詹國(guó)平，朱麗芳，蔡家寶，黃曉瑜，詹成思

(深圳市南山區(qū)蛇口人民醫(yī)院藥劑科，廣東 深圳 518067)

六味地黃丸大多用于滋補(bǔ)腎陰，主要是由牡丹皮，熟地黃，茯苓，酒茱萸，山藥以及澤瀉六味藥材組成，對(duì)頭暈耳鳴，腎陰虧損，腰膝酸軟患者具有顯著效果。而六味地黃濃縮丸是一類(lèi)由常規(guī)丸劑改制成的現(xiàn)代劑型類(lèi)型，其將現(xiàn)代藥劑技術(shù)及傳統(tǒng)中醫(yī)藥共同聯(lián)系起來(lái)，不僅保留了傳統(tǒng)湯劑中的優(yōu)勢(shì)，還將現(xiàn)代制藥技術(shù)原有的先進(jìn)性進(jìn)行有效體現(xiàn)[1]。近年來(lái)，伴隨著中藥濃縮丸制劑技術(shù)不斷完善，六味地黃濃縮丸的臨床使用量越來(lái)越大，國(guó)內(nèi)有諸多廠家均生產(chǎn)此類(lèi)藥物[2]。2010年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定的質(zhì)量控制指標(biāo)景關(guān)注于馬錢(qián)苷與丹皮酚其含量檢測(cè)方法為高效液相色譜法，在使用過(guò)程中方法準(zhǔn)確性較高，但在檢測(cè)時(shí)采用不同液相色譜法分別檢測(cè)丹皮酚以及馬錢(qián)苷含量使后期檢測(cè)時(shí)費(fèi)時(shí)較長(zhǎng)，同時(shí)過(guò)程較為繁雜，會(huì)由于操作步驟較多產(chǎn)生分析誤差，而牡丹皮是六味地黃丸中主要原材料，區(qū)別于其他五味藥材生產(chǎn)過(guò)程中提取的是丹皮酚進(jìn)行入藥，因此需要觀測(cè)丹皮酚在生產(chǎn)過(guò)程中的轉(zhuǎn)移規(guī)律，有效控制生產(chǎn)質(zhì)量情況，而熟地黃中5-羥甲基糠醛含量較高，該類(lèi)物質(zhì)對(duì)人體具有一定毒素反應(yīng)，在食品中多數(shù)作為危害因子進(jìn)行控制。因此本研究參考2015版《中國(guó)藥典》測(cè)定市售5個(gè)不同廠家生產(chǎn)的六味地黃濃縮丸，對(duì)各項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行差異分析，基于現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥品質(zhì)量控制的作用進(jìn)行評(píng)估，能在一定程度上科學(xué)系統(tǒng)的指導(dǎo)臨床用藥[3-4]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月—2020年12月市售5個(gè)不同廠家生產(chǎn)的六味地黃濃縮丸作為研究對(duì)象，并通過(guò)2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定項(xiàng)下溶出度、含量測(cè)定以及裝量差異等相關(guān)內(nèi)容對(duì)不同廠家的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行分析研究。

1.2 方法

1.2.1 儀器與材料

(1)儀器MSA225S-000-DU型電子天平、Agilent1260型高效液相色譜儀、ZB-1C型智能崩解儀(北京醫(yī)療設(shè)備四廠)、ZRS-8G型智能溶出儀、HHS21—4S型數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋、JBT/D—GXST380/26型超聲波清洗器以及DHG-9070A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海昕?jī)x儀器儀表有限公司)。

(2)試劑馬錢(qián)苷對(duì)照品(批號(hào)：111640-200901)以及丹皮酚對(duì)照品(批號(hào)：0708-9704)，甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純；MilliP<0.052ore純水機(jī)制備超純水。

(3)材料佛慈六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z62020664，蘭州佛慈制藥股份有限公司)、同仁堂六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z19993068，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠)、仲景六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z41022128，仲景宛西制藥股份有限公司)、九芝堂六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020145，九芝堂股份有限公司)以及修正六味地黃濃縮丸(批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z22023388，通藥制藥集團(tuán)股份有限公司)等5個(gè)不同廠家的六味地黃濃縮丸。

1.2.2 水分測(cè)定

(1)依據(jù)烘干法進(jìn)行測(cè)定，選取2～5g供試品，將其在干燥且恒重的扁形稱(chēng)量瓶?jī)?nèi)妥善放置，厚度≤5mm，并對(duì)其進(jìn)行精密的稱(chēng)重，之后將瓶蓋緩緩打開(kāi)，置于105℃的條件下進(jìn)行5h干燥處理，并及時(shí)把瓶蓋蓋緊，放置在干燥器內(nèi)，進(jìn)行30min左右的冷卻處理，再次精密稱(chēng)定，105℃干燥1h，再次冷卻稱(chēng)重，連續(xù)兩次稱(chēng)重相差<5mg即停止。依據(jù)減失之后的實(shí)際重量來(lái)系統(tǒng)計(jì)算供試品中的含水量，計(jì)算公式：Q=K×W+R+V×T

(2)溶散時(shí)限的檢測(cè)，要采取供試品6丸，放置在適當(dāng)孔徑的吊籃玻璃管中，增加擋板后需要啟動(dòng)崩解儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 含量測(cè)定

對(duì)照品溶液的制備：選取適量的馬錢(qián)苷對(duì)照品、莫諾苷對(duì)照品及丹皮酚對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加入50%甲醇，制成每lmL含有馬錢(qián)苷、莫諾苷各40μg、含丹皮酚90μg的混合溶液，即得20μg馬錢(qián)苷的對(duì)照品溶液。

(1)馬錢(qián)苷含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱Agilent EclipsePlusC18柱(100mm×4.6mm，3.5μm)；流動(dòng)相：四氫呋喃-甲醇-乙腈-0.05%磷酸溶液(1：4：8：87)；柱溫設(shè)置為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)數(shù)值設(shè)置為236nm；流速數(shù)值設(shè)置為1.0mL/min。

供試品溶液的制備：選取本品適量，全部研細(xì)，取出0.5g左右，精密稱(chēng)定，于具塞錐形瓶中放置，對(duì)其進(jìn)行精密量取之后，將25mL濃度為50%的甲醇溶液緩緩加入，并進(jìn)行密塞處理，之后對(duì)實(shí)際重量進(jìn)行測(cè)量，并給予其1h加熱回流處理，放冷之后，再次測(cè)量重量，經(jīng)由50%甲醇溶液把已經(jīng)減失掉的重量重新補(bǔ)足，精密抽取續(xù)濾液10mL放置在中性氧化硅柱上，其指標(biāo)為4g，200目，鋁柱內(nèi)徑為1cm，并使用10mL濃度為40%的甲醇進(jìn)行洗脫后續(xù)收集流出液以及洗脫液，蒸干后需要將殘?jiān)扇舛?0%甲醇進(jìn)行溶解，并轉(zhuǎn)移到10mL量瓶中等待使用，完成后利用50%甲醇稀釋到相應(yīng)刻度，并將其充分搖勻，然后進(jìn)行濾過(guò)，最終續(xù)濾液取出，即得。

測(cè)定法：依次對(duì)供試品及對(duì)照品溶液進(jìn)行嚴(yán)密吸取，均需10μL，之后于液相色譜儀內(nèi)緩緩注入，并對(duì)其實(shí)施測(cè)定，即得。

(2)丹皮酚含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱：Agilent EclipsePlusC18柱；流動(dòng)相：甲醇-水(70：30)；柱溫為處于室溫狀態(tài)下；檢測(cè)波長(zhǎng)數(shù)值設(shè)置為274nm；流速數(shù)值設(shè)置為1.0mL/min。

供試品溶液的制備：選取本品適量，全部研細(xì)，取出0.5g左右，精密稱(chēng)定，于具塞錐形瓶中放置，對(duì)其進(jìn)行精密量取之后，將50mL濃度為50%的甲醇溶液緩緩加入，并進(jìn)行密塞處理，之后對(duì)實(shí)際重量進(jìn)行測(cè)量，需要對(duì)供試品溶液進(jìn)行超聲處理，維持儀器參數(shù)為250W，頻率保持35kHz，持續(xù)處理半小時(shí)，放冷之后，再次測(cè)量重量，并采取50%甲醇溶液補(bǔ)足已經(jīng)解釋掉的重量，將其充分搖勻后濾過(guò)處理，最終續(xù)濾液取出，即得。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)觀察分析五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸重量差異情況。

(2)觀察分析五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸含量測(cè)定情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

由研究可以發(fā)現(xiàn)，不同廠家生產(chǎn)的六味地黃濃縮丸在重量并未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其全部符合2015版《中國(guó)藥典》相關(guān)規(guī)定，見(jiàn)表1。

表1 五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸重量差異情況

本研究發(fā)現(xiàn)，不同廠家馬錢(qián)苷以及丹皮酚的含量均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見(jiàn)表2。

表2 五個(gè)不同廠家六味地黃濃縮丸含量測(cè)定情況

3 討論

3.1 六味地黃丸質(zhì)量控制情況

六味地黃丸是目前應(yīng)用廣泛的中成藥之一，主要是由熟地黃，山藥，澤瀉，茯苓，牡丹皮以及酒茱萸組成。熟地黃能夠滋陰補(bǔ)精，澤瀉能夠去除濕氣，山藥可以健脾養(yǎng)胃，酒茱萸能夠養(yǎng)肝收斂，牡丹皮可以清瀉肝火，茯苓能夠滲濕，幫助山藥健脾，該藥物使用時(shí)補(bǔ)瀉結(jié)合，但以補(bǔ)為主。六味地黃丸還能用于治療頭暈耳鳴，骨蒸潮熱，消渴等癥狀。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，六味地黃丸在使用時(shí)能夠提高自身免疫功能，起到抗低溫，抗衰老的效果，因此需要重視六味地黃丸質(zhì)量控制情況，提高藥效。

3.2 六味地黃丸原材料作用分析

六味地黃丸中各類(lèi)藥材對(duì)患者機(jī)體均具有一定價(jià)值，藥方中牡丹皮可長(zhǎng)時(shí)間放置，使用時(shí)能夠起到解毒、潤(rùn)喉的作用，同時(shí)還能增強(qiáng)免疫細(xì)胞功能。中藥材牡丹皮主要成分為丹皮酚被規(guī)定為六味地黃丸質(zhì)量分析控制的主要指標(biāo)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明丹皮酚以及牡丹皮中存在的糖類(lèi)成分能夠起到降溫，消炎，解熱的效果。

六味地黃丸另一配方為酒茱萸具有止汗、補(bǔ)腎、壯陽(yáng)的效果，同時(shí)還能抑制血小板聚集，該類(lèi)中藥材中含有馬錢(qián)苷、熊果酸以及莫諾苷等有效成分，在對(duì)酒茱萸進(jìn)行質(zhì)量控制時(shí)，以上有效成分均被作為酒茱萸的常規(guī)檢測(cè)成分。研究表明，2005年起《中國(guó)藥典》將馬錢(qián)苷作為六味地黃丸的主要質(zhì)量控制指標(biāo)，該有效成分能夠起到抗癌、抗輻射的效果，還能止咳化痰。

熟地黃又被稱(chēng)之為熟地以及地黃，地黃可分為生地和熟地，男性患者多服用熟地黃，女性患者多服用生地黃，熟地黃在使用過(guò)程中能夠治療月經(jīng)不調(diào)及頭暈等癥狀，起到補(bǔ)血益腎的效果。熟地黃中重要化學(xué)成分包括毛蕊花糖苷、氨基酸等，糖類(lèi)成分高于生地黃。由于熟地黃中糖類(lèi)會(huì)脫水生成果糖以及5-羥甲基糠醛，研究分析表明，藥材中5-羥甲基糠醛含量較多，會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒理反應(yīng)，因此需要嚴(yán)格控制六味地黃丸研究。

山藥應(yīng)用時(shí)可起到化痰止咳，補(bǔ)脾養(yǎng)胃的效果，現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究證明，山藥在使用過(guò)程中能夠增強(qiáng)免疫功能，并且含有大量蛋白質(zhì)和維生素。同時(shí)山藥中主要成分為淀粉，日常生活中使用能夠增加脾胃消化吸收能力，防止出現(xiàn)便秘，其他化學(xué)成分包括山藥堿、尿囊素以及氨基酸等，尿囊素能夠促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，并且加速皮膚組織生長(zhǎng)，能夠治療皮膚創(chuàng)傷。

茯苓能夠治療頭痛，膝關(guān)節(jié)積液等癥狀，起到解毒效果。該類(lèi)中藥材主要化學(xué)成分包括茯苓酸，去氫茯苓酸等，由于茯苓中化學(xué)成分較為復(fù)雜，同時(shí)含量較少，目前對(duì)該類(lèi)藥材質(zhì)量分析研究不多。

澤瀉具有較好利尿功能，促進(jìn)尿素以及氯化鈉排出體外，還能降低膽固醇，起到降血脂的效果，分析原因在于澤瀉能夠抑制小腸脂化膽固醇的能力，與茯苓相同，澤瀉化學(xué)成分較為復(fù)雜，含量較少，因此質(zhì)量控制分析研究較少。

3.3 六味地黃濃縮丸的質(zhì)量控制情況

通過(guò)以上六味地黃丸中藥材成分介紹表明中成藥臨床效果較好，同時(shí)廣泛應(yīng)用使六味地黃丸質(zhì)量控制效果重要性提高。而目前六味地黃制劑類(lèi)型較多，包括濃縮丸，軟膠囊，片劑，口服液等多種形式，其中六味地黃濃縮丸使用率較高，因此質(zhì)量控制是其研究重點(diǎn)。當(dāng)前中藥材的來(lái)源具有一定的復(fù)雜性，且中藥材科屬種類(lèi)、環(huán)境以及栽培采收等方式均存在差異，因此不同批次藥材原料的質(zhì)量會(huì)具有明顯的差異性[5]。依據(jù)2015年版《中國(guó)藥典》中關(guān)于藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)不同廠家的六味地黃丸其水分、容散時(shí)限及含量等多個(gè)環(huán)節(jié)均同有關(guān)規(guī)定相符合。藥典中規(guī)定其水分不能超過(guò)9.0%，且不同廠家六味地黃濃縮丸并未存在顯著差異性；同時(shí)溶散時(shí)限不能大于120min，且不同廠家之間具有較大差異，其全部符合2015版《中國(guó)藥典》相關(guān)規(guī)定，同時(shí)不同廠家馬錢(qián)苷以及丹皮酚的含量均存在明顯差異，表明不同廠家不同批次的藥品中馬錢(qián)苷以及丹皮酚的含量是不一致的[6]。研究發(fā)現(xiàn)，不同廠家馬錢(qián)苷以及丹皮酚的含量均存在明顯差異，其中依據(jù)含量的多少順序依次為：仲景六味地黃濃縮丸>同仁堂六味地黃濃縮丸>九芝堂六味地黃濃縮丸>佛慈六味地黃濃縮丸>修正六味地黃濃縮丸，這可能是因?yàn)椴煌瑥S家所應(yīng)用的中藥材存在差異。因?yàn)楫?dāng)前中藥材的來(lái)源相對(duì)比較復(fù)雜且存在明顯的差異性，其栽培、環(huán)境及采收加工方式差異較大，因此使得批次不同的藥材原料在質(zhì)量上出現(xiàn)一定程度的差異性。同時(shí)藥材質(zhì)量合格，但制劑工藝并不恰當(dāng)或者是未依據(jù)規(guī)程完成操作，導(dǎo)致未徹底提取藥材有效成分，進(jìn)而使六味地黃濃縮丸含量存有差異。

綜上所述，當(dāng)前市售六味地黃濃縮丸在質(zhì)量上已經(jīng)達(dá)到了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的基本要求，但在具體指標(biāo)上存在明顯的差異性，因此需要有效提高藥品質(zhì)量控制范圍，保證后期患者用藥安全性。