周 瑤，劉麗丹，孫慶業(yè)

(安徽大學(xué)資源與環(huán)境工程學(xué)院，合肥 230601)

【研究意義】近年來，隨著經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展和人類活動(dòng)的加劇，微量元素(包括重金屬)通過雨水淋溶、自然風(fēng)化等途徑進(jìn)入環(huán)境介質(zhì)，導(dǎo)致微量元素污染日益嚴(yán)重[1]。重金屬無法被環(huán)境中的微生物降解，卻可以通過食物鏈在其他生物體內(nèi)富集，形成生物放大效應(yīng)[2]。進(jìn)入環(huán)境中的微量元素不僅導(dǎo)致其在生物體內(nèi)積累，還會(huì)對(duì)生物體組織結(jié)構(gòu)造成破壞[3]；同時(shí)，微量元素通過食物鏈進(jìn)入人體，對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害[4]。煤矸石是采煤和洗煤過程中產(chǎn)生的固體廢物[5]，露天堆放不僅占用土地資源，在雨水的沖刷和浸泡下，煤矸石中被風(fēng)化的微量元素還會(huì)進(jìn)入周邊土壤環(huán)境造成污染[6]，進(jìn)而隨地表徑流進(jìn)入水體，并通過離子交換、吸附、絡(luò)合、絮凝、共沉淀等作用，最終絕大部分進(jìn)入河床表層沉積物中[7]，從而對(duì)底棲生物造成巨大威脅。【前人研究進(jìn)展】目前，國內(nèi)外已有很多關(guān)于蚌體內(nèi)重金屬積累的報(bào)道。Lukashev[8]發(fā)現(xiàn)，與未受污染河流相比，生活于受生活廢水污染河流中的鴨嘴無齒蚌(Anodontaanatina)各組織中Cu和Zn的含量均較高；孫磊等[9]在以野生背角無齒蚌為對(duì)象進(jìn)行太湖重金屬淡水貝類研究時(shí)發(fā)現(xiàn)背角無齒蚌可用于檢測淡水中持久性污染物的生物積累；翁煥新等[10]研究表明，重金屬在牡蠣(Crassostreavirginica)中的生物積累是牡蠣自身的新陳代謝以及環(huán)境等諸多因素綜合影響的結(jié)果。【本研究切入點(diǎn)】褶紋冠蚌(Cristariaplicata)為軟體動(dòng)物門(Mollusca)雙殼綱蚌科的軟體動(dòng)物，廣泛分布于我國多個(gè)省區(qū)，在安徽省兩淮采煤沉陷區(qū)水體中亦有分布。由于褶紋冠蚌具有高濾水速率以及較強(qiáng)的重金屬富集能力，因此常被用來進(jìn)行重金屬污染生物監(jiān)測研究[11]。沉積物是水體中重金屬等污染物的重要匯聚地[12]，褶紋冠蚌營底棲生活，作為水生生態(tài)系統(tǒng)食物鏈的初級(jí)消費(fèi)者，不僅是初級(jí)生產(chǎn)者的濾食者，也是高級(jí)消費(fèi)者的食物來源，是重金屬污染的首要受害者[13]。重金屬在蚌體內(nèi)會(huì)與巰基蛋白結(jié)合，改變蛋白質(zhì)構(gòu)象，對(duì)蚌的組織結(jié)構(gòu)有較大的危害[14-15]。【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究以褶紋冠蚌為研究對(duì)象，通過模擬自然環(huán)境進(jìn)行水池養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)，探討煤矸石對(duì)褶紋冠蚌斧足和外套膜中微量元素含量及組織結(jié)構(gòu)的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

養(yǎng)殖試驗(yàn)在安徽大學(xué)(磬苑校區(qū))的養(yǎng)殖池(每個(gè)養(yǎng)殖池的容積為9×103L)內(nèi)進(jìn)行。模擬采煤沉陷區(qū)環(huán)境，各養(yǎng)殖池內(nèi)平鋪20 cm的風(fēng)干土壤，浸泡，待土壤軟化后，靜置1周，放水至1 m深，投放銅銹環(huán)棱螺、圓頂珠蚌等水生動(dòng)物，馬來眼子菜(Potamogetonmalaianus)、苦草(Vallisineriaspiralis) 等水生植物，構(gòu)造簡單的水生系統(tǒng)。待池內(nèi)生物穩(wěn)定后(約30 d)，將風(fēng)干后的煤矸石(采自謝橋煤礦)按照重量梯度0 kg(A池)、60 kg(B池)、140 kg(C池)稱重并裝入網(wǎng)兜，于2019年9月分別投入3個(gè)養(yǎng)殖池中，并分別投入25只大小相似的褶紋冠蚌。投入煤矸石梯度的設(shè)定是基于前期對(duì)謝橋煤礦采煤沉陷區(qū)的實(shí)地調(diào)查，以沉陷區(qū)塌陷面積、塌陷深度以及岸邊棄置煤矸石量為根據(jù)。所投放的褶紋冠蚌采自安徽省巢湖同一區(qū)域，投放之前先在室內(nèi)用清潔的自來水暫養(yǎng)1周。

1.2 樣品采集及預(yù)處理

養(yǎng)殖池內(nèi)的沉積物樣本于2019年9月(褶紋冠蚌投放之前)和2020年9月(采集褶紋冠蚌樣品時(shí))分別采集1次，各養(yǎng)殖池均采集3個(gè)平行?，F(xiàn)場用塑料鍬挖取200 g沉積物裝于潔凈的聚乙烯封口袋內(nèi)，并立即放入存有冰袋的約4 ℃保溫箱內(nèi)保存。帶回實(shí)驗(yàn)室后，樣品先經(jīng)真空冷凍干燥，然后用瑪瑙研缽研磨，過尼龍篩，用于化學(xué)性質(zhì)的分析。

每個(gè)養(yǎng)殖池各采集10～15只褶紋冠蚌樣本裝入桶內(nèi)，帶回實(shí)驗(yàn)室后用自來水清洗除去蚌殼表面泥土。清洗后的褶紋冠蚌用塑料刀具剖開蚌殼，分別獲取外套膜和斧足。將取得的外套膜和斧足一部分保存于裝有4%中性緩沖多聚甲醛固定液中固定，用于切片制作；剩余部分裝于潔凈的聚乙烯封口袋內(nèi)，經(jīng)真空冷凍干燥、瑪瑙研缽磨碎后，用于微量元素測定。

1.3 沉積物常規(guī)指標(biāo)測定

氨氮的測定方法采用苯酚—次氯酸鈉分光光度法；pH檢測使用pH計(jì)(pHS-3C)[m(土)∶m(水)=1 ∶5][16]；總氮采用高氯酸—硫酸消化法處理后，使用凱氏定氮儀測定[17]；總磷采用鉬銻抗分光光度法(Standard Measurement and Test，SMT)測定[18]；有機(jī)質(zhì)采用燒失量法測定[19]；為了保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，每個(gè)樣品做3個(gè)平行樣，并且保證平行分析誤差<5%，最終取平行樣的平均值進(jìn)行分析。

1.4 微量元素含量分析

1.4.1 養(yǎng)殖池沉積物微量元素檢測 養(yǎng)殖池沉積物中Cu、Zn、As、Pb、Cd含量采用HCl-HNO3-HF-HClO4消解[20]，電感耦合等離子體質(zhì)譜儀[17](ICAPQ，Thermo Fisher，美國)測定，以國家土壤和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GSS-9 和 GSS-26)進(jìn)行質(zhì)量控制，各元素加標(biāo)回收率在 91%～105%，為提高精確度和減小隨機(jī)誤差，所有樣品分析均重復(fù)3次(取其平均值)。

1.4.2 斧足和外套膜微量元素檢測 置樣品于聚四氟乙烯消解罐中，加入6 mL濃硝酸和2 mL 30%過氧化氫，加蓋靜置1 h后置于120 ℃電熱板上進(jìn)行消解，消解后的樣品用電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICAPQ，Thermo Fisher，美國)測定，插入扇貝生物成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[GBW10024(GSB-15)]進(jìn)行質(zhì)量控制，各元素加標(biāo)回收率在90%～110%，為了提高結(jié)果的精確度和隨機(jī)誤差，所測生物樣品均設(shè)置3組平行，取其平均值進(jìn)行分析。

1.5 斧足和外套膜組織切片制作

取固定后的斧足和外套膜生物組織進(jìn)行洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋操作，采用石蠟切片技術(shù)進(jìn)行切片，于光學(xué)顯微鏡下觀察、拍照。

1.6 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用Excel 2016對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行初步整理以及計(jì)算，方差分析用 SPSS 21.0 軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 養(yǎng)殖池沉積物的理化性質(zhì)

從表1可知，2020年9月，試驗(yàn)池內(nèi)沉積物中總氮、總磷和有機(jī)質(zhì)含量均有所增加，試驗(yàn)組沉積物pH值略有升高。

從表2可以看出，投加煤矸石并未對(duì)養(yǎng)殖池中沉積物的Cu、Cd含量產(chǎn)生影響，但隨著煤矸石投加量的增加，沉積物中Zn、As和Pb含量逐漸增加，土壤中微量元素的含量表現(xiàn)為Zn>As>Pb>Cu>Cd。

2.2 褶紋冠蚌不同組織重金屬含量

貝類對(duì)重金屬具有較強(qiáng)的富集能力。斧足是斧足綱生物進(jìn)行運(yùn)動(dòng)的組織，斧足受損可直接導(dǎo)致貝類死亡；外套膜也稱鰓腔，通常排泄孔、生殖孔和肛門都開口于外套腔，有便于水流進(jìn)出，輔助攝食、呼吸、生殖、運(yùn)動(dòng)等功能，在褶紋冠蚌的生命中占有重要地位。從表3可以看出，斧足和外套膜中5種微量元素含量均表現(xiàn)為C>B>A，表明斧足和外套膜中5種微量元素含量隨著養(yǎng)殖池中投加的煤矸石數(shù)量的增加而增加，其中煤矸石投加量為140 kg(C池)時(shí)，斧足和外套膜中5種微量元素含量與對(duì)照組(A池)均有顯著差異。煤矸石投加量為60 kg(B池)時(shí)，斧足中Zn、Pb和Cd含量與對(duì)照組(A池)存在差異；外套膜中的Cd含量也顯著高于A池。說明，煤矸石的加入可導(dǎo)致褶紋冠蚌外套膜和斧足中微量元素含量增加。

本研究中，無論是斧足還是外套膜，5種微量元素的含量均表現(xiàn)為Zn>As>Cu>Pb>Cd，斧足和外套膜中Zn、As和Cd含量變化和沉積物一致。表明褶紋冠蚌組織中不同元素含量的差異主要受外界環(huán)境影響。

表1 養(yǎng)殖池沉積物理化指標(biāo)質(zhì)量濃度

表2 養(yǎng)殖池沉積物重金屬含量

表3 褶紋冠蚌不同組織中微量元素含量

圖1 褶紋冠蚌斧足組織切片F(xiàn)ig.1 Tissue section of axe-foot of Cristaria plicata

MF:肌纖維;IE:內(nèi)表皮;OE:外表皮;BR:空白區(qū)域;BV:血管;Ec:上皮細(xì)胞;Va:空泡;CM:環(huán)形肌肉層;Cb:細(xì)胞核MF：Myofiber;IE:Endocuticle；BR:Blank area；BV:Blood vessel；Ec:Epithelial cell；Va：Vacuole；CM：Annular muscle layer；Cb:Cell nucleus圖2 褶紋冠蚌外套膜組織切片F(xiàn)ig.2 Section of mantle tissue of Cristaria plicata

本研究中，外套膜中5種微量元素含量均高于斧足。說明褶紋冠蚌的不同組織對(duì)進(jìn)入體內(nèi)的重金屬的積累量明顯不同。

2.3 褶紋冠蚌不同組織結(jié)構(gòu)變化

2020年9月，B池和C池中部分蚌體內(nèi)有粘液排出，兩瓣殼微微張開，捏動(dòng)雙殼時(shí)有略微松動(dòng)；解剖過程中觀察到，部分蚌體內(nèi)的內(nèi)臟團(tuán)顏色呈淺褐色，斧足略微腫脹，鰓由健康的淡黃色變?yōu)榘迭S色。說明煤矸石的投加已經(jīng)對(duì)褶紋冠蚌生命活動(dòng)產(chǎn)生了影響，這可能與煤矸石中某些污染物質(zhì)釋放到試驗(yàn)水體有關(guān)。

對(duì)照組斧足的表皮細(xì)胞呈柱狀，頂端有許多排列整齊的纖毛，形成了略有規(guī)則的褶皺(圖1)。B組表皮下組織層變薄，肌束間間距變大，與對(duì)照組相比沒有顯著變化。與對(duì)照組相比，C組斧足表皮形成了較不規(guī)則的褶皺，表皮下細(xì)胞核染色變淺，可能是細(xì)胞減少導(dǎo)致；肌束松散不規(guī)則，空泡現(xiàn)象明顯，并且表皮下肌纖維斷裂明顯，排列混亂。由此可見，煤矸石投加量越大，褶紋冠蚌斧足病理損傷程度越大。

對(duì)照組褶紋冠蚌表皮有規(guī)則的褶皺(圖2)，表皮下方細(xì)胞核染色深，細(xì)胞聯(lián)系緊密且排列規(guī)則，肌纖維細(xì)長，肌肉層在邊緣膜兩側(cè)厚度不一，組織間有許多空泡。B組褶紋冠蚌上皮褶皺趨于平直，肌纖維排列不規(guī)則，少量結(jié)締組織斷裂形成空白區(qū)域；C組褶紋冠蚌肌纖維斷裂明顯且排列混亂，肌纖維較短，組織間空泡變少，內(nèi)表皮細(xì)胞核排列不規(guī)則，有的破裂脫落。

B、C池中的褶紋冠蚌組織間損傷程度均表現(xiàn)為外套膜大于斧足，結(jié)合前述2.2中得到的結(jié)論：外套膜中5種微量元素含量均高于斧足，表明組織中Cu、Zn、As、Pb、Cd的積累可能是導(dǎo)致斧足和外套膜出現(xiàn)組織病變的因素之一。

3 討 論

3.1 沉積物理化性質(zhì)和重金屬變化

采集褶紋冠蚌樣品時(shí)，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖池的沉積物中有少量蚌、螺和植物的殘骸，水生生物死亡殘骸的累積會(huì)導(dǎo)致沉積物中的有機(jī)質(zhì)、總氮、總磷含量升高[21]；另外投加到養(yǎng)殖池中的煤矸石也含有有機(jī)質(zhì)及含氮和磷的化合物，煤矸石中這些物質(zhì)的釋放也會(huì)導(dǎo)致沉積物中有機(jī)質(zhì)、總氮和總磷增加。在煤矸石長期堆積的過程中，經(jīng)過長期的氧化、降雨的洗刷以及微生物對(duì)各種礦物的分解和溶解作用，使難溶于水的礦物質(zhì)變成較易被土質(zhì)吸收的有機(jī)質(zhì)、氮、磷等營養(yǎng)元素，增加了其在土壤中的含量[22-23]。培養(yǎng)時(shí)間到達(dá)1年時(shí)，試驗(yàn)組沉積物pH略有升高，這可能與煤矸石偏堿性有關(guān)[24]。

自然環(huán)境中，沉積物中微量元素含量變化與多種因素有關(guān)。暴露于空氣中的煤矸石在自然風(fēng)化過程中逐漸向周邊環(huán)境釋放微量元素，所釋放的微量元素?cái)?shù)量和速率首先受煤矸石自身微量元素含量、微量元素在煤矸石中的賦存形態(tài)的影響，釋放微量元素的多少也直接影響微量元素進(jìn)入沉積物中的數(shù)量。微量元素在煤矸石中的賦存形態(tài)決定其從煤矸石中淋溶析出的難易，相同條件下，以有機(jī)態(tài)存在的微量元素在淋溶時(shí)較難析出，而以無機(jī)態(tài)存在特別是以吸附態(tài)存在的微量元素在煤矸石淋溶時(shí)，易從煤矸石中析出[25]。煤矸石中微量元素含量越高，其釋放到周邊環(huán)境中的潛在數(shù)量也就越多；含有微量賦存礦物越容易風(fēng)化，則釋放速率越快。大部分微量元素在浸泡前期的浸出濃度受煤矸石風(fēng)化程度的影響，Zn元素在整個(gè)浸泡過程的浸出濃度均受到煤矸石風(fēng)化程度的影響，而部分元素?zé)o此規(guī)律[26]。另外，煤矸石在自然風(fēng)化過程中還受到外界環(huán)境(如pH、溫度、濕度等)的影響，研究發(fā)現(xiàn)煤矸石中重金屬As、Pb在弱酸性浸泡液中更易被融出釋放；多數(shù)微量元素在浸泡前期和中期的浸出濃度均與煤矸石粒徑大小有關(guān)[26]。煤矸石中往往含有較多的Zn、As、Pb等重金屬元素[27]，這也決定了釋放到環(huán)境中各微量元素含量的差異。孫亞喬等[28]發(fā)現(xiàn)堆放場土壤重金屬Zn、As、Pb的均值皆超過遠(yuǎn)離堆放場土壤背景值和中國土壤背景值，煤矸石堆置場周邊土壤中As污染最嚴(yán)重[27]，Zn含量也顯著超過周邊及中國土壤背景值[28]，這些現(xiàn)象說明了煤矸石量的多少往往也決定了周邊環(huán)境中微量元素?cái)?shù)量的多少。遭受重金屬污染的土壤中，目前主要圍繞土壤重金屬賦存形態(tài)[29]、土壤污染評(píng)價(jià)和重金屬的釋放遷移等展開，針對(duì)煤矸石釋放重金屬化學(xué)行為鮮有報(bào)道，本研究中Cu、Cd在沉積物中的含量沒有顯著變化可能與pH、電導(dǎo)率、溫度等諸多因素的聯(lián)合作用有關(guān)。

3.2 褶紋冠蚌不同組織重金屬含量變化

水生生物尤其是貝類對(duì)重金屬具有較強(qiáng)的富集能力[30]。陳修報(bào)等[31]在研究3種不同污染生境背景中背角無齒蚌的重金屬積累特征時(shí)，發(fā)現(xiàn)重金屬污染較為嚴(yán)重的生境背景中的背角無齒蚌體內(nèi)重金屬含量也相應(yīng)較高；貝類生活的環(huán)境因子影響貝類對(duì)重金屬的吸收，表現(xiàn)為貝類體內(nèi)的Zn、Cu含量與海水中這2種微量元素濃度呈正相關(guān)，與鹽度呈負(fù)相關(guān)，而與水溫、pH、溶解氧沒有相關(guān)性[32]；相關(guān)研究表明，貝類體內(nèi)重金屬含量呈現(xiàn)一定季節(jié)分布特征[33-34]。

重金屬進(jìn)入蚌體內(nèi)后，不同組織對(duì)它們的積累具有較為明顯的選擇性[31]。本研究中，外套膜中5種微量元素含量均高于斧足，吳曼曼等[13]在研究巢湖4種蚌類不同組織中5種微量元素含量及其空間變化中得到相似結(jié)論。不同組織中微量元素含量差異可能是由于不同組織對(duì)微量元素的吸收機(jī)制不同造成的，趙衛(wèi)紅等[35]在研究灘涂貝類不同組織器官對(duì)重金屬的富集能力時(shí)發(fā)現(xiàn)，部分重金屬在貝類內(nèi)臟囊和食道腺中的含量遠(yuǎn)高于其他組織器官，另外發(fā)現(xiàn)Pb在足中的含量是食道腺中的3.8倍，由此推斷不同重金屬進(jìn)入貝類不同組織的主要方式不同，可能主要是進(jìn)食或滲透作用；許澄源等[36]發(fā)現(xiàn)貽貝各部位As含量順序分別為內(nèi)臟團(tuán)>生殖腺，鰓>體液，表明貽貝對(duì)As的累積途徑可能主要通過食物進(jìn)入體內(nèi)，鰓和生殖腺的體表吸附是次要的。

3.3 褶紋冠蚌不同組織結(jié)構(gòu)變化

本研究中，投加煤矸石的養(yǎng)殖池B池和C池褶紋冠蚌的斧足組織形態(tài)結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)了與正常情況不同程度的差別，主要表現(xiàn)為肌纖維斷裂、肌束松散不規(guī)則。而在正常情況下，斧足縱切面主要由肌肉組織構(gòu)成，表面覆蓋1層由柱狀細(xì)胞組成的表皮，并形成許多褶皺，表皮下面有1層較薄的環(huán)肌，中央都是由縱橫交錯(cuò)的肌束組成，形成三維的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，由結(jié)締組織相互連接，具有豐富的血管[37]，說明煤矸石的投加對(duì)斧足組織產(chǎn)生了影響。涂葉綠等[38]研究了銅、鎘聯(lián)合脅迫處理對(duì)鯽魚肌肉的影響，發(fā)現(xiàn)肌肉組織中的肌纖維斷裂、聚集、崩潰、溶解，同時(shí)肌纖維間隙增大，且重金屬濃度越高，病理損傷越大。邵健忠等[39]在研究三角帆蚌瘟病的組織病理時(shí)，發(fā)現(xiàn)病蚌也有蚌殼微微張開，斧足腫大變黃等體征，與本研究在采集褶紋冠蚌樣本時(shí)觀察到的現(xiàn)象極為相似。由此猜測，重金屬威脅可能會(huì)導(dǎo)致褶紋冠蚌病變，進(jìn)而導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)產(chǎn)生變化，有待進(jìn)一步研究。

外套膜的內(nèi)表皮直接與水接觸，外套膜在貝類的攝食、排出進(jìn)入外套腔的異物及防御等方面都有非常重要的作用，破壞外套膜會(huì)降低貝類防御功能[40]。本研究中，投加煤矸石的養(yǎng)殖池B池和C池褶紋冠蚌的外套膜組織形態(tài)結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)了與正常情況不同程度的差別，主要表現(xiàn)為肌纖維斷裂、結(jié)締組織之間形成空白區(qū)域。而健康蚌的外套膜由內(nèi)外上皮層、結(jié)締組織、肌纖維及一定數(shù)量的粘液分泌細(xì)胞組成，上皮細(xì)胞排列整齊，結(jié)締組織均勻分布[41]，細(xì)胞聯(lián)系緊密，組織中間是疏松的連接組織，中間有多個(gè)空泡。蚌在受到不同外界刺激條件下，其內(nèi)臟團(tuán)、鰓、外套膜等是主要受損組織[42]。鎘極易通過鈣道穿過細(xì)胞膜進(jìn)入組織細(xì)胞[43]，導(dǎo)致人和動(dòng)物組織器官形態(tài)變化和結(jié)構(gòu)損傷[44-45]。本研究中，隨著煤矸石/水比率的增加，褶紋冠蚌外套膜組織中的各微量元素含量隨之增加，外套膜組織損傷程度也隨之加深，說明煤矸石/水比率是影響褶紋冠蚌外套膜組織形態(tài)結(jié)構(gòu)受損程度的因素。

褶紋冠蚌組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化的原因很多。煤矸石中除重金屬元素污染物之外，還有多環(huán)芳烴等持久性有機(jī)污染物，也可能導(dǎo)致水生動(dòng)物組織器官病變，此外，有害元素在組織中的積累還可能引起蚌體對(duì)環(huán)境中的病原微生物的抵抗力下降，導(dǎo)致其感染相關(guān)病毒或病原菌，從而造成組織器官形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。Hawkins等[46]報(bào)道低濃度的多環(huán)芳烴能夠引發(fā)青鳉魚肝臟腫瘤；混有PAHs的海洋沉積物可以導(dǎo)致傷寒沙門氏菌株突變[47]。陳志勝等[48]發(fā)現(xiàn)雜色鮑(Haliotisdiversicolor)患潰瘍病后斧足出現(xiàn)了上皮細(xì)胞腫脹并逐漸脫落，肌纖維萎縮變細(xì)，染色變淺，排列雜亂無章，嚴(yán)重時(shí)肌纖維斷裂形成空洞等癥狀。任素蓮等[49]發(fā)現(xiàn)海灣扇貝(Argopectensirridians) 感染球形病毒后其外套膜也有類似變化。本研究中，微量元素之外的其他因素導(dǎo)致的褶紋冠蚌組織學(xué)變化仍待進(jìn)一步探討。

4 結(jié) 論

(1)外套膜對(duì)微量元素的富集能力大于斧足；褶紋冠蚌斧足和外套膜中Cu、Zn、As、Pb的質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨煤矸石/水比率的增加而顯著增加(P<0.05)；不同重金屬元素在褶紋冠蚌的斧足和外套膜組織中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)從大到小的順序均為Zn、As、Cu、Pb、Cd。

(2)煤矸石釋放微量元素對(duì)褶紋冠蚌的斧足和外套膜組織均產(chǎn)生了不同程度的影響，同種污染條件下，外套膜受損程度大于斧足；斧足組織中，表皮褶皺變得無規(guī)則，表皮下細(xì)胞核染色變淺，肌纖維斷裂明顯，肌束間間距增大。外套膜組織中，上皮褶皺趨于平直，內(nèi)表皮細(xì)胞核排列規(guī)則且染色變淺，肌纖維排列混亂且有斷裂現(xiàn)象，組織間空泡減少。隨煤矸石/水比率增大，2種組織的病變程度加深。