陳麗梅,葛金金,楊變變,蔣小園,邱實(shí),蔣玲（江蘇省連云港市東方醫(yī)院,江蘇 連云港 222042）

新生兒溶血病（HDN）是指因母子血型不合、母體體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒血型抗原不配血型的抗體，并且抗體可以經(jīng)過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，從而引起胎兒免疫性溶血的疾病。在我國(guó)，目前臨床最為常見的血型不合類型為Rh血型和ABO血型[1]，其他血型系統(tǒng)較為少見，例如MNS、Kell、Duffy等。其最常見和最突出的表現(xiàn)為高膽紅素，還可以表現(xiàn)為不同程度的貧血、水腫、黃疸、肝脾腫大、膽紅素腦病等，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致新生兒死亡。血清學(xué)溶血三項(xiàng)試驗(yàn)是當(dāng)前臨床診斷新生兒溶血病的常用方法之一[2]，前人的研究[3]發(fā)現(xiàn)患兒血清學(xué)溶血三項(xiàng)的檢測(cè)影響因素較多，從而影響檢出率。因此，本文對(duì)我院在2018年2月-2021年2月符合標(biāo)準(zhǔn)的高膽紅素血癥新生兒患兒的血清學(xué)溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，并找出影響因素，為提高診斷效率提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2018年2月-2021年2月我院收治的高膽紅素血癥新生兒作為研究對(duì)象，共372例，其中男208例，女164例，平均日齡3.26天。所有患兒膽紅素檢查均顯示為高膽紅素，并伴有不同程度的貧血。所有患兒均排除以下情況：①有其他血液系統(tǒng)疾?。虎诖嬖谄渌麌?yán)重合并癥及并發(fā)癥。研究符合本單位倫理委員會(huì)所制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)并得到倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集新生兒及其母親靜脈血并注入含有乙二胺四乙酸二鉀抗凝劑的真空采血管后充分混勻，確保抗凝充分[4]。采集好的標(biāo)本應(yīng)該盡快送至輸血科檢測(cè)。

1.2.2 血型鑒定 采用玻片法和微柱凝膠法同時(shí)檢測(cè)患兒血型。

1.2.3 直接抗人球蛋白試驗(yàn) 采用卡式微柱凝膠法。取新生兒0.5%洗滌紅細(xì)胞懸液50μL加入抗人球蛋白檢測(cè)卡中，離心5min后查看并且判定結(jié)果。

1.2.4 放散試驗(yàn) 采用微柱凝膠法。將洗滌4次以上的紅細(xì)胞同等量的生理鹽水進(jìn)行融合放置于干燥試管之中，在56℃的恒溫水箱中孵育10min，進(jìn)行離心操作后取上層清液作為放散液備用。在抗人球蛋白檢測(cè)卡前3孔中依次加入8μLA、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（4%），接著每個(gè)孔中加入50μL低離子溶液，最后加入50μL紅細(xì)胞放散液，置于37℃孵育器孵育15min，孵育完成后使用專用離心機(jī)離心5min，最后查看并且判定結(jié)果[5]。

1.2.5 游離抗體試驗(yàn) 采用微柱凝膠法。在抗人球蛋白檢測(cè)卡后3孔中依次加入8μLA、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（4%），接著加入50μL低離子溶液，最后加入50μL患兒血漿，置于37℃孵育器孵育15min，孵育完成后使用專用離心機(jī)離心5min，最后查看并且判定結(jié)果。

1.2.6 新生兒溶血病診斷標(biāo)準(zhǔn) ①母嬰ABO或者Rh血型不合；②根據(jù)溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果判斷，見表1。

表1 溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果判讀表

1.3 儀器與試劑

1.3.1 儀器 ①FYQ型免疫微柱孵育器（長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限公司）；②BYL型血型血清學(xué)多用離心機(jī)（長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限公司）；③HH-S型數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇金怡儀器科技有限公司）。

1.3.2 試劑 ①單克隆抗體型ABO、RhD血型定型檢測(cè)卡、抗人球蛋白檢測(cè)卡、ABO血型反定型試劑盒、人血紅細(xì)胞型不規(guī)則抗體檢測(cè)試劑細(xì)胞以及低離子強(qiáng)度鹽溶液均購(gòu)于長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司。②單克隆抗體型抗A、抗B血型定型試劑和單克隆抗體型RhD（lgM）血型定型試劑均購(gòu)于上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患兒血清學(xué)溶血三項(xiàng)結(jié)果 372例患兒中共檢出陰性303例，可疑2例，確診新生兒溶血病67例，新生兒檢出率為18.0%。67例確診患兒中，釋放試驗(yàn)結(jié)果陽性的有67人，陽性率為100%，游離試驗(yàn)結(jié)果陽性的有42例，陽性率為62.7%，直抗結(jié)果陽性的有1人，陽性率為1.4%。見表2。

表2 患兒血清學(xué)溶血三項(xiàng)檢出結(jié)果表

2.2 不同性別患兒HDN檢出結(jié)果 208例男性患兒中，檢出HDN陽性的有44例，檢出率為21.2%；164 例女性患兒中，檢出HDN陽性的有22例，檢出率為13.4%。兩組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.052＞0.05）。

2.3 不同送檢時(shí)間下患兒血清學(xué)溶血三項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的比較0-2d送檢的患兒共193例，HDN檢出陽性的有45例，檢出率為23.32%；≥3d送檢的患兒共179例，HDN檢出陽性的有21例，檢出率為11.73%，兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.003＜0.05）。見表3。

表3 不同送檢時(shí)間下患兒血清學(xué)溶血三項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果表

3 討論

新生兒溶血病是新生兒中最常見的免疫性溶血性疾病之一[2]，其根本原因在于母嬰血型不合。胎兒從父親遺傳而來的抗原是母親沒有的，在妊娠時(shí)期，胎兒紅細(xì)胞通過胎盤進(jìn)入母體血循環(huán)，紅細(xì)胞上的抗原刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗體，并且該種抗體是與胎兒血型不相容的IgG免疫性血型抗體，其可通過胎盤進(jìn)入到胎兒血液循環(huán)中，與患兒紅細(xì)胞表面的抗原進(jìn)行互相結(jié)合，進(jìn)而導(dǎo)致胎兒紅細(xì)胞被大量破壞產(chǎn)生大量膽紅素而致病[6]。與之前使用的試管法進(jìn)行溶血三項(xiàng)的檢測(cè)相比，微柱凝集技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果判讀簡(jiǎn)單，診斷過程重復(fù)性更高等優(yōu)點(diǎn)，逐漸成為臨床診斷新生兒溶血病的首選方式[7-8]。我院于2018年2月起使用該檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行相關(guān)疾病的診斷。

目前實(shí)驗(yàn)室診斷新生兒溶血病主要依賴于直接抗人球蛋白試驗(yàn)、血清游離抗體試驗(yàn)、紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)。本次研究中，溶血三項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的陽性率分別為：直接抗人球蛋白試驗(yàn)1.4%，血清游離試驗(yàn)62.7%，紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)100%，這與謝楠楠[9]等人的研究結(jié)果一致。因此，對(duì)新生兒溶血癥進(jìn)行診斷時(shí)，三項(xiàng)檢查都具有重要的作用，其中敏感性最高的是釋放試驗(yàn)，這可能與溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的設(shè)計(jì)原理有關(guān)[10]。釋放試驗(yàn)因?yàn)榧t細(xì)胞的大量破壞，細(xì)胞膜上的IgG抗體被釋放出來，因此有較高的靈敏度，而直接試驗(yàn)因?yàn)榭乖芏仍谛律鷥杭t細(xì)胞上相對(duì)較低，吸附抗體能力較小，因此靈敏度較低，常常呈弱陽性或者陰性[10-11]。

本次研究發(fā)現(xiàn)男、女患兒的新生兒溶血病檢測(cè)陽性率分別為21.2%和13.4%，兩者之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.052＞0.05），無需考慮性別因素。此外，血清學(xué)溶血三項(xiàng)檢測(cè)的陽性檢出率與送檢時(shí)間有著密切聯(lián)系，在2天內(nèi)送檢，溶血三項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的陽性率為23.32%（45/193）；在3天及以上送檢的陽性率為11.73%（21/179），顯著低于2天內(nèi)送檢的陽性率（P=0.003＜0.05）。這與劉琛[12]等人的研究結(jié)果一致，他認(rèn)為HDN發(fā)生于胎兒期和新生兒期，胎兒期發(fā)生溶血所生成的膽紅素能迅速在母體的肝臟進(jìn)行代謝，故在患兒剛出生時(shí)常不表現(xiàn)為皮膚黃疸，但由于溶血在出生后仍然存在，而新生兒代謝膽紅素的能力相對(duì)不足，故高水平的血清膽紅素常出現(xiàn)于48h內(nèi)。此外，吳紅[13]、何柏霖[14]等人認(rèn)為這與肝脾臟的作用相關(guān)，隨著病情時(shí)間的延長(zhǎng)，致敏的紅細(xì)胞在肝臟和脾臟中逐漸被單核-巨噬細(xì)胞清除，使得游離的IgG抗體逐漸消失，其他IgG抗體則以抗原-抗體免疫復(fù)合物的形式存在，失去了其反應(yīng)原性而出現(xiàn)陰性的結(jié)果。

綜上所述，在血清溶血三項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果中，陽性檢測(cè)率位居第一的是紅細(xì)胞抗體釋放試驗(yàn)，第二的是血清游離抗體試驗(yàn)，最低的是直接抗人球蛋白試驗(yàn)。一旦發(fā)現(xiàn)母嬰血型不符，且臨床有癥狀或懷疑為新生兒溶血病的患兒，應(yīng)盡早進(jìn)行新生兒溶血三項(xiàng)試驗(yàn)檢測(cè)，以便早診斷、及時(shí)治療，避免帶來不可挽回的損失[15]。