朱波 賴璟琦 葉小莉 倪一平 馮奮棟

（深圳市羅湖區(qū)疾病預防控制中心 廣東深圳 518020）

1 前言

糖精鈉，化學名為鄰苯甲?；酋啺封c，是第一代人工合成甜味劑，具有甜度高、價格低、不提供熱量等優(yōu)點，自1878年被合成以來，被廣泛應用于食品加工行業(yè)。但由于糖精鈉不是食品中的天然成分，對人體無任何營養(yǎng)價值，使用量過大時有金屬苦味，因此對糖精鈉安全性的爭議從未中斷，尤其是對其致癌性的研究。有研究報道稱，不能完全排除糖精鈉的致癌作用[1-3]。

在我國，糖精鈉雖然屬于批準使用的合法添加劑，但GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》對糖精鈉的使用范圍和限值均作出明確規(guī)定。針對糖精鈉的檢測分析方法有光譜法[4]、色譜法[5]、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[6]。其中，色譜法是現(xiàn)階段應用最為廣泛的分析方法[7]，GB 5009.28-2016《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》中第一法即為液相色譜法（附紫外檢測器），其以保留時間作為定性依據(jù)，外標法定量。但在實際應用中，由于食品樣本的成分較為復雜，很多物質(zhì)具有紫外吸收，若樣本中含有與待測物性質(zhì)相近的物質(zhì)，而實驗前處理又無法對其進行有效去除，則可能會出現(xiàn)多種物質(zhì)在同一保留時間流出，導致假陽性或定量結果不準確的情況[8-9]，影響實驗結果。本單位在食品風險監(jiān)測工作中也遇到上述問題，故本文通過保留時間結合全波長掃描光譜圖判斷是否有干擾物存在，嘗試改變流動相組成試圖使干擾物和待測物分離并準確定量，并利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行進一步確認，以保證實驗結果的準確性。

2 材料與方法

2.1 樣品

食品安全風險監(jiān)測樣品：市售泡菜、辣條。

2.2 儀器與試劑

2.2.1 試劑

糖精鈉標準溶液（1.0 mg/mL，GB（W）100008，中國科學計量研究院）；超純水（美國Millipore Q公司）；甲醇（色譜純，美國TEDIA公司）；乙酸銨（色譜純，德國Fluka公司）；甲酸（優(yōu)級純，德國Merck公司）；乙酸鋅（分析純，天津市百世化工有限公司）；亞鐵氰化鉀（分析純，山東西亞化學股份有限公司）。

2.2.2 儀器

超高效液相色譜儀（LC-30AD型，配二極管陣列檢測器，日本Shimadzu公司）；超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿復合線性離子阱質(zhì)譜儀（Qtrap5500+型，配電噴霧離子源ESI，美國Sciex公司）；高速低溫離心機（3K30型，美國Sigma公司）。

2.3 方法

2.3.1 色譜條件

Poroshell 120 SB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，4.0μm）；流動相A：20 mmol乙酸銨/20 mmol乙酸銨-2 mmol甲酸；流動相B：甲醇，流速：1.0 mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10μL。

2.3.2 質(zhì)譜條件

掃描模式：負離子模式；離子化電壓（IS）：－4500V；離子源溫度（TEM）：600℃；氣簾氣（CUR）：40 psi；噴霧氣（GS1）：60 psi；輔助加熱氣（GS2）：60 psi；接口加熱（IHE）：on；碰撞氣壓力（CAD）：Medium；監(jiān)測模式：多反應監(jiān)測模式（MRM）；監(jiān)測定性定量離子對：182/105.9，182/42；碰撞能量（CE）：－24 eV，－53 eV；去簇電壓（DP）：－100 V；入口電壓（EP）：－10 eV；出口電壓（CXP）：－10 eV

2.3.3 樣本處理

樣本前處理按照GB5009.28-2016《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》中第一法進行。

3 結果與分析

3.1 液相色譜法初測結果分析

流動相：20 mmol/L乙酸銨（pH 6.7）+甲醇=5+95。在糖精鈉保留時間8.0 min處標準溶液，泡菜和辣條均出現(xiàn)色譜峰，詳見圖1、圖2、圖3。

此時，根據(jù)GB 5009.28-2016中的規(guī)定，可以在定性樣品中添加糖精鈉。配制濃度范圍在2 mg/L~50 mg/L的系列標準溶液，以濃度和峰面積繪制線性方程，回歸方程為Y=22906.5X-1154.94，相關系數(shù)為0.999 9。根據(jù)校準曲線，得到樣品中糖精鈉濃度，詳見表1。

根據(jù)GB 2760-2014中的規(guī)定，糖精鈉在腌漬蔬菜中的限值為0.15 g/kg，在辣條中不得檢出，由此初步判定2份樣品為疑似超標樣品。利用二極管陣列檢測器的特殊性能，對標準溶液，泡菜和辣條在糖精鈉保留時間上流出的色譜峰進行全波長吸收光譜圖的測定。

通過對比，可以看出泡菜和辣條的全波長吸收光譜圖雖然在大致走向上與標準溶液的全波長吸收光譜圖趨于一致，但在樣品光譜圖上可以看到，在220 nm和295 nm處出現(xiàn)了2個微小的吸收峰波動，詳見圖4、圖5、圖6。故懷疑有干擾物質(zhì)與糖精鈉在同一保留時間同步流出，影響到實驗結果，結合定量結果和全波長吸收光譜圖，需對可疑樣品進行復測。

3.2 液相色譜法復測結果分析

按照GB 5009.28-2016中的規(guī)定，當懷疑有干擾物質(zhì)時，可以嘗試通過改變流動相組成將干擾物質(zhì)與目標物分離。因此復測實驗流動相改為：20 mmol/L乙酸銨-0.1%甲酸（pH 5.0）+甲醇=8+92，糖精鈉保留時間提前至6.3 min（詳見圖7），在此保留時間，泡菜樣品依然能夠出現(xiàn)色譜峰（詳見圖8），辣條樣品沒有出現(xiàn)色譜峰（詳見圖9），而辣條加標樣本出現(xiàn)色譜峰（詳見圖10）。

對比標準溶液、泡菜樣品、辣條加標樣品的全波長吸收光譜圖，最大吸收波長的位置和整個光譜圖的走勢完全一致，初測時出現(xiàn)的可疑吸收峰也消失不見，（詳見圖4、圖11、圖12）。2份復測樣品在糖精鈉保留時間后約1min，出現(xiàn)的1個可疑色譜峰的全波長吸收光譜圖（詳見圖13），與初測實驗中泡菜和辣條中糖精鈉的光譜圖（詳見圖5、圖6）完全一致。因此，有理由懷疑此峰為初測時的干擾物質(zhì)。配制濃度范圍在1 mg/L~50 mg/L的系列標準溶液，以濃度和峰面積繪制線性方程，回歸方程為Y=11433.2X-570.037，相關系數(shù)為0.999 9，對復測樣品中糖精鈉進行定量（表1），泡菜中糖精鈉濃度下降至限值以下，辣條中未檢出，辣條樣本的加標回收率為100%。通過復測實驗可以看出，2份樣品中均存在干擾物質(zhì)，通過改變流動相組成，能夠成功使干擾物質(zhì)與目標物分離，得到準確的定量結果。

3.3 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法確證結果分析

液相色譜法僅用保留時間定性，容易出現(xiàn)假陽性結果，本文輔以二極管陣列檢測器掃描全波長吸收光譜圖，以降低假陽性概率，并利用更高靈敏度和準確性的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，再次對可疑樣品進行確證，以確保實驗結果的準確性。參考現(xiàn)有文獻資料，建立適用于本實驗室的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測食品中糖精鈉的方法，由標準溶液、樣品、加標樣品提取離子色譜圖（詳見圖14），可以看出，泡菜樣品檢出糖精鈉，辣條樣品未檢出糖精鈉。

配制濃度范圍在10~200μg/L的系列標準溶液，以濃度和峰面積繪制線性方程，回歸方程為Y=7152.85X-14547.22，相關系數(shù)為0.999 6，得到定量結果（詳見表1），確證結果與復測實驗結果相一致。

表1 初測、復測、確證結果比對

4 結論

糖精鈉作為食品安全風險監(jiān)測的常規(guī)項目，通常采用液相色譜測定，但如果只利用保留時間定性，極易容易出現(xiàn)假陽性，造成結果的誤判。本文提供針對此類情況進行深入研究，發(fā)現(xiàn)可以充分利用吸收光譜圖輔助識別干擾，并通過改變流動相組成試圖分離干擾物質(zhì)。試驗結果證實，針對需要確證的樣品，可以采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進行，以彌補液相色譜法特異性不強的缺點，保證實驗結果的準確性。