化蛋白p-eNOS 表達(dá)水平顯著增加（P＜0.05），表明LIG 可促進(jìn)缺血區(qū)域的血管生成和改善腦血管功能來(lái)減輕缺血損傷。

Wu 等［7］研究結(jié)果顯示，LIG 干預(yù)糖氧剝奪/復(fù)氧（OGD/R）誘導(dǎo)的HT-22 細(xì)胞，顯著增加了基質(zhì)金屬蛋白酶MMP 和腺嘌呤核苷三磷酸（ATP），降低了活性氧（ROS），進(jìn)一步誘導(dǎo)了線粒體裂變；LIG 干預(yù)短暫性大腦中動(dòng)脈阻塞（MCAO）大鼠試驗(yàn)結(jié)果表明，LIG可激活單磷酸腺苷（AMP）活化蛋白激酶（AMPK）通路，進(jìn)而抑制動(dòng)力蛋白相關(guān)蛋白1（Drp1）和線粒體錨定蛋白Fis1 的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)線粒體裂變，從而保護(hù)缺血性腦卒中神經(jīng)損傷。

Li 等［8］研究顯示，與模型組比較，LIG（15 mg/kg）可明顯減少M(fèi)CAO 大鼠的腦梗死體積（P＜0.01）并減輕神經(jīng)功能障礙（P＜0.01），還可顯著降低MCAO 大鼠的 MMP-2 和 MMP-9（MMP-2 和 MMP-9 屬于基質(zhì)蛋白金屬酶）水平；機(jī)制研究表明，鼻內(nèi)給藥LIG 通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子NF-E2 相關(guān)因子（Nrf2）和熱休克蛋白70（HSP70）信號(hào)通路增強(qiáng)對(duì)缺血后神經(jīng)損傷的保護(hù)，提示LIG 可能通過(guò)恢復(fù)供血供氧、抑制缺血部位炎癥反應(yīng)及維持神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和功能的完整性改善腦卒中癥狀，是一種潛在的腦卒中治療藥物。

1.2 LIG 對(duì)阿爾茨海默病具有神經(jīng)保護(hù)作用 阿爾茨海默病是一種神經(jīng)退行性疾病，是指隨著年齡的增長(zhǎng)而出現(xiàn)的認(rèn)知和功能衰退的神經(jīng)病理學(xué)改變，記憶能力缺陷是最初階段的特征，后期階段伴隨著認(rèn)知和行為的逐漸變化。其發(fā)病機(jī)制包括淀粉蛋白假說(shuō)（Aβ）、Tau 假說(shuō)、氧化應(yīng)激假說(shuō)、突觸強(qiáng)度降低、突觸丟失和神經(jīng)變性等，最終導(dǎo)致神經(jīng)損傷。

Zhu 等［9］研究使用 LIG 干預(yù)衰老模型 SAMP8 小鼠，通過(guò)莫里斯水迷宮、對(duì)象識(shí)別、曠場(chǎng)試驗(yàn)行為測(cè)試，LIG 干預(yù)組可明顯縮短時(shí)間、焦慮行為，且高劑量組（20 mg/kg）比低劑量組（10 mg/kg）改善現(xiàn)象明顯；LIG 高劑量組（20 mg/kg）神經(jīng)元相關(guān)蛋白突觸后致密物 95、93（PSD95、PSD93）和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）表達(dá)升高到正常水平，LIG 低劑量組（10 mg/kg）略低于正常水平；LIG 干預(yù)組Drp1 蛋白表達(dá)水平降低，線粒體融合相關(guān)蛋白1 和2（Mfn1 和Mfn2）表達(dá)水平增加，表明LIG 可以改善SAMP8 小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力；同時(shí)LIG 還可改善SAMP8 小鼠線粒體功能，改善SAMP8 小鼠的神經(jīng)退化。

Zhao 等［10］研究發(fā)現(xiàn)，LIG 可降低細(xì)胞凋亡、促進(jìn)Bcl-2、自噬效應(yīng)蛋白1（Beclin1）和細(xì)胞自噬標(biāo)志物L(fēng)C3-Ⅱ表達(dá)和LC3-Ⅱ免疫反應(yīng)性和自噬體數(shù)量增加、降低Bax 的表達(dá)，有效地促進(jìn)OGD/R 誘導(dǎo)的PC12 細(xì)胞的自噬，保護(hù)其免受凋亡，結(jié)果表明LIG 通過(guò)肝激酶B1（LKB1）-AMPK-哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路促進(jìn)自噬，保護(hù)PC12 細(xì)胞免受OGD/R 誘導(dǎo)的凋亡。

Wei 等［11］研究顯示，LIG 有顯著的神經(jīng)保護(hù)作用，與模型組比較，LIG 在 1～30 μmol/L 提高了 Aβ25-35誘導(dǎo)的干預(yù)人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（SH-SY5Y）活力（P＜0.05），抑制了乳酸脫氫酶（LDH）的產(chǎn)生（P＜0.01），顯著抑制了 Aβ1-42誘導(dǎo)的毒性（P＜0.01），機(jī)制研究結(jié)果表明LIG 可能通過(guò)抑制p38，同時(shí)激活PI3-K/Akt信號(hào)通路保護(hù)Aβ 纖維誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性。這些結(jié)果不僅為L(zhǎng)IG 的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制提供了新的見解，也表明LIG 在預(yù)防和治療阿爾茨海默病可能是一種很有前景的臨床前研究的候選藥物。

2 LIG 對(duì)神經(jīng)保護(hù)作用活性的機(jī)制研究

現(xiàn)代藥理研究表明，LIG 分子量小、口服利用度高、易于通過(guò)血腦屏障等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)腦卒中、阿爾茨海默病等神經(jīng)損傷疾病具有潛在預(yù)防和治療作用，也決定了其藥物價(jià)值。LIG 可能的神經(jīng)保護(hù)作用的主要機(jī)制，見圖1。

圖1 LIG 可能的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制

2.1 抗氧化應(yīng)激作用 氧化應(yīng)激是細(xì)胞凋亡、神經(jīng)炎癥、代謝紊亂和神經(jīng)元生物能量衰竭的中樞介質(zhì)。氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的大腦損傷對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能有很強(qiáng)的潛在負(fù)面影響。線粒體是細(xì)胞代謝的重要介質(zhì)，是ROS 的產(chǎn)生者和靶點(diǎn)。正常情況下，低、中濃度的ROS 促進(jìn)神經(jīng)元的發(fā)育，產(chǎn)生的ROS 會(huì)被內(nèi)源性抗氧化酶如SOD 轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫（H2O2），并經(jīng)由過(guò)氧化氫酶和谷胱甘肽還原酶的作用轉(zhuǎn)化為水以維持氧化還原的動(dòng)態(tài)平衡。當(dāng)機(jī)體受內(nèi)外因素干擾時(shí)，導(dǎo)致ROS 形成增加或抗氧化物水平降低時(shí)，氧化還原平衡被破壞，使體內(nèi)聚集較高水平的ROS 及自由基，誘導(dǎo)氧化損傷，破壞了細(xì)胞的抗氧化防御機(jī)制，導(dǎo)致細(xì)胞和神經(jīng)元損傷，并導(dǎo)致疾病和衰老［12］。LIG 抗氧化能力主要表現(xiàn)在抑制活性氧產(chǎn)生和增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力方面。

Zhu 等［9］研究顯示，與對(duì)照組比較，使用 LIG 預(yù)處理通過(guò)增加Mfn1、Mfn2 和P-AMPK 水平，下調(diào)Drp1水平來(lái)保護(hù)被H2O2損傷的HT22 細(xì)胞；LIG 干預(yù)組顯著減少了SAMP8 小鼠的脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA 的含量，增加了SOD 和GSH-PX 的活性，表明LIG 可降低SAMP8 小鼠的氧化應(yīng)激。

吳倩等［13］研究顯示，LIG（1、5 和 15 μmol/L）作用于OGD/R 損傷后的PC12 細(xì)胞，細(xì)胞存活率分別提高到80.03%、86.36%和84.11%，且貼壁細(xì)胞數(shù)目明顯增多，抑制了OGD/R 損傷后PC12 細(xì)胞內(nèi)ROS 的聚集、細(xì)胞線粒體膜電位的下降，試驗(yàn)結(jié)果表明，LIG 具有神經(jīng)保護(hù)作用，其機(jī)制可能與促進(jìn)線粒體分裂有關(guān)。

Long 等［14］研究顯示，與假手術(shù)組比較，手術(shù)組［雙側(cè)頸動(dòng)脈閉塞模型組（BCCAO）］缺血腦組織中MDA含量升高，LIG 干預(yù)組減少了MDA 的產(chǎn)生；通過(guò)探索LIG 抑制大腦抗氧化應(yīng)激的機(jī)制試驗(yàn)，結(jié)果表明LIG可能通過(guò)抑制絲氨酸-酪氨酸激酶（Akt）/轉(zhuǎn)錄因子（FoxO1）通路發(fā)揮抗氧化作用。

2.2 抑制神經(jīng)炎癥作用 神經(jīng)炎癥發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和腦感染的反應(yīng)中，是中樞神經(jīng)疾病的一個(gè)顯著的病理學(xué)特征，神經(jīng)炎癥發(fā)生時(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞被激活，血腦屏障完整性被破壞，伴隨大量促炎癥因子如細(xì)胞因子、黏附因子等的釋放，從而產(chǎn)生細(xì)胞毒性，引起神經(jīng)損傷。星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞是介導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)先天免疫的主要細(xì)胞。由小膠質(zhì)細(xì)胞或星形膠質(zhì)細(xì)胞激活介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥存在多種神經(jīng)退行性疾病，如阿爾茨海默病和帕金森病等。激活的膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)釋放促炎介質(zhì)，如腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、一氧化氮（NO）等，這些細(xì)胞因子都參與了神經(jīng)炎癥的進(jìn)程，最終導(dǎo)致神經(jīng)元的死亡［15］。

劉曉嬌等［16］研究顯示，LIG 干預(yù)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥小鼠，與模型組比較，LIG 組細(xì)胞分泌NO 顯著減少（P＜0.05 或 P＜0.01)，TNF-α、IL-6、一氧化氮合成酶（iNOS）的表達(dá)均明顯下調(diào)（P＜0.05）；LIG能顯著降低小鼠海馬區(qū)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、TNF-α 的表達(dá)（P＜0.01），表明 LIG 能夠抑制 LPS 誘導(dǎo)的體外神經(jīng)炎癥。

Toll 樣受體（TLR）在免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）是參與炎癥的關(guān)鍵調(diào)控因子。TLR4/NF-κB 是腦內(nèi)神經(jīng)炎癥應(yīng)答重要通路之一［17］，TLR 信號(hào)的調(diào)節(jié)阻止一些促炎分子產(chǎn)生，增強(qiáng)免疫介質(zhì)的產(chǎn)生，是一種潛在的治療方法。史夢(mèng)琪等［18］研究顯示，LIG(10 mg/kg、20 mg/kg)干預(yù)LPS 誘導(dǎo)的炎癥大鼠，LIG（10 mg/kg、20 mg/kg）對(duì) LPS 誘導(dǎo)產(chǎn)生的 TNF-α 和膜輔蛋白-1（MCP-1）濃度有抑制作用，且與模型組比較，LIG（20 mg/kg）組有顯著差異（P＜0.05）；經(jīng) LIG 治療后的大鼠 TLR4 信號(hào)通路活性及 NF-κB 轉(zhuǎn)錄因子活性有明顯降低，PPARγ 轉(zhuǎn)錄因子活性有明顯提高，且LIG（20 mg/kg）組與LPS 組比較有顯著差異（P＜0.05、P＜0.01），結(jié)果表明 LIG 通過(guò)抑制TLR4/NF-κB 信號(hào)通路減輕LPS 誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥，并且提高PPARγ 的活性，也可抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路。

Li 等［5］采用腦內(nèi)注射自體血方法誘導(dǎo)小鼠腦出血模型，LIG（10 mg/kg）干預(yù)腦出血模型小鼠，通過(guò)免疫染色分析，與模型組比較，LIG（10 mg/kg）可明顯降低 GFAP、凋亡誘導(dǎo)因子（AIF-1）表達(dá)（P＜0.01），顯著下調(diào)了 TLR4、p-NF-kB p65、TNF-α 和 IL-6 的表達(dá)，結(jié)果表明LIG 可有效抑制炎癥介質(zhì)的表達(dá)和釋放，保護(hù)腦免受腦出血的損傷，且機(jī)制研究表明LIG（10 mg/kg）神經(jīng)保護(hù)作用與TLR4/NF-κB 信號(hào)通路的抑制有關(guān)。

2.3 抗凋亡作用 細(xì)胞凋亡是機(jī)體正常的生理現(xiàn)象，消除多余的組織并維護(hù)成熟組織的穩(wěn)態(tài)，當(dāng)發(fā)生大量細(xì)胞凋亡或不正常形式凋亡，將會(huì)影響機(jī)體的正常，在神經(jīng)系統(tǒng)上可能會(huì)表現(xiàn)為神經(jīng)元的損傷，引起神經(jīng)系統(tǒng)疾病。LIG 可通過(guò)降低促凋亡蛋白的表達(dá)，增加抑凋亡蛋白的表達(dá)，改善細(xì)胞抑制線粒體凋亡通路而產(chǎn)生保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用。Caspase 蛋白的激活在細(xì)胞凋亡中至關(guān)重要，涉及Bcl-2 原凋亡家族，可促進(jìn)細(xì)胞骨架蛋白和核酸的水解，因此減少細(xì)胞凋亡的主要方法是防止 Caspase 蛋白激活［19］。

Zhao 等［10］使用 LIG 治療 OGD/R 誘導(dǎo)的 PC12 細(xì)胞，與模型組比較，LIG 可增加Bcl-2、Beclin1 表達(dá)，降低 Bax 表達(dá)（P＜0.05 或 P＜0.01），結(jié)果表明 LIG 通過(guò)上調(diào)Bcl-2 和下調(diào)Bax 表達(dá)抑制OGD/R 誘導(dǎo)的PC12 細(xì)胞凋亡。

Gao 等［20］用 Aβ25-35干預(yù) SH-SY5Y 細(xì)胞構(gòu)建阿爾茨海默病細(xì)胞模型，LIG 濃度在 200～400 μmol/L 時(shí)，細(xì)胞活性顯著下降，LIG 濃度為 12.5、25 和 50 μmol/L時(shí)顯著增強(qiáng)細(xì)胞活性，通過(guò)細(xì)胞染色試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LIG 可減輕Aβ25-35誘導(dǎo)的SH-SY5Y 細(xì)胞的形態(tài)損傷，有效減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生，表明LIG 通過(guò)抑制葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白 78（GRP78）/蛋白激酶 R 樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PERK）/核轉(zhuǎn)錄因子（CHOP）信號(hào)通路的過(guò)度激活上調(diào)了Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)了Bax 和Caspase-12 表達(dá)，從而起到抑制細(xì)胞凋亡作用。

Wu 等［7］研究顯示，LIG 處理 OGD/R 誘導(dǎo)的 HT-22細(xì)胞，顯著增加了MMP 和ATP，降低了ROS，進(jìn)一步誘導(dǎo)了線粒體裂變；LIG 干預(yù)MCAO 大鼠，表明LIG可激活A(yù)MPK 通路，進(jìn)而抑制Drp1 和Fis1 的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)線粒體裂變，從而保護(hù)缺血腦卒中神經(jīng)損傷。

Wu 等［21］研究顯示，LIG（1、2 和 4 μmol/L）干預(yù)OGD/R 誘導(dǎo)的海馬體神經(jīng)元，細(xì)胞凋亡率分別為25.59%、21.54%和17.20%，而模型組的細(xì)胞凋亡率為32.73%，LIG 干預(yù)組 Bax/Bcl-2 比例降低，表明 LIG 通過(guò)激活PI3-K/Akt 信號(hào)通路抑制OGD/R 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；LIG 干預(yù)缺血再灌注（I/R）大鼠，LIG（20 mg/kg）組明顯減低腦梗死體積，減輕I/R 所致的腦水腫，神經(jīng)功能評(píng)分明顯降低，并且體內(nèi)海馬體神經(jīng)元核仁及其膜保持完好，結(jié)果表明LIG 在減輕腦梗死體積、神經(jīng)損傷、海馬體神經(jīng)元損傷方面具有神經(jīng)保護(hù)作用。

2.4 改善血腦屏障通透性 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，BBB 存在于血液和腦之間，能夠選擇性地阻止有害物質(zhì)進(jìn)入大腦，對(duì)其內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要作用；BBB 結(jié)構(gòu)和功能的完整性與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)，其完整性的破壞通常是臨床癥狀出現(xiàn)之前首先發(fā)生的病理改變，參與疾病的發(fā)生、發(fā)展，并影響治療預(yù)后［22-23］。

Wu 等［24］研究顯示，與模型組比較，LIG（5、10 和20 μmol/L，24 h）干預(yù)組抑制了 OGD 誘導(dǎo)的缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1α）和 VEGF 的表達(dá)（P＜0.01），顯著抑制了 OGD 誘導(dǎo)的 HIF-1α 和 mRNA 的上調(diào)，抑制了水通道蛋白 4（AQP-4）的表達(dá)（20 μmol/L，P＜0.01）；LIG（20 μmol/L）可抑制OGD 誘導(dǎo)的細(xì)胞旁通透性增加（P＜0.01），結(jié)果表明LIG 容易穿過(guò)血腦屏障，可通過(guò)抑制 HIF-1、VEGF 和 AQP-4 表達(dá)，通過(guò)抑制 HIF/VEGF通路降低OGD 誘導(dǎo)的體外血腦屏障的通透性。

鼻腔給藥是一種潛在的給藥途徑，可以將藥物轉(zhuǎn)移到大腦，具有高生物利用度的特點(diǎn)。Li 等［8］研究顯示，LIG 可防止缺血損傷后的BBB 破壞，與模型組比較，LIG 鼻內(nèi)預(yù)處理可顯著降低MCAO 大鼠的伊文思藍(lán)染料滲出量（P＜0.01）。

2.5 改善神經(jīng)元功能 LIG 通過(guò)抑制乙酰膽堿酯酶的活性和增加膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性，改善東莨菪堿所致小鼠記憶功能損傷；還可通過(guò)抗氧化及增加類膽堿功能活性對(duì)慢性腦缺血再灌注導(dǎo)致的認(rèn)知缺陷和腦損傷起到保護(hù)作用。

Xu 等［25］連續(xù)使用 LIG（10 mg/kg、40 mg/kg）8周干預(yù)APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠，莫里斯迷宮和Y 形迷宮試驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組比較，LIG（10 mg/kg、40 mg/kg）APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠的記憶缺陷得到了改善（莫里斯迷宮：P＜0.05，P＜0.05，Y 形迷宮：P＜0.05，P＜0.05）；從 LIG（10 mg/kg、40 mg/kg）干預(yù)的小鼠海馬和皮質(zhì)分離的線粒體顯示腦內(nèi)ATP 水平升高，細(xì)胞色素C 氧化酶（CCO）和琥珀酸脫氫酶（SDH）活性增加，增強(qiáng)PSD-95、突觸素（SYN）和 SYN1 的表達(dá)，表明 LIG（10 mg/kg、40 mg/kg）可改善 APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠線粒體動(dòng)力學(xué)和形態(tài)學(xué)問(wèn)題，減輕線粒體功能障礙，保護(hù)腦突觸，降低大腦中Aβ 水平，改善APP/PS1 小鼠記憶缺失。

Kuang 等［26］研究顯示，使用 LIG 干預(yù) APP/PS1 轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，行為測(cè)試表明，與對(duì)照組比較，長(zhǎng)期服用LIG（30 mg/kg，14 周）明顯增強(qiáng)了小鼠的短期記憶（P＜0.05）和長(zhǎng)期記憶（P＜0.05）；免疫組化分析試驗(yàn)結(jié)果表明LIG 可預(yù)防APP/PS1 小鼠模型神經(jīng)元丟失。

2.6 其他 藁本內(nèi)酯除上述神經(jīng)保護(hù)作用外，還可通過(guò)其他途徑對(duì)神經(jīng)損傷起到保護(hù)作用。自噬是降解和清除有毒蛋白質(zhì)的重要途徑，腦內(nèi)自噬-溶酶體系統(tǒng)缺陷是阿爾茨海默病神經(jīng)系統(tǒng)疾病的可能病因之一［27］。Gao 等［20］研究用 Aβ25-35干預(yù) SH-SY5Y 細(xì)胞構(gòu)建阿爾茨海默病細(xì)胞模型，LIG 治療后降低了LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值和選擇性自噬接頭蛋白（P62/SQSTM1）的表達(dá)，顯著上調(diào)溶酶體酸度和組織蛋白酶D 的表達(dá)，挽救溶酶體功能，促進(jìn)自噬通量。LIG 可調(diào)節(jié)自噬-溶酶體通路，改變?nèi)苊阁w功能，促進(jìn)自噬通量發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

Klotho 是一種抑制衰老的基因，其編碼一種蛋白質(zhì)，在大腦海馬和脈絡(luò)膜、腎臟、眼睛中表達(dá)，這種蛋白質(zhì)可能起到神經(jīng)保護(hù)因子的作用。Long 等［14］研究利用立體定位技術(shù)和慢病毒系統(tǒng)成功下調(diào)了Klotho在BCCAO 后小鼠脈絡(luò)膜叢中的表達(dá)，LIG 干預(yù)后，經(jīng)免疫組織化學(xué)測(cè)定法測(cè)定發(fā)現(xiàn)LIG 可上調(diào)Klotho 在脈絡(luò)膜叢中的表達(dá)，經(jīng)免疫分析表明Klotho 的下調(diào)可減弱LIG 對(duì)BCCAO 后小鼠CA1 和Cpu 區(qū)域神經(jīng)元的保護(hù)作用，提示Klotho 表達(dá)上調(diào)有助于LIG 對(duì)缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)。

促生長(zhǎng)因子（IGF-1）信號(hào)通路誘導(dǎo)PI3-K 的激活，進(jìn)而誘導(dǎo)Akt/mTOR，下調(diào)mTOR 活性，激活自噬，清除錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)，包括 Aβ 斑塊［28］。Kuang等［26］研究顯示 LIG 可顯著減少 APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠中Akt 和mTOR 的表達(dá)；并通過(guò)小干擾RNA（siRNA）敲除Klotho 基因表達(dá)顯著增加APP/PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠的IGF-1R 磷酸化，增加了Akt 和mTOR的磷酸化，結(jié)果表明抑制Klotho 基因表達(dá)可導(dǎo)致LIG介導(dǎo)的IGF-1 通路抑制消失，這表明LIG 對(duì)IGF-1通路的抑制是通過(guò)上調(diào)內(nèi)源性Klotho 介導(dǎo)的。

成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)與周圍神經(jīng)系統(tǒng)不同，不能自行修復(fù)，因此也可通過(guò)干細(xì)胞移植達(dá)到修復(fù)目的，最終達(dá)到治療目的。Chi 等［29］研究顯示經(jīng) LIG 預(yù)處理的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞植入腦卒中小鼠的治療效果優(yōu)于未經(jīng)LIG 預(yù)處理的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞植入腦卒中小鼠，且LIG 濃度為2.5 μg/ml 為最佳濃度，既防止對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制，又增加神經(jīng)元分化促進(jìn)基因表達(dá)，抑制免疫反應(yīng)；脂肪干細(xì)胞移植和LIG 注射聯(lián)合治療對(duì)中風(fēng)小鼠的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)和卒中后恢復(fù)也有改善，表明LIG 還有助于提高腦卒中干細(xì)胞治療。

苯酞類成分是傘形科植物的特征性成分之一。LIG 具有預(yù)防和治療神經(jīng)損傷的前景，苯酞類成分丁苯酞最初是從傘形科植物芹菜籽中提取而得，其制劑在治療缺血性腦卒中疾病療效顯著［30］。也有研究表明，對(duì)其他神經(jīng)損傷疾病有潛在的應(yīng)用前景［31］。研究［5］顯示，LIG 的代謝物洋川芎內(nèi)酯H、洋川芎內(nèi)酯Ⅰ具有神經(jīng)保護(hù)作用。Zhang 等［32］研究對(duì) LIG 進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成高度穩(wěn)定的LIG 衍生物，并用LIG 衍生物干預(yù)大鼠，口服 LIG 衍生物（90 mg/kg、45 mg/kg）的絕對(duì)生物利用度分別為72.57%和83.97%；組織分布試驗(yàn)表明，LIG 衍生物易通過(guò)血腦屏障，廣泛分布在各個(gè)器官；并通過(guò)小鼠的急性毒性試驗(yàn)對(duì)LIG 衍生物進(jìn)行了初步的安全性評(píng)價(jià)，試驗(yàn)結(jié)果表明LIG 衍生物劑量為5.0 g/kg 時(shí)，小鼠健康狀況良好，主要臟器未見組織病理改變。此研究為L(zhǎng)IG 的充分利用奠定了基礎(chǔ)。Zou 等［33］研究顯示苯酞類衍生物 CD21 干預(yù) MCAO 大鼠，在12 h 治療時(shí)間窗以劑量依賴方式顯著改善梗死體積和神經(jīng)功能缺損，給予CD21［5 mg/（kg/d）］24 h內(nèi)可顯著減輕其病理?yè)p傷，抑制PRX1 表達(dá)，降低TLR4/NF-κB 活化，抑制炎癥反應(yīng)，CD21 在缺血性腦卒中的治療中具有一定的神經(jīng)保護(hù)和抗炎作用，且具有較寬的時(shí)間窗。Li 等［34］研究含川芎的通竅活血湯肝血干預(yù)腦缺血模型大鼠，與模型組比較，給藥通竅活血湯上調(diào)了閉鎖小帶蛋白（ZO-1）（P＜0.05；3、6和 12 g/kg）、緊密連接蛋白（occludin）（P＜0.01；3、6和12 g/kg）、血腦屏障緊密連接蛋白（Claudin-5）（P＜0.01；6 和 12 g/kg）的表達(dá)，下調(diào)AQP-4（P＜0.01）和 MMP-9（P＜0.05）的表達(dá)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明通竅活血湯可保護(hù)海馬體神經(jīng)元，減少緊密連接的開放，降低血腦屏障的通透性；在腦缺血模型大鼠腦脊液中檢測(cè)到藁本內(nèi)酯、麝香酮和羥基紅花A，表明這些化合物為通竅活血湯保護(hù)血腦屏障的主要活性成分。這些試驗(yàn)結(jié)果提示含有苯酞類成分的當(dāng)歸、川芎等傘形科植物在神經(jīng)保護(hù)方面存在潛在的治療價(jià)值。

綜上，LIG 在體內(nèi)試驗(yàn)、體外試驗(yàn)以及不同生物或細(xì)胞模型中均表現(xiàn)出不同程度的神經(jīng)保護(hù)作用，LIG神經(jīng)保護(hù)作用并不是單一的，可以調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)中多個(gè)細(xì)胞因子和通路，共同作用于神經(jīng)損傷，從而改善神經(jīng)損傷，起到治療作用。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)LIG 保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)的報(bào)道主要集中在抑制氧化應(yīng)激、抑制炎癥反應(yīng)、神經(jīng)保護(hù)作用等方面，也是今后對(duì)LIG 研究的重點(diǎn)所在，這些機(jī)制闡明LIG 對(duì)缺血性腦卒中、阿爾茨海默病等神經(jīng)損傷良好的調(diào)節(jié)與治療作用，是一種潛在的神經(jīng)損傷治療藥物。本文綜述了LIG 在神經(jīng)損傷保護(hù)作用方面的作用，利用LIG 在治療神經(jīng)損傷疾病的開發(fā)和發(fā)展提供了基礎(chǔ)理論依據(jù)，同時(shí)也為含LIG 的中藥在神經(jīng)損傷方面的開發(fā)應(yīng)用提供參考。