張勝蘭， 伍 洲， 劉健鋒， 楊 洪， 楊茂發(fā)*

(1.貴州大學 昆蟲研究所/貴州山地農(nóng)業(yè)病蟲害重點實驗室，貴州 貴陽 550025； 2.貴州大學 煙草學院，貴州 貴陽 550025； 3.貴州煙草投資管理有限公司，貴州 貴陽 550000)

0 引言

【研究意義】斜紋夜蛾(Spodopteralitura)屬鱗翅目夜蛾科，屬間歇性發(fā)生的世界性害蟲，主要分布在亞洲和大洋洲的溫帶和亞熱帶地區(qū)[1]，我國各地均有分布，危害嚴重[2]。該蟲食性雜，寄主范圍廣，寄主植物多達389種，包括玉米、高粱及煙草等[3]，對煙草而言既影響產(chǎn)量也影響質量[4]。該蟲具有世代重疊、遷飛性、暴食性和間歇性爆發(fā)的特點[5]，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中危害嚴重且較難防治的重要害蟲之一[6]。開展斜紋夜蛾的防治對保護農(nóng)作物生長，提高產(chǎn)質量具有重要現(xiàn)實意義?！厩叭搜芯窟M展】斜紋夜蛾的防治方法主要集中在綠色防治[7]、生物防治[8]及化學防治[9]等。目前藥劑防治仍是防治斜紋夜蛾的有效手段[10]。王玲等[10-11]研究發(fā)現(xiàn)，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和蟲螨腈對斜紋夜蛾具有較好的防治效果。孫之潭等[12]研究發(fā)現(xiàn)，駱駝蓬種子提取物對斜紋夜蛾幼蟲的生長發(fā)育具有抑制作用，但其殺蟲效果并不明顯。程英等[13-14]研究發(fā)現(xiàn)，敵百蟲和聯(lián)苯菊酯，甲氰菊酯與氟鈴脲，氟鈴脲與甲維鹽，甲氰菊酯與乙酰甲胺磷，毒死蜱與阿維菌素等組合使用均對斜紋夜蛾具有明顯的增效作用；而其他農(nóng)藥的混用對斜紋夜蛾均表現(xiàn)為拮抗作用。程英等[14]研究發(fā)現(xiàn)，蠟蚧輪枝菌對斜紋夜蛾具有很好的防治效果?！狙芯壳腥朦c】在斜紋夜蛾藥劑防治實踐中，不合理的單一使用化學農(nóng)藥是致使其產(chǎn)生較強抗藥性的主要原因之一[14]，在一定程度上也極大地提高了斜紋夜蛾對多種化學農(nóng)藥產(chǎn)生交互抗性的可能性。生物農(nóng)藥是具有農(nóng)藥特性的生物活體或其產(chǎn)生的生理活性物質、轉基因產(chǎn)物，因此，其具有對人畜安全、環(huán)境兼容性好、易保護生物多樣性、不易產(chǎn)生抗性及來源廣泛等優(yōu)點[15]；但同時其也存在速效性差的缺點。高效生物農(nóng)藥的開發(fā)應用對人類健康、環(huán)境保護和農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展有極其重要的意義[16]，在生產(chǎn)上使用高效、低毒且對環(huán)境友好的農(nóng)藥是農(nóng)作物生產(chǎn)的必備條件[17]。前人對斜紋夜蛾的藥劑試驗大多采用化學農(nóng)藥，選擇5種生物農(nóng)藥和3種化學農(nóng)藥對斜紋夜蛾進行室內毒力測定的對比，篩選適宜生產(chǎn)上推廣應用的、防治斜紋夜蛾高效且安全的生物農(nóng)藥?！緮M解決的關鍵問題】采用室內毒力測定方法測定甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、苦參堿、短穩(wěn)桿菌、蘇云金桿菌及棉鈴蟲核型多角體病毒5種生物農(nóng)藥和高效氯氰菊酯、氯蟲苯甲酰胺及丁醚脲3種化學農(nóng)藥對斜紋夜蛾的室內毒殺效果，以期篩選適宜防治斜紋夜蛾高效、低毒且環(huán)境友好的殺蟲劑，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上防治斜紋夜蛾提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試昆蟲 斜紋夜蛾2齡幼蟲，由貴州大學昆蟲研究所提供。

1.1.2 藥劑 1) 生物農(nóng)藥。20億PIB/mL棉鈴蟲核型多角體病毒-懸浮劑(珠海市華夏生物制劑有限公司)、8 000 IU/μL蘇云金桿菌-懸浮劑(黑龍江省衛(wèi)星生物科技有限公司)、0.5%苦參堿-水劑(中國農(nóng)科院植保所廊坊農(nóng)藥中試廠)、100億孢子/mL短穩(wěn)桿菌-懸浮劑(鎮(zhèn)江潤宇生物科技開發(fā)有限公司)、5.7%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽-乳油(河北威遠生化農(nóng)藥有限公司)。2) 化學農(nóng)藥。4.5%高效氯氰菊酯-微乳劑(河北野田農(nóng)用化學有限公司)、50%丁醚脲-懸浮劑(上海滬聯(lián)生物藥業(yè)(夏邑)股份有限公司)、35%氯蟲苯甲酰胺-水分散粒劑(美國杜邦公司)。

1.1.3 人工飼料 飼料配方為黃豆粉80 g、麥麩粉80 g、酵母粉32 g、干酪素16 g、瓊脂粉16 g、山梨酸1.6 g、膽固醇0.16 g、肌醇0.16 g、維生素C 6.4 g、氯化膽堿0.8 g，自制。

1.1.4 儀器設備 人工氣候室，工作條件：濕度(27±1)℃，RH 75%±5%，光周期L∶D為14∶10。

1.2 方法

1.2.1 材料預處理 將采自貴州省遵義市煙草公司樂山科技園區(qū)煙田的斜紋夜蛾于貴州大學昆蟲研究所人工氣候室用人工飼料飼養(yǎng)3代以上，取2齡幼蟲備用。

1.2.2 試驗設計

1) 半致死濃度(LC50)的確定。按各藥劑說明書推薦用量結合文獻[18-26]的方法，用滅菌鑷子夾取斜紋夜蛾2齡幼蟲于配置各濃度藥液的培養(yǎng)皿(直徑9 cm，高2 cm)中浸泡2 s，取出放在濾紙上爬行風干后放于飼養(yǎng)盒飼養(yǎng)觀察，記錄幼蟲的死亡數(shù)，確定斜紋夜蛾的LC50。每個處理20頭幼蟲，5次重復，并以清水處理為空白對照(CK)。

2) 根據(jù)確定的LC50使用無菌水將8種農(nóng)藥分別稀釋成5個濃度(表1)。用滅菌鑷子夾取斜紋夜蛾2齡幼蟲于配置各濃度藥液的培養(yǎng)皿(直徑9 cm，高2 cm)中浸泡2 s，取出放在濾紙上爬行風干后放于飼養(yǎng)盒。每個處理20頭幼蟲，5次重復，以無菌水處理為對照。飼養(yǎng)盒置于人工氣候箱飼養(yǎng)，每24 h更換飼料，連續(xù)觀察7 d，記錄死亡數(shù)。用小毛筆輕輕觸摸蟲體，以幼蟲無力且不能正常爬行作為死亡記錄。

表1 供試藥劑及其使用濃度

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS的Probit擬合毒力回歸方程，計算各種藥劑對斜紋夜蛾的LC50和95%置信區(qū)間。采用SPSS 21.0進行數(shù)據(jù)分析。

死亡率=[(處理前活蟲數(shù)-處理后活蟲數(shù))/處理前活蟲數(shù)]×100%

校正死亡率=[(處理死亡率-對照死亡率)/(1-對照死亡率)]×100%

2 結果與分析

2.1 不同藥劑對斜紋夜蛾的毒力

2.1.1 生物農(nóng)藥 從表2看出，5種生物農(nóng)藥對斜紋夜蛾2齡幼蟲的LC50隨處理時間增加均呈減少趨勢，其相對毒力指數(shù)在處理24 h、48 h和72 h時均為甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>苦參堿>短穩(wěn)桿菌>蘇云金桿菌>棉鈴蟲核型多角體病毒，即甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對斜紋夜蛾的毒力最高，其各時段的LC50分別為75.89 mg/L、8.74 mg/L和4.16 mg/L；隨時間增加其相對毒力指數(shù)呈下降趨勢。蘇云金桿菌的相對毒力指數(shù)隨時間增加呈先增后減趨勢，苦參堿呈穩(wěn)定不變趨勢，短穩(wěn)桿菌呈增大趨勢。棉鈴蟲核型多角體病毒的相對毒力指數(shù)均最低，但隨時間增加其相對毒力指數(shù)呈增大趨勢。

表2 5種生物農(nóng)藥對斜紋夜蛾2齡幼蟲的毒力

2.1.2 化學農(nóng)藥 從表3看出，3種化學農(nóng)藥對斜紋夜蛾2齡幼蟲的LC50隨處理時間增加均呈減少趨勢，其相對毒力指數(shù)在處理24 h、48 h和72 h時均為高效氯氰菊酯>氯蟲苯甲酰胺>丁醚脲，高效氯氰菊酯對斜紋夜蛾敏感品系毒力最高，各時段其LC50分別為3.34 mg/L、1.32 mg/L和1.09 mg/L，隨時間增加其相對毒力指數(shù)呈下降趨勢；氯蟲苯甲酰胺的相對毒力指數(shù)穩(wěn)定不變；丁醚脲的相對毒力指數(shù)最低，呈先增后減趨勢。

表3 3種化學農(nóng)藥對斜紋夜蛾2齡幼蟲毒力

2.2 8種藥劑不同濃度對斜紋夜蛾的毒殺效果

由表4看出，不同藥劑濃度越高、處理時間越長，對斜紋夜蛾2齡幼蟲的毒殺效果越強。

表4 8種農(nóng)藥不同濃度對斜紋夜蛾2齡幼蟲的毒殺作用

2.2.1 低濃度 用低濃度的藥劑處理斜紋夜蛾2齡幼蟲，7 d后雖對斜紋夜蛾均有一定的毒殺效果，死亡率為12.37%～23.71%，但均未達50%；棉鈴蟲核型多角體病毒、蘇云金桿菌、苦參堿及氯蟲苯甲酰胺較短穩(wěn)桿菌、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、高效氯氰菊酯和丁醚脲對斜紋夜蛾2齡幼蟲的毒殺作用死亡率差異顯著，表現(xiàn)為氯蟲苯甲酰胺>苦參堿>棉鈴蟲核型多角體病毒>蘇云金桿菌>甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>短穩(wěn)桿菌>高效氯氰菊酯>丁醚脲。

2.2.2 中濃度 用中濃度的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽處理斜紋夜蛾2齡幼蟲，3 d時死亡率已達58.76%；處理5 d時，棉鈴蟲核型多角體病毒、短穩(wěn)桿菌、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、高效氯氰菊酯、氯蟲苯甲酰胺的死亡率均>50%；處理7 d時各處理死亡率均>50%，其中，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和氯蟲苯甲酰胺處理斜紋夜蛾2齡幼蟲的死亡率達88.54%。氯蟲苯甲酰胺處理斜紋夜蛾2齡幼蟲的毒殺死亡率最高。

2.2.3 高濃度 用高濃度的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和高效氯氰菊酯處理斜紋夜蛾2齡幼蟲，2 d時的死亡率分別達91.83%和87.75%，較其他幾種藥劑處理斜紋夜蛾2齡幼蟲的毒殺死亡率差異顯著；短穩(wěn)桿菌的毒殺效果相對較低，但在處理3 d后死亡率達92.78%；處理5 d后，除蘇云金桿菌外其余7種藥劑處理的死亡率均為100%；蘇云金桿菌處理7 d后斜紋夜蛾2齡幼蟲的死亡率為96.85%。

3 討論

在貴州煙區(qū)，煙草斜紋夜蛾暴發(fā)期主要在5—8月[27]，此時烤煙處于生長期，對農(nóng)藥安全性要求高。農(nóng)藥是影響害蟲防治效果的重要因素之一，其藥效快和慢對害蟲的抑制效果有差異；低濃度達不到抑制效果，高濃度易造成害蟲產(chǎn)生抗藥性而再猖獗。

吳莉莉等[28]篩選防治番茄田棉鈴蟲的棉鈴蟲核型多角體病毒發(fā)現(xiàn)，藥后3 d的防效為48.18%，防效較好。該研究高濃度下藥后3 d時死亡率為57.73%，與吳莉莉等的研究結果接近。蘇云金桿菌屬典型的微生物農(nóng)藥，對鱗翅目、鞘翅目、雙翅目、膜翅目昆蟲及螨類、線蟲等均有殺蟲活性[29-33]。研究結果表明，蘇云金桿菌藥后72 h對煙草斜紋夜蛾的LC50為706.98 mg/L，與劉華梅等[33]研究的“不同蘇云金桿菌菌株對草地貪夜蛾均表現(xiàn)顯著地毒殺效果，在藥后7 d時LC50為0.07～3.38 μg/g”結果存在差異，推測與處理時間長短及2種鱗翅目昆蟲的防御機制不同有關。該研究中濃度下苦參堿對煙草斜紋夜蛾校正死亡率分別為8.08%～69.79%；徐潔等[16]研究報道苦參堿和蘇云金桿菌對煙草斜紋夜蛾室內藥效試驗，施藥后1～8 d，苦參堿校正死亡率為48.3～57.0%，蘇云金桿菌校正死亡21.7%～66.7%，處理3 d后無明顯上升；二者研究結果有差異，推測是由不同地區(qū)害蟲的敏感性存在差異所致；而蘇云金桿菌對煙草斜紋夜蛾校正死亡率為17.17%～50.00%，與其研究結果一致。該研究還發(fā)現(xiàn)，苦參堿和蘇云金桿菌在處理前3 d死亡率較低，在高濃度處理條件下蘇云金桿菌處理7 d時死亡率達96.85%，苦參堿處理5 d時死亡率達100%。說明生物農(nóng)藥見效慢，但一定時間后也能達到一定防治效果。王湘瓊等[34]研究短穩(wěn)桿菌防治水稻稻縱卷葉螟推薦使用的劑量與該試驗濃度接近，但應注意田間用藥與室內毒力測定的環(huán)境條件有一定差異。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(簡稱甲維鹽)是一種易降解的新型抗生素類生物源殺蟲劑，具有高效、低毒、低殘留的特點，對多種鱗翅目害蟲具有良好的殺蟲效果[35-36]。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對果樹上蘋果蠹蛾施藥3 d時防效達90%以上[37-38]；其對甘藍甜菜夜蛾[26]、草地貪夜[27]及其他幾種鱗翅目害蟲[20]也有較好的防治效果，其中對甘藍甜菜夜蛾在處理7 d后死亡率為82.26%，該試驗斜紋夜蛾毒力測定時中濃度藥劑的敏感性相似，藥劑處理7 d后校正死亡率達88.54%，與前人研究結果一致。全林發(fā)等[39]研究發(fā)現(xiàn)，在試驗設計濃度下甲維鹽的防效顯著高于其他幾種農(nóng)藥，在高濃度處理藥后3 d死亡率達100%；氯氰菊酯處理桃小食心蟲初孵幼蟲24 h的LC50為0.812 mg/L，該試驗處理24 h后LC50為3.34 mg/L，與全林發(fā)[39]研究結果有一定差異，推測可能與同種藥劑對不同害蟲的敏感性不同有關。試驗中丁醚脲高濃度處理4 d時的防治效果達100%，與胡曉斌等[21]研究結果“丁醚脲防治小菜蛾田間試驗5 d時的防治效果為76.31%”存在差異，原因在于室內與田間處理時溫濕度等環(huán)境因素影響。該試驗利用氯蟲苯甲酰胺處理后結果與吳瑋等[40]研究氯蟲苯甲酰胺防治甜菜夜蛾幼蟲研究結果有一定差異，可能與不同類型害蟲的解毒機制及環(huán)境條件不同有關。應德文[22]用5%氯蟲苯甲酰胺懸浮劑以10 mL/667m2濃度田間防治斜紋夜蛾，施藥3 d后，防效達93.60%。本試驗高濃度處理藥后3 d時死亡率也達95.87%，說明室內測定與田間實際防治效果有較好的相關性。

化學農(nóng)藥的使用不但會增強斜紋夜蛾的抗藥性，還造成農(nóng)殘和環(huán)境污染等問題。生物農(nóng)藥室內毒力測定結果可以為煙草田間防治斜紋夜蛾用藥選擇提供指導，但田間防治效果受用藥時間、蟲齡、處理方法以及氣候生態(tài)條件等因素的影響，不能完全代表田間的防治效果。采用新型環(huán)保的生物農(nóng)藥進行煙草害蟲防治是今后的發(fā)展方向，有待進一步深入研究。

4 結論

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對斜紋夜蛾處理72 h后毒力最高，LC50為4.16 mg/L；相同濃度下該藥劑處理的死亡率均顯著高于其他藥劑，在試驗設計低中低濃度(0.45 mg/L)、中濃度(11.4 mg/L)和高濃度(126.70 mg/L)3個濃度各時間點的中濃度和高濃度的死亡率均明顯高于其他農(nóng)藥，在低濃度處理7 d后死亡率達88.54%；高濃度處理3 d后死亡率達100%。利用化學農(nóng)藥氯蟲苯甲酰胺處理斜紋夜蛾72 h后LC50為300.36 mg/L，在中濃度(291.66 mg/L)藥劑處理后7 d后試蟲死亡率達88.54%；高濃度(1166.6 mg/L)處理后4 d后死亡率達100%。8種農(nóng)藥毒力測定比較，生物農(nóng)藥甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的防治效果高于其他藥劑，其防治效果與化學農(nóng)藥的防效較好，建議在斜紋夜蛾2齡幼蟲時進行防治，劑量為4.16～75.89 mg/L。