張松保，孔令婕，谷 巍，李 超，邱蓉麗，巢建國(guó)，裴凌峰，郭彥芳

1南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京210023；2正大天晴藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，南京 211122； 3江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過(guò)程協(xié)同創(chuàng)新中心，南京 210023；4濟(jì)川藥業(yè)集團(tuán)有限公司，泰州 225441

蒲公英(TaraxacummongolicumHand.-Mazz.)為菊科蒲公英屬多年生草本植物，味苦、甘，性微寒，歸肝、胃經(jīng)，具清熱解毒、消腫散結(jié)和利尿通淋之功效。在中醫(yī)上多用于治療疔瘡腫毒、乳癰、瘰疬、目赤腫痛、咽痛、肺癰、腸癰、濕熱黃疸和熱淋澀痛等癥[1]。蒲公英含有豐富的酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、萜類(lèi)等多類(lèi)物質(zhì)，現(xiàn)代研究表明，蒲公英具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理作用[2-4]。

近年來(lái)，癌癥已久居我國(guó)致死病因的首位，嚴(yán)重危害人民的健康。蒲公英消腫散結(jié)功效常被認(rèn)為可以用來(lái)治療腫瘤?，F(xiàn)代研究表明蒲公英具有一定的抗腫瘤效果，能夠有效抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖。Takasaki等[5]進(jìn)行了蒲公英根提取物抗小鼠皮膚腫瘤研究，結(jié)果表明蒲公英提取物具有有效的抑制作用。Zhan等[6]研究發(fā)現(xiàn)蒲公英提取物可能有降低胃癌細(xì)胞p53的陽(yáng)性表達(dá)的能力。Zhu等[7]進(jìn)行了蒲公英根提取物對(duì)胃癌的治療作用，發(fā)現(xiàn)蒲公英根提取物可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移對(duì)胃癌進(jìn)行治療。還有多名學(xué)者研究結(jié)果均表明蒲公英具有良好的抗腫瘤作用[8,9]。綜上所述，蒲公英具有顯著的抗腫瘤活性，可用于開(kāi)發(fā)抗腫瘤藥物。

中藥具有成分多樣，作用靶點(diǎn)眾多，并且不同靶點(diǎn)間還存在協(xié)同作用，如何闡述中藥的作用機(jī)制，成為了阻礙中藥發(fā)展的重大問(wèn)題。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是采用高通量篩選，運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)可視化及網(wǎng)絡(luò)分析等多種技術(shù)，用以揭示藥物、靶點(diǎn)、疾病間復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，從多維度理解藥物的作用機(jī)制，這為中藥研究中的多成分多靶點(diǎn)作用機(jī)制研究提供新的研究思路，近年來(lái)被廣泛用于中藥研究中，而蒲公英相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。蒲公英中化學(xué)成分眾多，采取傳統(tǒng)的分析手段對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分析，分析步驟繁瑣、時(shí)間長(zhǎng)[10]。HPLC-Q-TOF-MS/MS具有高分辨率、高分離度、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，該方法先通過(guò)液相色譜對(duì)蒲公英中的化合物進(jìn)行分離，后通過(guò)質(zhì)譜對(duì)分離的化合物進(jìn)行分析，最后根據(jù)質(zhì)譜信息對(duì)化合物進(jìn)行定性，實(shí)現(xiàn)中藥成分的快速分析。

因此，本研究首先通過(guò)采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)，對(duì)蒲公英化學(xué)成分快速分析。在此基礎(chǔ)上，充分利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析技術(shù)，從藥物、化學(xué)成分、靶點(diǎn)、疾病間相互作用的整體性和系統(tǒng)性出發(fā)，探究蒲公英的抗癌作用機(jī)制，為蒲公英在癌癥預(yù)防及治療研究中提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

LC-20ADXR高效液相色譜儀(日本SHIMADZU公司)；Triple-TOF5600質(zhì)譜儀(美國(guó)AB SCIEX公司)；TD5002A電子天平(天津市天馬儀器廠(chǎng))；KQ-500B超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；3-18K離心機(jī)(德國(guó)Sigma公司)；Q Direct8超純水儀(美國(guó)MerckMilli公司)。甲醇(色譜純)中國(guó)TEDIA公司、甲酸(色譜純)上海aladdin公司、乙腈(色譜純)中國(guó)Meker公司：超純水自制。

木犀草素對(duì)照品(批號(hào)：JBZ-0772)、異綠原酸A對(duì)照品(2450-53-5；批號(hào)：JBZ-1451)、異鼠李素對(duì)照品(批號(hào)：JBZ-1422)、綠原酸對(duì)照品(批號(hào)：lw18022809)、咖啡酸對(duì)照品(批號(hào)：lw18013006)、菊苣酸對(duì)照品(批號(hào)：lw18011501)、蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：Iw18012501)。其中，木犀草素、異綠原酸A、異鼠李素(南京金益柏生物科技有限公司)；綠原酸、咖啡酸、菊苣酸、蘆丁(南京良緯生物科技有限公司)。實(shí)驗(yàn)選取產(chǎn)于甘肅的蒲公英藥材，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)谷巍教授鑒定為菊科植物蒲公英(TaraxacummongolicumHand.-Mazz.)干燥全草，相關(guān)樣品已留樣存于南京中醫(yī)藥大學(xué)植物標(biāo)本館。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液制備

取蒲公英藥材干燥樣品，粉碎，過(guò)60目篩。精密稱(chēng)取樣品粉末1.0 g，置50 mL具塞錐形瓶中，加入60%的甲醇30 mL，稱(chēng)重。超聲60 min(功率500 W，頻率40 kHz)。取出，放置冷卻后，補(bǔ)足失重。取樣品溶液1 mL置于1.5 mL離心管中，離心(轉(zhuǎn)速12 000 rpm)10 min，吸取上清液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，即得。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：島津ODS C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，洗脫程序：乙腈(A)和0.1%甲酸水(B)。梯度洗脫程序：0～2 min，5%→10%A；2～20 min，10%→21%A；20～36 min，21%→25%A；36～44 min，25%→40%A；44～55 min，40%→50%A。流速1 mL/min；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

1.2.3 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子模式采集數(shù)據(jù)；質(zhì)量掃描范圍m/z50～1 500；噴霧電壓4.5 kV；霧化氣壓力60 psi；輔助氣壓力60 psi；氣簾氣壓力40 psi；離子源溫度600 ℃；錐孔電壓為100 V；碰撞室射出電壓40 eV。

1.3 數(shù)據(jù)處理

1.3.1 化學(xué)成分鑒定

通過(guò)Peakview1.2軟件對(duì)得到的圖譜文件進(jìn)行分析，獲得相應(yīng)色譜峰對(duì)應(yīng)化合物的精確相對(duì)分子質(zhì)量及二級(jí)質(zhì)譜信息，通過(guò)查詢(xún)相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)及文獻(xiàn)并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)化合物進(jìn)行定性分析，然后在Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)中查詢(xún)相關(guān)成分的Canonical SMILES號(hào)。

1.3.2 蒲公英作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

通過(guò)在SwissADME數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.swissadme.ch/)中輸入相關(guān)化合物的Canonical SMILES號(hào)，選取胃腸吸收度高，類(lèi)藥性?xún)?yōu)的化合物作為目標(biāo)化合物，再將目標(biāo)化合物的Canonical SMILES號(hào)上傳到SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.swisstargetprediction.ch/)，選擇物種為“Homo Sapiens”，篩選其中probability>0.7的靶點(diǎn)為目標(biāo)靶點(diǎn)。

以癌癥(cancer)為關(guān)鍵字在Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)中查詢(xún)與癌癥相關(guān)的靶點(diǎn)信息，刪去其中relevance score<1的靶點(diǎn)，剩余作為癌癥的作用靶點(diǎn)。再把化合物的目標(biāo)靶點(diǎn)和癌癥的作用靶點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)，篩選出蒲公英主要活性成分抗癌的潛在靶點(diǎn)。

1.3.3 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建(PPI)及核心靶點(diǎn)篩選

將所得蒲公英抗癌的潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)(https://string-db.org/)，選擇“Multiple protein”，物種選擇為“Homo Sapiens”進(jìn)行分析，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，獲得PPI網(wǎng)絡(luò)圖，并根據(jù)節(jié)點(diǎn)連接數(shù)目degree值，篩選出核心靶點(diǎn)。

1.3.4 GO功能與模塊分析、KEGG富集通路分析

將比對(duì)所得的靶點(diǎn)輸入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)(https://david.ncifcrf.gov/)中進(jìn)行蒲公英抗癌癥靶點(diǎn)GO分類(lèi)富集分析和KEGG通路富集分析。通過(guò)FDR值篩選相關(guān)通路，并通過(guò)在線(xiàn)繪圖平臺(tái)(http://www.ehbio.com/ImageGP/)進(jìn)行可視化繪圖。

1.3.5 成分、靶點(diǎn)、通路作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。

將分析得到的靶點(diǎn)、信號(hào)通路和蒲公英成分相對(duì)應(yīng)，運(yùn)用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)模型。

2 結(jié)果與分析

2.1 化學(xué)成分鑒定

按“1.4.1”項(xiàng)下方法，對(duì)蒲公英的化學(xué)成分進(jìn)行分析，總離子流圖(TIC)見(jiàn)圖1，鑒定出其中29個(gè)化合物(見(jiàn)表1)。這些化合物主要包括有機(jī)酸類(lèi)、黃酮類(lèi)和、香豆素類(lèi)和萜類(lèi)。蒲公英含有的有機(jī)酸類(lèi)有沒(méi)食子酸、香莢蘭酸、色氨酸、酒石酸、綠原酸、原兒茶醛、對(duì)羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯乙酸、咖啡酸、阿魏酸、3，5二羥基苯甲酸、苯甲酸、蘋(píng)果酸、異綠原酸A、菊苣酸、異綠原酸B。

表1 蒲公英化學(xué)成分鑒定信息Table 1 Identification of compounds from Taraxacum mongolicum

圖1 蒲公英樣品總離子流圖Fig.1 Total ion current diagram of Taraxacum mongolicum sample

酚酸物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定以峰6、峰11為例。峰6m/z353.086 9[M-H]-，數(shù)據(jù)庫(kù)匹配出的分子式為C16H18O9，二級(jí)質(zhì)譜圖中(見(jiàn)圖2A)，有奎寧酸特征碎片離子m/z191.054 6[M-H-caffeoyl]-，結(jié)合文獻(xiàn)[11]及標(biāo)準(zhǔn)品初步判斷為綠原酸。峰11m/z179.034 8[M-H]-，數(shù)據(jù)庫(kù)匹配出的分子式為C9H8O4，二級(jí)質(zhì)譜圖(見(jiàn)圖2B)中有特征碎片離子m/z135.043 2[M-H-CO2]-和m/z134.035 7[M-H-CHO2]-，結(jié)合文獻(xiàn)[12]及標(biāo)準(zhǔn)品判斷該成分為咖啡酸。

蒲公英含有的黃酮類(lèi)物質(zhì)有異葒草素、蘆丁、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-半乳糖醛酸苷、木犀草素、槲皮素、芹菜素、異鼠李素、白楊素。黃酮類(lèi)物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定以峰25、峰27為例。峰25m/z285.034 9，數(shù)據(jù)庫(kù)匹配出分子式為C15H10O6，二級(jí)質(zhì)譜圖(見(jiàn)圖2C)中發(fā)現(xiàn)m/z151.003 6[M-H-C8H6O2]-、m/z133.029 9[M-H-C7H4O4]-兩個(gè)典型的黃酮C環(huán)裂解碎片離子峰，結(jié)合文獻(xiàn)[13]及標(biāo)準(zhǔn)品判斷化合物為木犀草素。峰27m/z269.004 9[M-H]-，數(shù)據(jù)庫(kù)匹配出的分子式為C15H10O5，二級(jí)質(zhì)譜圖中，此物質(zhì)在m/z269處產(chǎn)生大量[M-H]-，并在m/z151.002 6[M-H-C8H6O]-和m/z117.033 6[M-H-C7H4O4]-處存在與木犀草素相同裂解方式的特征碎片離子，結(jié)合文獻(xiàn)[14]初步判斷為芹菜素。

圖2 綠原酸(A)、咖啡酸(B)、木犀草素(C)和芹菜素(D)的二級(jí)質(zhì)譜Fig.2 The secondary mass spectra of chlorogenic acid (A),caffeic acid (B),luteolin (C)and apigenin (D)

此外蒲公英中還鑒定出秦皮甲素、秦皮乙素兩個(gè)香豆素類(lèi)成分及萜類(lèi)成分蒲公英酸-1′-β-D-葡萄糖苷。

續(xù)表1(Continued Tab.1)

2.2 活性成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

按“1.4.2”項(xiàng)下方法對(duì)上述29個(gè)化合物進(jìn)行分析，通過(guò)swissADME數(shù)據(jù)庫(kù)分析，篩選出17個(gè)化合物。進(jìn)一步在Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選，符合篩選條件的化合物有槲皮素、木犀草素、芹菜素、白楊素、咖啡酸、異鼠李素、沒(méi)食子酸、對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、3，5-二羥基苯甲酸，這些化合物涉及93條相關(guān)靶點(diǎn)信息。在Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)以癌癥(cancer)為關(guān)鍵詞，篩選得到14 701條癌癥相關(guān)靶點(diǎn)，將篩選得到的癌癥相關(guān)靶點(diǎn)與藥物靶點(diǎn)進(jìn)行比對(duì)，共計(jì)得到84個(gè)共有靶點(diǎn)。

2.3 核心靶點(diǎn)篩選和蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

按“1.4.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，結(jié)果如圖3所示，圖中共有82個(gè)節(jié)點(diǎn)，393條邊，平均節(jié)點(diǎn)度值為8.93。選取節(jié)點(diǎn)度值前30繪制柱狀圖(見(jiàn)圖4)，以?xún)杀镀骄戎岛Y選核心靶點(diǎn)，即度值大于17.86的靶點(diǎn)為核心靶點(diǎn)，如圖4所示，包括AKT1、EGFR、SRC、ESR1、PTGS2、MMP9、KDR、MMP2、PIK3R1共9個(gè)靶點(diǎn)。

圖3 靶點(diǎn)間相互作用網(wǎng)絡(luò)Fig.3 Interaction network between targets注：圖中節(jié)點(diǎn)表示作用靶點(diǎn)，顏色表示靶點(diǎn)度值，紅色越深靶點(diǎn)度值越高，藍(lán)色越深度值越低。Note:The node in the figure represents the target point,and the color represents the value of the target point.The deeper the red,the higher the target value,and the lower the blue,the lower the depth value.

圖4 蒲公英治療癌癥的核心靶點(diǎn)(排名前30)Fig.4 Taraxacum mongolicum’s core target for cancer treatment (top 30)

2.4 GO分類(lèi)富集分析

將蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)中的82個(gè)蛋白靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行GO分類(lèi)富集分析，選取其中FDR<0.05的通路。其中生物過(guò)程(biological process，BP)52條，細(xì)胞成分(cellular component，CC)7條，分子功能(molecular function，MF)38條。根據(jù)FDR選擇BP、CC、MF富集前10個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行可視化并生成氣泡圖(見(jiàn)圖5)。從圖中可以看出在生物過(guò)程層面主要對(duì)氧化-還原、負(fù)調(diào)控凋亡、蛋白質(zhì)自磷酸化、蛋白質(zhì)磷酸化、細(xì)胞增殖、肽絲氨酸磷酸化等過(guò)程影響較大；在細(xì)胞成分層面主要對(duì)細(xì)胞質(zhì)膜、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、胞外外泌體、細(xì)胞外間隙等部位影響較大；在分子功能層面，主要對(duì)ATP結(jié)合、蛋白激酶活性、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、酶結(jié)合、蛋白酪氨酸激酶活性、激酶活性等分子功能影響較大。

圖5 GO富集分析氣泡圖(排名前10)Fig.5 Bubble diagram of GO analysis (top 10)

2.5 KEGG通路富集分析

將蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)中的82個(gè)蛋白靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析，以FDR<0.05為篩選條件，得到與癌癥相關(guān)的信號(hào)通路共計(jì)24條，對(duì)這些通路繪制可視化氣泡圖(見(jiàn)圖6)。從圖中可以看到相關(guān)通路信息，其中包括癌癥通路、癌癥蛋白聚糖、PI3K-Akt信號(hào)通路、局灶粘連、癌癥中的MicroRNAs、癌癥轉(zhuǎn)錄失調(diào)、膀胱癌等多條癌癥相關(guān)通路。

2.6 蒲公英活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)模型

將富集得到的24條通路對(duì)應(yīng)蒲公英抗癌的靶點(diǎn)及成分，構(gòu)建“活性成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)模型(見(jiàn)圖7)。該網(wǎng)絡(luò)圖中包括116個(gè)節(jié)點(diǎn)，634條邊，其中10個(gè)紅色三角形節(jié)點(diǎn)表示蒲公英中的活性成分，82個(gè)綠色正方形節(jié)點(diǎn)表示潛在靶點(diǎn)、24個(gè)黃色菱形節(jié)點(diǎn)表示信號(hào)通路。成分中，槲皮素的度值最高為59；后面依次為木犀草素28、芹菜素26，表明其具有較強(qiáng)的抗癌作用。通路節(jié)點(diǎn)度值中，癌癥途徑(hsa05200)、癌癥中的蛋白多糖(hsa05205)、PI3K-Akt信號(hào)通路(hsa04151)、腫瘤中的MicroRNAs(hsa05206)、局灶粘連(hsa04510)等排名靠前，推測(cè)其相關(guān)通路是蒲公英抗癌作用的主要通路。

圖7 蒲公英“活性成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)Fig.7 Taraxacum mongolicum “active ingredient-target-pathway”network注：圖中紅色三角形節(jié)點(diǎn)表示活性成分；綠色正方形節(jié)點(diǎn)表示潛在靶點(diǎn)；黃色菱形節(jié)點(diǎn)表示信號(hào)通路。Note:The red triangle node in the figure represents the active ingredient;The green square node represents the potential target;The yellow diamond node represents the signal pathway.

3 討論與結(jié)論

HPLC-Q-TOF聯(lián)用技術(shù)具有高分辨率、高通量及高靈敏度等特點(diǎn)，結(jié)合文獻(xiàn)和相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)，可以較為準(zhǔn)確且快速對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，廣泛應(yīng)用于中藥成分的分析中。蒲公英全草入藥，不同部位中各類(lèi)成分分布差異較大，同時(shí)在不同的提取條件下，所得成分及含量存在差異。在本研究中通過(guò)對(duì)濃度為50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲醇溶液、5%甲酸的甲醇溶液等提取溶劑對(duì)蒲公英全草進(jìn)行提取考察，發(fā)現(xiàn)在60%甲醇提取條件下，峰形及出峰情況整體較優(yōu)。因此，本實(shí)驗(yàn)選用60%甲醇對(duì)蒲公英全草進(jìn)行提取分析，通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜推測(cè)成分的分子式，通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)及標(biāo)準(zhǔn)品推測(cè)化合物結(jié)構(gòu)，最終從蒲公英中分析鑒定出了29個(gè)化學(xué)成分，其主要為有機(jī)酸類(lèi)和黃酮類(lèi)成分，是目前蒲公英發(fā)揮多種功效的主要研究的大類(lèi)物質(zhì)。本研究實(shí)現(xiàn)了對(duì)蒲公英化學(xué)成分的快速分析，為蒲公英的質(zhì)量控制、藥理作用等研究提供了參考。

蒲公英具有清熱解毒、消腫散結(jié)等功效，被認(rèn)為可以用來(lái)治療腫瘤。現(xiàn)代研究表明蒲公英具有良好的抗癌效果，能夠有效抑制肝癌、肺癌、宮頸癌、胰腺癌和乳腺癌等癌細(xì)胞的增殖，并且對(duì)正常細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性[15]。為進(jìn)一步探究蒲公英的抗癌作用機(jī)制，本研究對(duì)分析得到的29個(gè)化學(xué)成分進(jìn)行了抗癌網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)其中槲皮素、木犀草素、芹菜素、白楊素、咖啡酸、異鼠李素、沒(méi)食子酸、對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、3，5-二羥基苯甲酸可能為蒲公英抗癌成分，其中槲皮素、木犀草素、芹菜素的抗癌作用較強(qiáng)。后續(xù)可結(jié)合各物種在蒲公英中的含量及分布情況對(duì)蒲公英抗癌的開(kāi)發(fā)作進(jìn)一步研究。

已有多名學(xué)者對(duì)相關(guān)化合物的抗癌作用機(jī)制進(jìn)行研究。Song等[16]研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可通過(guò)使前列腺癌細(xì)胞PC-3細(xì)胞中的PI3K、Akt、mTOR信號(hào)通路失活而誘導(dǎo)自噬。Wu等[17]研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可通過(guò)ROS-NUPR1途徑介導(dǎo)誘導(dǎo)自噬來(lái)致使骨肉瘤細(xì)胞死亡。Li等[18]發(fā)現(xiàn)，槲皮素通過(guò)抑制PTHR1減少了人類(lèi)轉(zhuǎn)移性骨肉瘤細(xì)胞的侵襲，粘附，增殖和遷移。Hashemzaei等[19]對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系通過(guò)MMT分析，發(fā)現(xiàn)槲皮素能誘導(dǎo)所有測(cè)試的癌細(xì)胞系的凋亡。Seo等[20]研究發(fā)現(xiàn)，木犀草素能下調(diào)鈣激活的氯離子通道(ANO1)來(lái)起到抗癌作用。Chen等[21]研究發(fā)現(xiàn)木犀草素和槲皮素可能通過(guò)阻斷Akt、mTOR、c-Myc信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)抑制RPS19激活的EMT信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。Yang等[22]研究發(fā)現(xiàn)，芹菜素可通過(guò)抑制PI3K、Akt、mTOR途徑抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)自噬。

由靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，根據(jù)度值篩選出AKT1、EGFR、SRC、ESR1、PTGS2、MMP9、KDR、MMP2、PIK3R1共9個(gè)核心靶點(diǎn)。AKT1是AKT三個(gè)亞型之一，在多種生物效應(yīng)中發(fā)揮作用，包括細(xì)胞增殖，存活和代謝調(diào)節(jié)。AKT的失調(diào)，會(huì)引發(fā)癌癥、糖尿病、心血管和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[23]。EGFR是一種跨膜糖蛋白，會(huì)通過(guò)各種機(jī)制異常激活，例如受體過(guò)度表達(dá)，突變，配體依賴(lài)性受體二聚化，配體非依賴(lài)性激活，并且與多種人類(lèi)癌癥的發(fā)生有關(guān)[24]。MMP是一類(lèi)蛋白水解酶，可降解細(xì)胞外基質(zhì)的多種成分。大量的實(shí)驗(yàn)和臨床證據(jù)表明MMP參與了腫瘤的侵襲，新血管的生成和轉(zhuǎn)移，是癌癥治療的理想藥理學(xué)靶標(biāo)。

GO富集分析結(jié)果表明，蒲公英對(duì)氧化-還原過(guò)程、負(fù)調(diào)控凋亡過(guò)程、蛋白質(zhì)自磷酸化等生物過(guò)程，細(xì)胞質(zhì)膜、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、胞外外泌體、細(xì)胞外間隙等部位，ATP結(jié)合、蛋白激酶活性、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、酶結(jié)合等分子功能影響較大。癌癥細(xì)胞生長(zhǎng)中需要大量能量，癌癥細(xì)胞的代謝過(guò)程增強(qiáng)，氧化還原反應(yīng)變得旺盛，同時(shí)癌癥細(xì)胞會(huì)利用代謝過(guò)程產(chǎn)生的ATP，因此ATP結(jié)合也是癌癥的一個(gè)重要反應(yīng)過(guò)程。其他相關(guān)過(guò)程也都涉及癌癥過(guò)程中。KEGG通路分析結(jié)果表明，相關(guān)靶點(diǎn)涉及癌癥通路、癌癥蛋白聚糖、PI3K-Akt信號(hào)通路、局灶粘連、癌癥MicroRNAs、癌癥轉(zhuǎn)錄失調(diào)、膀胱癌等多條癌癥通路上。其中癌癥蛋白聚糖通路中癌細(xì)胞分泌的蛋白聚糖誘發(fā)癌癥轉(zhuǎn)移，通過(guò)抑制該通路，可降低癌癥的轉(zhuǎn)移[25]；PI3K-Akt 信號(hào)通路具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、蛋白質(zhì)合成的作用，在癌癥發(fā)病中 PI3K-Akt信號(hào)通路通過(guò)多方面抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖、腫瘤轉(zhuǎn)移及新生血管生成[26]。上述結(jié)果表明篩選出來(lái)的相關(guān)生物過(guò)程及通路與蒲公英抗癌機(jī)制息息相關(guān)。

前列腺癌病理類(lèi)型上包括腺癌、導(dǎo)管腺癌、尿路上皮癌、鱗狀細(xì)胞癌、腺鱗癌，其中前列腺腺癌占95%以上，在世界范圍內(nèi)，男性惡性腫瘤中前列腺癌的發(fā)病率排名第2位，死亡率排名第5位，如何對(duì)前列腺癌進(jìn)行研究是一項(xiàng)熱點(diǎn)話(huà)題。多位學(xué)者研究表明，蒲公英具有對(duì)前列腺癌具有良好的抑制作用[27]?，F(xiàn)代研究表明針對(duì)前列腺癌靶向治療中較為成熟且具有明顯研究?jī)r(jià)值的途徑之一是磷脂酰肌 3-羥激酶(PI3K)/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶(AKT)信號(hào)通路，該信號(hào)通路的異?；罨c疾病的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸有顯著相關(guān)性，在機(jī)體細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、凋亡以及炎癥反應(yīng)、血管生成以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中都起到了重要的參與調(diào)節(jié)作用[28]。在本研究中發(fā)現(xiàn)蒲公英中的多種功效物質(zhì)可作用于AKT及PI3K等相關(guān)作用靶點(diǎn)上，結(jié)果表明，蒲公英可用于開(kāi)發(fā)治療前列腺癌。上述網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果為模擬推測(cè)結(jié)果，存在不足，后續(xù)須進(jìn)一步通過(guò)想過(guò)藥理實(shí)驗(yàn)對(duì)該結(jié)果進(jìn)行推測(cè)，以為蒲公英進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供數(shù)據(jù)。

綜上所述，本研究通過(guò)HPLC-Q-TOF-MS對(duì)蒲公英化學(xué)成分進(jìn)行分析，共鑒定出29個(gè)化學(xué)成分，包括16個(gè)有機(jī)酸、10個(gè)黃酮類(lèi)成分、2個(gè)香豆素類(lèi)成分和1個(gè)萜類(lèi)成分。運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法研究蒲公英的抗癌作用機(jī)制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蒲公英中槲皮素、木犀草素、芹菜素等成分通過(guò)作用AKT1、EGFR、SRC、ESR1等核心靶點(diǎn)，參與氧化-還原過(guò)程、負(fù)調(diào)控凋亡過(guò)程、蛋白質(zhì)自磷酸化、ATP結(jié)合、蛋白激酶活性、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、酶結(jié)合等生物過(guò)程，繼而在癌癥中的通路、癌癥中的蛋白聚糖、PI3K-Akt信號(hào)通路等通路中的發(fā)揮抗癌作用。