孫婷婷，劉 洋，李卓柯，宗時宇，支文冰，狄志彪，李 曄，張 紅

陜西省中醫(yī)藥研究院，西安 710003

前列腺癌(prostate cancer)是發(fā)生于男性前列腺組織的一種惡性腫瘤，近年來隨著人口老齡化及飲食結(jié)構(gòu)的改變，前列腺癌在我國的發(fā)病率和死亡率呈明顯增高的趨勢，將成為危害我國男性健康的主要疾病[1]。前列腺癌的發(fā)病機制較為復雜，目前臨床對于前列腺癌的治療手段主要包括外科手術(shù)加術(shù)后放療，但傳統(tǒng)治療模式無法顯著提高前列腺癌患者的五年生存率，而藥物治療主要用于不能手術(shù)治療或晚期患者的保守治療，其顯著的不良反應限制了臨床治療效果且尚無有效的根治藥物[2,3]。因此，尋找新的有效的治療前列腺癌的特效藥物成為科學研究者的難題。

近年來，從天然產(chǎn)物中尋找高效低毒的抗癌活性成分逐漸成為研究的熱點，尋找抗前列腺癌的藥物或有效成分對臨床防治前列腺癌具有重要的指導意義。藥用植物因資源分布廣泛、種類繁多，是抗腫瘤制劑的優(yōu)勢來源。植物凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合特異性非免疫原性蛋白質(zhì)或糖蛋白，廣泛存在于多種植物中，能凝集紅細胞、癌細胞等各種細胞，其作為植物源性蛋白類物質(zhì)，具有明顯的抑制腫瘤細胞增殖和殺傷癌細胞的作用，其對正常細胞的毒害作用和副作用較化療藥物小很多，將其作為一類潛在的抗腫瘤藥物進行開發(fā)具有極廣闊的前景[4]。

黃精為百合科黃精屬植物黃精PolygonatumcyrtonemaHua.的干燥根莖。黃精藥用歷史悠久，療效確切，是一味重要的藥食兩用中藥，臨床主要用于治療陰虛燥咳、脾胃虛弱、腰膝酸軟等癥[5]。黃精主要含有多糖、皂苷、黃酮、蒽醌及氨基酸類等成分。前期研究發(fā)現(xiàn)，黃精中提取所得黃精凝集素PSL具有顯著的凝集活性，可抑制前列腺癌骨轉(zhuǎn)移PC3細胞的增殖和Warburg效應并通過降低HK2的表達抑制腫瘤細胞糖酵解[6]。目前，黃精凝集素對前列腺癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細胞LNCap的研究報道較少。本研究從黃精鮮藥材中提取分離得到一種黃精凝集素PCL-2，探究PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞凋亡的影響及相關(guān)抗腫瘤機制，為抗前列腺癌藥物黃精凝集素PCL-2的開發(fā)提供研究基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

新鮮黃精藥材采購自陜西省紅河谷地區(qū)，經(jīng)鑒定為百合科植物多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua.的新鮮根莖。人前列腺癌細胞LNCap(武漢普諾賽生命科技有限公司)。WST-1試劑盒、活性氧ROS試劑盒、BCA蛋白測定試劑盒(碧云天生物科技有限公司)；SDS-PAGE凝膠快速配制試劑盒、10×Tris甘氨酸蛋白電泳液、10×電轉(zhuǎn)移緩沖液(凱基生物技術(shù)有限公司)；蛋白Marker(美國Thermo Scientific公司)；5-氟尿嘧啶(5-FU)、20×TBST緩沖液、青鏈霉素混合液(100 ×)(北京索來寶科技有限公司)；0.45 μm PVDF膜(美國Millipore公司)；超敏ECL即用型化學發(fā)光試劑盒(博士德生物工程有限公司)；DMEM高糖培養(yǎng)基(美國Hyclone公司)；胎牛血清(上海依科賽生物制品有限公司)；多克隆抗體(美國Cell Signaling Technology公司)。硫酸銨、甲苯、吡啶、甲醇等試劑(國藥化學試劑有限公司)，所用水為純凈水。

1.2 實驗儀器

T100型梯度PCR儀、CFX connect實時熒光定量PCR儀、ChemiDox XRS凝膠成像系統(tǒng)(美國Bio-Rad公司)；T10 basic高速組織勻漿機(德國IKA公司)；掃描電鏡(ΣIGMA)(德國ZEISS公司)；Infinite M200 Pro多功能酶標儀(帝肯(上海)貿(mào)易有限公司)；HS840超凈工作臺(天津泰斯特儀器有限公司)、Herocell 180二氧化碳培養(yǎng)箱(上海潤度生物科技有限公司)；C-P8研究型倒置顯微鏡(意大利OPTIKAGO公司)；YXQ-75SII立式高壓滅菌鍋(上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司)；DW-86L288超低溫冰箱(青島海爾股份有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 黃精凝集素PCL-2的制備

取新鮮黃精藥材500 g，低溫勻漿，按比例加入1 000 mL Tris-HCl緩沖液(pH 8.0)，室溫下攪拌提取6 h，4 ℃放置24 h，10 000 rpm離心15 min，上清液加適量硫酸銨使飽和度為30%，攪拌4 h，4 ℃放置24 h，10 000 rpm離心15 min，上清液繼續(xù)加入硫酸銨沉淀使飽和度為80%，攪拌4 h，4 ℃放置24 h，10 000 rpm離心15 min，沉淀用水復溶，3 500 Da透析3天，凍干，即得黃精凝集素PCL。采用DEAE-52纖維素陰離子交換色譜和葡聚糖凝膠Sephadex G-100分子篩柱層析依次對PCL粗品進行分離純化，結(jié)合紅細胞凝集實驗確定純化組分黃精凝集素PCL-2。采用高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)測定PCL-2的分子量，采用聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定PCL-2純度。

1.3.2 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞活性的影響

1.3.2.1 人前列腺癌LNCap細胞培養(yǎng)

從液氮罐中迅速取出待復蘇的人前列腺癌LNCap細胞，在37 ℃水浴鍋中迅速解凍復蘇，用新鮮的RPMI-1640培養(yǎng)液(含10%胎牛血清和1%雙抗)輕微吹打均勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，置于37 ℃、CO2濃度為5%的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，待細胞貼壁率達到80%～90%時對細胞按照以1∶2～1∶3的比例進行傳代2～3代，備用。

1.3.2.2 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞增殖的影響

采用WST-1法檢測LNCap細胞增殖。取對數(shù)生長期的LNCap細胞，調(diào)整細胞密度為1×105個/mL，接種于96孔板培養(yǎng)12 h，待細胞正常貼壁生長后，加入100 μL用RPMI-1640培養(yǎng)液配制的不同濃度PCL-2樣品(0～100 μg/mL)，以不含血清的RPMI-1640培養(yǎng)液作為空白對照(Con)，以5-FU作為陽性對照(20 μg/mL)，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，每個濃度設置5個復孔。每孔加入10 μL WST-1標記溶液，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，用酶標儀于450 nm處測定吸光值，按照公式：細胞活力=Abs樣品/Abs對照×100%計算細胞增殖率。

另取對數(shù)生長期的LNCap細胞，調(diào)整細胞密度為1×106個/mL，接種于12孔板，每孔1.5 mL，培養(yǎng)12 h后，加入1.5 mL用RPMI-1640培養(yǎng)液配制的不同濃度PCL-2樣品(0、100 μg/mL)，以不含血清的RPMI-1640培養(yǎng)液作為空白對照，以5-FU作為陽性對照(20 μg/mL)，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)并拍照。

1.3.2.3 集落形成實驗

取對數(shù)生長期的LNCap細胞，調(diào)整細胞密度為3×106個/mL，將細胞接種于6孔板，每孔2.5 mL，置于5% CO2、37 ℃細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后棄上清，用PBS清洗細胞1～2次，每次2 mL，棄PBS，加入2.5 mL用RPMI-1640培養(yǎng)液配制的不同濃度PCL-2(0～100 μg/mL)溶液，以不含血清的RPMI-1640培養(yǎng)液作為空白對照，以5-FU作為陽性對照(20 μg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)7天以形成集落(每個濃度設置3個復孔)，7天后處理細胞，每孔加入1.0 mL 4%的多聚甲醛，4 ℃條件下固定30 min，棄多聚甲醛，用PBS清洗三次，每次2 mL，棄PBS，每孔加入500 μL結(jié)晶紫溶液，室溫下染色20 min，PBS清洗三次，相機拍照觀察染色情況，顯微鏡下計數(shù)，按照下式計算集落形成率：集落形成率=集落數(shù)/接種細胞數(shù)×100%。

1.3.2.4 活性氧水平(ROS)檢測

采用2,7-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)熒光探針法[7]測定不同濃度PCL-2對LNCap細胞內(nèi)ROS水平的影響。取對數(shù)期生長的LNCap細胞，調(diào)整細胞濃度為1×106個/mL，接種于24孔板中，每孔1 mL，于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后，棄上清液，每孔加入1 mL PBS洗滌細胞，棄PBS，分別加入1 mL基礎培養(yǎng)基、5-FU(20 μg/mL)及不同濃度(1～100 μg/mL)的PCL-2水溶液，每組設置3個復孔。培養(yǎng)24 h后棄去上清液，每孔用1 mLPBS洗滌，棄PBS，每孔避光加入500 μL DCFH-DA溶液，37 ℃條件下孵育20 min后棄染色液，用1 mL PBS清洗1～2次，棄PBS，向每孔中加入150 μL RIPA細胞裂解液(每100 μL細胞裂解液含1 μL苯甲基磺酰氟)，置冰上裂解15～20 min，用刮鏟小心刮取細胞，轉(zhuǎn)移至1.5 mL無菌離心管中，于4 ℃下10 000 rpm離心10 min，吸取上清液50 μL轉(zhuǎn)移至96孔板中，采用熒光酶標儀對細胞中ROS含量進行定量分析，以未經(jīng)PCL-2樣品處理細胞的裂解液為空白對照，在激發(fā)光488 nm，散射光525 nm發(fā)射波長處檢測細胞內(nèi)的熒光強度，同時按照BCA蛋白測定試劑盒說明書測定每個樣品蛋白含量，ROS含量用每毫克蛋白總熒光強度表示。

1.3.3 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞凋亡相關(guān)機制研究

1.3.3.1 PCL-2對LNCap細胞內(nèi)相關(guān)基因mRNA表達的影響

取對數(shù)生長期LNCap細胞，調(diào)整細胞密度為1×106個/mL，接種至無菌24孔板，每孔1 mL，培養(yǎng)12 h，待細胞正常貼壁生長后，分別加入不同濃度(1～100 μg/mL)的PCL-2各組分樣品溶液，以空白培養(yǎng)基作為空白對照，5-FU(20 μg/mL)作為陽性對照，培養(yǎng)24 h，每組濃度設置3個復孔。采用RNA提取試劑盒提取各組細胞RNA后反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以GAPDH為內(nèi)參進行實時熒光定量PCR檢測。引物序列如表1所示。

表1 實時熒光定量PCR引物序列Table 1 Real-time PCR primer sequence

1.3.3.2 Western blot法檢測PCL-2對LNCap細胞內(nèi)相關(guān)蛋白表達的影響

取對數(shù)生長期LNCap細胞，調(diào)整細胞密度為3×106個/mL，接種至6孔板，每孔2.5 mL，培養(yǎng)12 h，待細胞正常貼壁生長后，分別加入不同濃度(1～100 μg/mL)的PCL-2樣品溶液，以空白培養(yǎng)基作為空白對照，5-FU(20 μg/mL)作為陽性對照，每組濃度設置3個復孔，培養(yǎng)24 h后，收集提取總蛋白，利用BCA蛋白定量法對總蛋白進行定量。用SDS-PAGE凝膠分離蛋白質(zhì)樣品，電泳后，凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用5%脫脂奶粉孵育2 h，一抗孵育過夜，將蛋白質(zhì)樣品與二抗孵育2 h，采用ECL進行顯影后放入Bio-Rad凝膠成像儀中觀察并拍照，用凝膠圖像處理系統(tǒng)Quantity One軟件分析目標條帶的密度值。

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 PCL-2制備

PCL-2得率為0.19%，高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)結(jié)果表明PCL-2分子量為18.89×103Da，純度為97.8%。

2.2 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞活性的影響

2.2.1 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞增殖的影響

如圖1A所示，空白對照組人前列癌LNCap細胞呈梭形貼壁生長，與空白組比較，陽性藥物5-FU組細胞形態(tài)喪失，細胞呈皺縮成小球狀，細胞大量死亡；PCL-2低劑量組(1 μg/mL)部分細胞體積縮小呈球狀，細胞有死亡趨勢；PCL-2高劑量組(100 μg/mL)細胞皺縮成小球狀，偶見有梭形細胞，細胞大量死亡。可見，PCL-2低劑量(1 μg/mL)時就能誘導LNCap細胞死亡。由圖1B可知，在1～100 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，與空白組相比，PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞增殖有顯著的抑制作用并呈濃度依賴性；當PCL-2濃度為50 μg/mL和100 μg/mL時，LNCap細胞活力僅為空白組的42.56%和22.29%；陽性藥物組細胞活力為(19.16±10.41)%。由結(jié)果可知，PCL-2顯著抑制LNCap細胞增殖(P<0.01)。

圖1 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞活力的影響Fig.1 Effect of PCL-2 on the cell viability of human prostate cancer LNCap s，n ≥ 3)注：A：PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞形態(tài)的影響(×200)；B：PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞活力的影響(與空白組相比，** P <0.01，*** P <0.001)。Note:A:The effect of PCL-2 on the morphology of human prostate cancer LNCap cells (×200);B:The effect of PCL-2 on the cell viability of human prostate cancer LNCap cells (compared with control,** P <0.01,*** P <0.001).

2.2.2 集落形成實驗

如圖2A所示，正常對照組LNCap細胞呈現(xiàn)藍紫色，說明培養(yǎng)7天內(nèi)細胞能夠正常生長。陽性對照組細胞顏色變淡，細胞有脫落的現(xiàn)象。PCL-2組細胞數(shù)量隨著給藥濃度增加藍紫色顏色逐漸變淺，當濃度為100 μg/mL時，出現(xiàn)細胞大量脫落，幾乎沒有藍紫色出現(xiàn)。由圖2B可知，與空白組相比，經(jīng)不同濃度PCL-2處理后的LNCap細胞，細胞集落形成率顯著降低(P<0.05)，并呈濃度依賴性，當PCL-2濃度為50 μg/mL，細胞集落形成率為33.59%，與陽性藥物組比較無顯著性差異(29.64%，P>0.05)，結(jié)果進一步表明PCL-2具有抑制LNCap細胞增殖的作用。

圖2 集落形成實驗注：A：PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞集落形成的影響；B：LNCap細胞集落形成率(與空白組相比，** P <0.01，*** P <0.001)。Note:A:The effect of PCL-2 on the colony formation of human prostate cancer LNCap cells;B:The colony formation rate of LNCap cells(compared with control,** P <0.01,*** P <0.001).

2.2.3 活性氧水平(ROS)檢測

如圖3所示，與空白對照組相比，PCL-2各劑量組細胞中ROS含量呈劑量依賴趨勢(P<0.01)，在1～100 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，ROS含量分別為(122.18±5.67)%、(138.64±10.22)%、(160.62±10.34)%及(182.87±11.48)%，陽性組中ROS含量為(215±9.88)%。由結(jié)果可知，PCL-2顯著促進LNCap細胞中ROS生成，誘導細胞凋亡。

圖3 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞中ROS的影響Fig.3 The effect of PCL-2 on ROS in human prostate 注：與空白組相比，** P <0.01，*** P <0.001。Note:Compared with control,** P <0.01,*** P <0.001.

2.2.4 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞凋亡的相關(guān)機制研究

2.2.4.1 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞中相關(guān)基因mRNA表達的影響

如圖4A、4B所示，在1～100 μg/mL濃度范圍內(nèi)，與空白組相比，PCL-2各劑量組Bax基因mRNA表達量隨濃度升高而顯著增加(P<0.01)，當PCL-2樣品濃度為100 μg/mL時，細胞中Bax表達量為(178.43±12.77)%，陽性組Bax表達量為(199.34±6.96)%；在濃度1～100 μg/mL范圍內(nèi)，與空白組相比，PCL-2各劑量組Bcl-2基因mRNA表達量隨濃度升高而顯著降低(P<0.01)，其表達量分別為(88.50±9.17)%、(80.45±6.75)%、(66.59±7.98)%及(56.98±12.09)%，陽性組Bcl-2基因mRNA表達量為(50.64±11.03)%。如圖4C、4D所示，在濃度1～100 μg/mL范圍內(nèi)，與空白組相比，PCL-2各劑量組Caspase-3、Caspase-9基因mRNA表達量隨濃度升高而顯著增加(P<0.01)，當濃度為200 μg/mL時，LNCap細胞中Caspase-3、Caspase-9基因mRNA表達量分別為(340.42±16.61)%和(225.92±8.98)%。由結(jié)果可知，PCL-2通過上調(diào)Bax、Caspase-3及Caspase-9基因mRNA表達，下調(diào)Bcl-2基因mRNA表達水平誘導人前列腺癌LNCap細胞凋亡。

圖4 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞中Bax,Bcl-2,Caspase-3 and Caspase-9基因mRNA表達的影響 s，n ≥ 3)Fig.4 The effect of PCL-2 on the mRNA expression of Bax,Bcl-2,Caspase-3 and Caspase-9 genes in human prostate cancer LNCap s,n ≥ 3)注：與空白組相比，** P <0.01，*** P <0.001。Note:Compared with control,** P <0.01,*** P <0.001.

2.2.4.2 Western blot法檢測PCL-2對LNCap細胞中相關(guān)蛋白表達的影響

如圖5A、5B所示，與空白組相比，當PCL-2濃度為10、100 μg/mL，Bcl-2蛋白表達水平顯著下調(diào)并呈一定的濃度依賴性(P<0.01)，陽性組Bcl-2蛋白表達水平為最低。PCL-2顯著上調(diào)Bax蛋白表達水平且Bax/Bcl-2比值顯著增加(P<0.01)，當濃度為100 μg/mL時，Bax/Bcl-2比值相比于空白組增加了77.18%。在10～100 μg/mL濃度范圍內(nèi)，PCL-2顯著上調(diào)活化Caspase-3和活化Caspase-9蛋白表達量(P<0.01)，當PCL-2濃度為100 μg/mL時，活化Caspase-3和活化Caspase-9蛋白表達量分別為空白組的3.19倍和2.06倍。由結(jié)果可知，PCL-2可通過下調(diào)Bcl-2蛋白表達，上調(diào)Bax、活化Caspase-3和活化Caspase-9蛋白表達誘導人前列腺癌LNCap細胞凋亡。

圖5 PCL-2對人前列腺癌LNCap細胞中相關(guān)蛋白表達的影響Fig.5 Effect of PCL-2 on the expression of related proteins in human prostate cancer LNCap s，n ≥ 3)注：與空白組相比，** P <0.01，***P <0.001。Note:Compared with control,** P <0.01,*** P <0.001.

3 討論與結(jié)論

前列腺癌在我國發(fā)病率逐年升高，是引起男性死亡的第二大腫瘤殺手[8]。目前，國內(nèi)外在前列腺癌研究方面已經(jīng)做了大量的工作，研究表明前列腺癌LNCap細胞系廣泛用于前列腺癌發(fā)展轉(zhuǎn)移的分子機制、藥物篩選及藥物評價等研究，已成為目前研究前列腺癌最常用的細胞系[9]。黃精凝集素PCL-2為從黃精鮮藥材中提取所得的一種糖蛋白類成分，PCL-2對前列腺癌LNCap細胞增殖和凋亡的作用機制未見有深入研究。本研究中WST-1實驗和集落形成實驗結(jié)果表明PCL-2顯著抑制LNCap細胞增殖并呈濃度依賴性。

細胞凋亡是細胞維持穩(wěn)定的內(nèi)部環(huán)境的機制之一，誘導腫瘤細胞凋亡已成為抗腫瘤研究的熱點，同時也是評價抗癌藥物有效性的重要指標之一[10]。細胞凋亡受多種基因調(diào)控，是一個復雜且涉及多條通路的過程。ROS是由氧直接或間接轉(zhuǎn)變的氧自由基及其衍生物，在細胞信號轉(zhuǎn)導、維持機體平衡起重要的作用。線粒體為ROS產(chǎn)生的主要部位，ROS累積引起線粒體膜電位的崩解進而觸發(fā)細胞凋亡，ROS聚集被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應過程中最早發(fā)生的事件之一[11,12]。Bcl-2蛋白家族是一個特殊的蛋白家族，其中Bad、Bid及Bax具有促進細胞凋亡的作用，而Bcl-2、Bcl-w具有抑制細胞凋亡的作用。Bcl-2是一種內(nèi)膜蛋白，在多種腫瘤細胞中表達，可通過阻止細胞色素C的釋放，增強線粒體膜電位，抑制鈣離子釋放，進而發(fā)揮抗凋亡作用；Bax的作用與 Bcl-2相反，通過促進細胞色素C的釋放，激活細胞凋亡效應因子Caspase，改變細胞膜通透性進而促進細胞凋亡，研究表明細胞中Bcl-2 和Bax比例的改變可調(diào)節(jié)細胞凋亡[13,14]。Caspase家族與細胞凋亡密切相關(guān)，被認為是細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導的共同通路，其中Caspase-3是凋亡的執(zhí)行因子，該蛋白的活化是細胞凋亡進入不可逆階段的標志[15,16]。有研究發(fā)現(xiàn)ROS誘導癌細胞凋亡最常見的方式是由Caspases家族誘導的程序性細胞死亡，除此之外，ROS可通過下調(diào)Bcl-2以及上調(diào)Bax和Bad誘導細胞發(fā)生凋亡[17,18]。研究發(fā)現(xiàn)利妥昔單抗通過抑制Bcl-2蛋白表達和激活p38-MAPK信號通路導致ROS的累積進而促進細胞凋亡[19]。本研究采用2,7-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)熒光探針法測定細胞中ROS水平，研究表明PCL-2能顯著促進LNCap細胞中ROS的產(chǎn)生和積累，并呈明顯的劑量依賴性。LNCap細胞經(jīng)PCL-2作用后，隨著給藥濃度升高，Bax基因mRNA和蛋白表達水平上調(diào)，Bcl-2基因mRNA和蛋白表達水平降低，活化Caspase-3和活化Caspase-9蛋白表達量增加。由此可見，LNCap細胞中ROS累積引起B(yǎng)ax和Bcl-2蛋白水平變化，進而啟動Caspase級聯(lián)反應，激活Caspase-9和Caspase-3，從而誘導LNCap細胞凋亡。

黃精在我國資源豐富，主要分布于陜西、云南、貴州、四川等地，為陜西省道地藥材之一。黃精凝集素PCL-2提取分離純化方法簡單且得率高，可用于大量制備樣品。由本研究結(jié)果可知黃精凝集素PCL-2具有顯著誘導人前列腺癌LNCap細胞凋亡作用，具有開發(fā)為抗前列腺癌藥物的潛力，本研究為臨床應用黃精凝集素治療前列腺癌提供了新的線索。本文僅在體外細胞水平對PCL-2抗人前列腺癌活性及機制進行了初步探索，其具體作用機制以及在體內(nèi)動物水平抗腫瘤活性還需要進一步研究。