劉 毅，王瑞敏，李 菲，蘆 玥，賈躍進

失眠障礙是以入睡困難、睡眠維持困難或早醒，并伴有疲勞、注意力不足或情緒不穩(wěn)定等日間功能障礙為特征的一種睡眠障礙[1]，人群中患病率為10%～20%[2]，是高血壓、癌癥、抑郁癥等疾病的危險因素[3-5]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對失眠障礙機制的研究取得一定進展，但仍缺乏公認的疾病模型[6]；盡管有多種治療藥物，并無理想藥物[7]。中醫(yī)學(xué)在《黃帝內(nèi)經(jīng)》時，已在“天人相應(yīng)”思維基礎(chǔ)上構(gòu)建了“營衛(wèi)”“陰陽”節(jié)律運轉(zhuǎn)為核心的睡眠模型，并提出了“營衛(wèi)失和、陰陽不交”[8]的失眠總病機，且中藥治療該病安全、有效。因此，挖掘名老中醫(yī)治療失眠障礙有利于傳承中醫(yī)思維，指導(dǎo)臨床應(yīng)用，研究開發(fā)新藥。

賈躍進是第6批全國老中醫(yī)藥專家工作室指導(dǎo)老師，從醫(yī)40余年，對中醫(yī)經(jīng)典有深入研究，臨床尤擅治療失眠障礙、抑郁癥、焦慮癥等多種精神科疾病，并結(jié)合“胃不和則臥不安”理論，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“腦腸軸”理論，失眠障礙的發(fā)病原因和規(guī)律及多年臨床經(jīng)驗，提出“從肝脾論治失眠”，取得較好的療效。本研究通過挖掘賈躍進的臨床用藥規(guī)律，反映其對“胃不和則臥不安”理論的理解與應(yīng)用，結(jié)合現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探討核心藥物，以期對臨床應(yīng)用和深入研究提供參考。

1 研究的理論基礎(chǔ)

1.1 開宗明義 “胃不和則臥不安”出自《素問·逆調(diào)論》，常見的理解認為其是失眠的一個重要病機，但原旨實非如此。欲明此句，賈躍進認為從“則”處斷為兩段，即“胃不和”與“臥不安”?！拔覆缓汀敝小拔浮睘橹嗅t(yī)藏象之胃，代表整個消化系統(tǒng)的功能?！鹅`樞·本輸》記載：“大腸、小腸皆屬于胃[9]”，即為此意；“和”是中國傳統(tǒng)文化中的一個重要概念，具有和順、調(diào)和之意，中醫(yī)學(xué)代表陰平陽秘的健康狀態(tài)，《丹溪心法》記載：“氣血沖和，萬病不生[10]”，此處“胃不和”即指人的胃腸等消化系統(tǒng)陰陽平衡被打破，處于一種功能受損的非健康狀態(tài)，“胃”而言多為胃失和降?！芭P不安”中的“臥”表示躺著的體位或睡覺的狀態(tài)?！端貑枴庋ㄕ摗酚涊d：“胸脅痛而不得息，不得臥[9]”，屬前者；《靈樞·口問》記載：“日暮在外之陽氣將盡而陰氣漸盛，則目暝而臥[9]”，屬后者。若結(jié)合《逆調(diào)論》原文前后句方知此處所指為陽明經(jīng)氣上逆而呼吸有聲不能平臥之證。

1.2 承前啟后 繼《內(nèi)經(jīng)》后，歷代醫(yī)家結(jié)合自身實踐經(jīng)驗，擴充并豐富了“胃不和則臥不安”的內(nèi)涵和臨床意義。賈躍進歸為兩類，即從“喘”及“不寐”論。

“喘”。《金匱要略》中“咳逆倚息，不得臥，小青龍湯主之”“支飲不得息，葶藶大棗瀉肺湯主之”等[11]；明代王肯堂引用《素問·逆調(diào)論》原文論喘，并以張仲景小青龍湯治療；清代張錫純曾論述：“胃氣宜息息下行，有時不下行而轉(zhuǎn)上逆，并迫肺氣亦上逆即可作喘?！?/p>

“不寐”。程鐘齡認為：“有胃不和則臥不安者，胃中脹悶疼痛，此食積也，保和湯主之?！贝藶轱嬍撤e滯之胃不和；《證治準(zhǔn)繩》記載：“仲景云‘小便不利，大便乍難乍易，時有微熱，怫郁不臥者，有燥屎也，承氣湯主之’，素問云：‘胃不和則臥不安’，此夜所以不得眠也[12]”，此為燥屎內(nèi)結(jié)之胃不和；丹波元堅在《雜病廣要》中言：“脈數(shù)實滑有力而不眠者，中有宿滯痰火，此為胃不和則臥不安也[13]”，此為痰火阻滯之胃不和；近代張聿青醫(yī)案中談及：“肝木升多，膽木降少，肝升太過矣……經(jīng)云：‘胃不和則臥不安’。古圣于不寐之病，不曰心腎，獨曰胃不和[14]”，此為肝氣犯胃之胃不和；《傷寒論》中亦記載：“太陽病，發(fā)汗后，大汗出，胃中干，煩躁不得眠[11]”，此為胃陰不足之胃不和。

1.3 博采眾長 賈躍進發(fā)掘前人余緒同時結(jié)合臨床實踐認為，“胃不和則臥不安”，其初衷非特指失眠，而后世發(fā)揮之下將該句理解為失眠的重要病機，如今廣為應(yīng)用，足見脾胃與失眠密切相關(guān)。營衛(wèi)生成及運行有賴脾胃，脾升胃降，樞機通利，氣血生化有源，營衛(wèi)循其常道，陰陽交泰而寐。胃不和則營衛(wèi)失和，樞機不利，陰陽不交而失眠?！拔覆缓蛣t臥不安”對失眠的論治有深刻的指導(dǎo)意義。

首先體現(xiàn)在對失眠病因的認識：飲食積滯、或濕邪阻滯、或胃熱熾盛、或肝氣犯胃，可阻礙氣機，造成氣機失常，濁氣上犯；抑或脾胃氣虛，胃失和降、或胃陰不足，虛火上灼；從而營衛(wèi)失和，陰陽不交則臥不安寐。其次對失眠病機的認識：若飲食不節(jié)，超出胃受納腐熟水谷的能力，胃勞受損，飲食積滯，胃失通降，濁邪上犯，阻滯氣機，氣機紊亂，陰陽失交，發(fā)為失眠，即狹義的胃不和引起失眠；若嗜食辛辣炙煿或肥甘厚味，胃腸積熱、釀生痰濕或痰熱，導(dǎo)致腑氣不通，清氣不升，氣機阻滯，以致樞機不利，陽不入陰而致失眠，此條對應(yīng)當(dāng)今生活嗜食高熱量飲食致失眠；若思慮或勞累過度，皆傷及脾胃，脾胃氣虛或胃陽不足，失于健運或水飲內(nèi)停，從而導(dǎo)致氣機不暢，營衛(wèi)失和而失眠；若素有陰虛或積熱內(nèi)蘊、耗傷胃陰，從而虛火內(nèi)擾，氣機運行失常，營衛(wèi)循行節(jié)律紊亂不寐；臨床中肝脾失調(diào)常相互影響，交織為病，肝主疏泄，與脾胃共同參與調(diào)控氣、血，肝脾(胃)不和，氣血運行失常，影響營衛(wèi)循行即發(fā)為失眠。

關(guān)于方藥的使用?！鹅`樞·邪客篇》記載：“飲以半夏湯一劑，陰陽已通，其臥立至[9]”。其方僅有半夏、秫米，其中半夏逐痰飲而和胃，秫米秉燥金之氣而成，二者相配，祛痰消痞，和胃降逆，正對“胃不和則臥不安”之證，雖非直接寧心安神以治失眠，可奏安眠之效，臨床應(yīng)用賈躍進常崇鞠通之說易秫米為健脾利濕之薏苡仁，亦獲良效；針對上述病機，教材皆有提示，如食積以保和丸、痰熱以黃連溫膽湯等。

賈躍進著重強調(diào)臨床常見的胃不和臥不安兼具肝郁的類型：因現(xiàn)代人應(yīng)對復(fù)雜的人際關(guān)系與精神壓力，常存在情志不遂，情志不舒，則易肝氣郁滯，且現(xiàn)代人飲食多存在飲食不節(jié)、嗜食辛辣肥甘的特點，長此則脾胃易傷，加之肝脾胃皆為全身之樞機，生理上常相互影響，故常并發(fā)病。相關(guān)研究表明，肝郁癥狀、脾胃病癥狀與失眠癥狀呈正相關(guān)[15]；現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為，腦腸軸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)及腸神經(jīng)系統(tǒng)之間的雙向通信系統(tǒng)，有研究顯示腸道微生物組通過此軸影響睡眠質(zhì)量[16]，因此，從肝脾論治失眠符合中醫(yī)理論及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的相關(guān)研究。賈躍進臨床根據(jù)肝脾不和類型的偏性將其辨證為脾虛為甚的肝郁脾虛，痰熱為甚的肝郁痰熱，脾虛較輕，可見熱象的肝郁化熱、肝脾胃樞機運行不利的樞機不利等證型，與之對應(yīng)常投以香砂六君子、柴芩溫膽湯、丹梔逍遙散、柴胡加龍骨牡蠣湯加減，其中注意的是香砂六君子中的木香，賈躍進常以香附替代，加強疏肝理氣之功，取治病求本之意；柴胡加龍骨牡蠣湯中為防龍牡恐礙胃氣，常大量用“秉受春生之氣”麥芽以達到疏肝健脾之效；同時注重腑氣通暢，方中常佐枳實、炒萊菔子。

2 資料與方法

2.1 數(shù)據(jù)挖掘分析

2.1.1 數(shù)據(jù)收集 收集2018年9月1日—2020年9月1日賈躍進在山西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院門診診斷為失眠障礙且臨床資料完善的病案。

2.1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)《中國精神障礙分類及診斷標(biāo)準(zhǔn)》(CCMD-3)[17]明確診斷并單純使用中藥顆粒劑治療的安全、有效的病案。排除標(biāo)準(zhǔn)：診斷、效果或安全性不明的病案；合并其他影響判斷的軀體及精神?。桓深A(yù)方式為非單純中藥或使用中藥其他劑型。

2.1.3 數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化、錄入與挖掘 通過納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進行篩選，以雙人錄入法將數(shù)據(jù)錄入至古今醫(yī)案云平臺V 2.2.3提供的模板中，確保正確后使用數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化模塊并結(jié)合2015版中國藥典[18]與第7版中藥學(xué)教材[19]對中藥名稱進行規(guī)范。獲得標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)庫后，使用數(shù)據(jù)挖掘模塊分別對其進行藥物頻次、性味歸經(jīng)統(tǒng)計及關(guān)聯(lián)分析、聚類分析和復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析，并綜合獲得核心組方。

2.2 核心組方網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

2.2.1 核心組方中藥物有效成分及其對應(yīng)靶點篩選 利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(http://tcmspw.com/tcmsp.php)，分別檢索核心組方中各藥物成分，并限定口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%，血腦屏障(blood brain barrier，BBB)≥-0.3，類藥性(drug likeness，DL)≥0.18，篩選獲取其有效成分，并匹配各成分靶點，對無靶點記錄的有效成分利用SwissTargetPrediction平臺(http://www.swisstargetprediction.ch/)預(yù)測靶點，最終將靶點在UniProt數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)中匹配基因名。

2.2.2 疾病靶點獲取 在GEO(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)、GeneCards(https://www.genecards.org/)、OMIM(https://omim.org/#)、TTD(http://db.idrblab.net/ttd/)數(shù)據(jù)庫中分別檢索“insomnia disorder”，得到失眠障礙相關(guān)靶點，并將數(shù)據(jù)庫得到的失眠障礙相關(guān)靶點合并、去重，再利用UniProt數(shù)據(jù)庫篩選。

2.2.3 藥物-疾病交集靶點獲得 將獲得的中藥各有效成分相關(guān)靶點與疾病相關(guān)靶點利用微生信(http://www.bioinformatics.com.cn/)平臺取交集，獲得核心藥物組合有效成分中直接與疾病相關(guān)的靶點。

2.2.4 疾病-藥物-成分-靶點及蛋白-蛋白互作(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 以疾病、核心組方、各藥物、有效成分和相關(guān)靶點為節(jié)點，相互關(guān)系為邊，在Cytoscape 3.8.0中構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)，并利用插件對獲得的藥物-疾病交集靶點進行PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建、拓撲分析和聚類分析。

2.2.5 基因本體(GO)富集分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析 將藥物-疾病交集靶點導(dǎo)入BiNGO、ClueGO插件分別進行GO和KEGG通路富集分析，之后將其進行可視化分析。

2.3 關(guān)鍵有效成分與關(guān)鍵靶點分子對接分析 選取2.2.4兩個網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點度較大的關(guān)鍵成分及關(guān)鍵靶點分別在Zinc(https://zinc.docking.org/)、PDB(http://www.rcsb.org/)數(shù)據(jù)庫中獲取3D結(jié)構(gòu)，并使用Vina分子對接，將其中對接較好的組合使用PyMol可視化。

3 結(jié) 果

3.1 數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果

3.1.1 藥物頻次及屬性統(tǒng)計 共收集病案442例，根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，獲得驗案228例，包括方劑228首，涉及中藥119味，其中藥物應(yīng)用百分比>25%的有18味，詳見表1。將228首方劑中119味藥物進行性、味、歸經(jīng)分析，以雷達圖表示，詳見圖1。其中，中藥藥性主要為平、溫、寒、微寒；藥味主要為甘、辛、苦；藥物歸經(jīng)主要為脾、肺、胃、肝。

圖1 四氣、五味、歸經(jīng)頻次分布雷達圖(A為四氣頻次分布；B為五味頻次分布；C為歸經(jīng)頻次分布)

表1 藥物使用頻次分布(應(yīng)用百分比≥25%)

3.1.2 藥物關(guān)聯(lián)分析、聚類分析、復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析及核心組方確定 將228首處方利用云平臺數(shù)據(jù)分析，首先設(shè)置置信度≥0.70，支持度≥0.55，得到19組藥物關(guān)聯(lián)分析結(jié)果，詳見表2。將3.1.1中應(yīng)用百分比≥25%的18味中藥進行聚類分析，同時設(shè)置距離類型為歐氏距離，聚類方法為最長距離法，將其分類。C1：川楝子、枳實、萊菔子；C2：柴胡、黃芩、龍骨、薏苡仁、石菖蒲；C3：麥芽、合歡皮、遠志；C4：香附、白術(shù)、黨參、砂仁、陳皮、半夏、茯苓4個聚類處方，詳見圖2；設(shè)置節(jié)點度≤150，進行中藥-中藥復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析，得到由6味中藥組成的核心組合，詳見圖3。綜合以上并結(jié)合藥物頻次得到核心組方為茯苓、黨參、半夏、白術(shù)、陳皮、香附。

表2 藥物關(guān)聯(lián)分析(支持度≥0.55，置信度≥0.70)

圖2 藥物聚類分析

圖3 藥物復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析

3.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果

3.2.1 核心組方有效成分和對應(yīng)靶點 通過檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫，結(jié)合SwissTargetPrediction預(yù)測靶點，篩選出核心組方各藥物有效成分及相關(guān)靶點。經(jīng)過去重、排除后，總獲得有效成分45種，重復(fù)成分3種，相關(guān)靶點243個。詳見表3。

表3 核心藥物組成部分成分相關(guān)信息

3.2.2 疾病靶點獲取結(jié)果 將GEO數(shù)據(jù)庫得到的數(shù)據(jù)集中的22個睡眠正常的基因表達樣本與22個睡眠剝奪的基因表達樣本應(yīng)用R語言進行差異分析，共得到100個差異基因靶點，結(jié)果以聚類熱圖及火山圖表示，詳見圖4。將GeneCards數(shù)據(jù)庫中得到的2 037個失眠障礙相關(guān)基因按照相關(guān)度大于中位數(shù)進行篩選，獲得1 021個疾病靶點； OMIM和TTD分別得到235個、28個靶點。將以上所得靶點處理后，共獲得失眠障礙疾病靶點1 181個。

圖4 失眠障礙差異基因分析結(jié)果

3.2.3 藥物-疾病靶點交集結(jié)果 利用微生信平臺將獲得的藥物靶點與疾病靶點取交集，共獲得72個藥物與疾病直接相關(guān)的交集靶點，詳見圖5。

圖5 藥物-疾病交集基因Venn圖

3.2.4 疾病-藥物-成分-靶點網(wǎng)絡(luò)和PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建結(jié)果 將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape軟件，構(gòu)建疾病-核心組方-成分-交集靶點網(wǎng)絡(luò)，詳見圖6。從該網(wǎng)絡(luò)篩選出節(jié)點度較大(Degree>18)的12個關(guān)鍵有效成分：栓菌酸、去氫齒孔酸、豆甾醇、蒲公英賽醇、1，4-環(huán)氧樹脂-16-羥基苯甲酸-1，3，12，14。在BisoGenet中導(dǎo)入72個交集靶點構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，通過CytoNCA插件分析網(wǎng)絡(luò)并限定度值(DC)、介度中心性(BC)、接近中心性(CC)、網(wǎng)絡(luò)中心性(NC)、局部性連接(LAC)，得到PPI核心網(wǎng)絡(luò)，詳見圖7。在此基礎(chǔ)上使用MCODE插件對核心網(wǎng)絡(luò)進行聚類，得到7個聚類網(wǎng)絡(luò)，選擇其中每個聚類網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點度較大的10個靶點作為關(guān)鍵靶點，包括RAC-α絲氨酸/蘇氨酸-蛋白激酶(Akt1)、鈉依賴性5-羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白(SLC6A4)、環(huán)狀磷酸腺苷響應(yīng)性元素結(jié)合蛋白(CREB1)、β2腎上腺素能受體(ADRB2)、高親和力神經(jīng)生長因子受體(NTRK1)、腫瘤壞死因子(TNF)、雌激素受體1(ESR1)、雄激素受體(AR)、一氧化氮合酶2(NOS2)、低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF1A)。

圖6 疾病-核心組方-成分-交集靶點網(wǎng)絡(luò)

圖7 PPI網(wǎng)絡(luò)篩選圖

3.2.5 GO富集分析和KEGG富集分析結(jié)果 將獲得的藥物-疾病交集靶點導(dǎo)入BiNGO，并設(shè)置信水平為0.01，進行GO富集分析，詳見圖8。GO生物過程主要包括生物調(diào)節(jié)、信號通路、對刺激的反應(yīng)、免疫過程、代謝過程、細胞過程等；GO分子功能包括結(jié)合、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性、催化活性等；GO細胞成分包括突觸、胞外區(qū)等。將交集靶點導(dǎo)入ClueGO，設(shè)定P≤0.05，最小聚類為4，K-score為0.4，進行KEGG通路富集分析，詳見圖9，主要包括神經(jīng)活性配體-受體相互作用、血清素能突觸、多巴胺能突觸、酪氨酸代謝、催乳素信號通路、鈣信號通路、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)信號通路、環(huán)磷酸鳥苷-蛋白激酶G(cGMP-PKG)信號通路等。

圖8 GO功能富集分析

圖9 KEGG關(guān)鍵通路富集分析

3.3 分子對接結(jié)果 關(guān)鍵靶點和關(guān)鍵成分分子對接結(jié)果≤-20.9 kJ/mol，提示關(guān)鍵成分均與關(guān)鍵靶點多可能形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，詳見表4。取對接最好的前5個關(guān)鍵成分與關(guān)鍵靶點組合可視化，詳見圖10。

表4 分子對接結(jié)果 單位：kJ/mol

圖10 分子對接構(gòu)象圖 (A為AKT1與BZ1；B為SLC6A4與DS8；C為NOS2與DS5；D為NTRK1與C；E為ESR1與FL6)

4 討 論

數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果可知，治療藥物中使用頻率較高的為茯苓、黨參、半夏、白術(shù)、陳皮、香附?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究認為，上述藥物多具有神經(jīng)保護、鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁焦慮等作用，其中一些藥物兼具保肝及治療消化系統(tǒng)疾病的作用[20-25]。根據(jù)藥性、藥味、歸經(jīng)分布規(guī)律分析結(jié)果可知，賈躍進治療失眠障礙用藥較平和，結(jié)合頻率可見用藥略偏溫，因肝脾不和證常存在脾土虧虛，賈躍進崇東垣之法而善用甘溫，甘味藥可補益氣血，顧護脾胃，調(diào)和諸藥，肝郁表現(xiàn)為全身氣機失常，“氣有余便是火，氣不足便是寒”故寒熱均見，辛、苦味藥，辛開苦降，燮理樞機，令氣機自和；脾升胃降、肝升肺降，皆為周身氣機運行的樞機，可見賈躍進調(diào)氣為先、重視脾胃、整體論治的思路。 藥物關(guān)聯(lián)分析中篩選出的19對核心關(guān)聯(lián)組合均是香附、白術(shù)、黨參、茯苓、半夏、陳皮6味藥物的關(guān)聯(lián)，其中香附為“氣中之血藥”，行氣解郁同時兼顧血分；黨參補中益氣、健脾益肺，賈躍進常以之代人參；陳皮、半夏、茯苓為二陳湯、溫膽湯、保和丸成分，可健脾行氣、燥濕化痰；茯苓、白術(shù)是常用的治療脾胃氣虛藥對，四君子湯、逍遙散、參苓白術(shù)散、香砂六君子湯等類方均含此藥對，可見賈躍進對脾胃的重視?？傊?，賈躍進治療失眠障礙以健脾疏肝為主線，兼顧治療痰、濕等脾胃相關(guān)病理產(chǎn)物。

聚類分析中的四類聚類處方中，C2、C4屬賈躍進臨床“方證對應(yīng)”常用的，從肝脾治療失眠障礙的方劑：C2為和解樞機的柴胡加龍骨牡蠣湯及疏肝行氣、清化痰熱的柴芩溫膽湯；C4為益氣健脾、行氣疏肝的香砂六君子湯；C1中枳實、萊菔子為賈躍進常用的通腑降氣藥對；C3中合歡皮、遠志為賈躍進常用的安眠藥對，麥芽是方中常用的顧護脾胃的佐使藥。復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)分析獲得的核心藥組是關(guān)聯(lián)分析中的6味藥物。從數(shù)據(jù)挖掘可知賈躍進治療失眠障礙的核心組方為茯苓、黨參、半夏、白術(shù)、陳皮、香附6味，此6味中藥涵蓋賈躍進從肝脾論治失眠障礙的兩個方面，即脾虛及肝郁。

根據(jù)藥物網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，得到核心組方發(fā)揮作用的12個主要有效成分，其中FL4、FL6為茯苓中的三萜類化合物，有研究顯示此類物質(zhì)可發(fā)揮鎮(zhèn)靜作用[26]；C被證實可通過調(diào)節(jié)細胞分類周期42鳥甘酸結(jié)合蛋白-肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合體(Cdc42-Arp2)和絲裂原活化蛋白激酶1/2-環(huán)狀磷酸腺苷響應(yīng)性元素結(jié)合蛋白(Erk1/2-Creb)信號傳導(dǎo)改善記憶障礙，促進神經(jīng)和突觸形成[27]。動物實驗證實，可上調(diào)谷胱甘肽、γ-氨基丁酸(GABA)水平，下調(diào)多巴胺(DA)、丙二醛、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、乙酰膽堿酯酶(AChE)水平從而調(diào)節(jié)精神癥狀，改善腦功能[28]；DS8被認為存在AChE抑制作用[29]，而AChE抑制劑可改善睡眠狀況[30]；XF1屬香附中的揮發(fā)油類，動物實驗得到該類物質(zhì)可能通過調(diào)節(jié)膽堿能系統(tǒng)及5-羥色胺(5-HT)水平發(fā)揮抗焦慮作用[31]；以BZ1為主要成分的混合物，證實有治療抑郁的潛力[32]；A成分通過抑制TNF-α炎癥反應(yīng)發(fā)揮神經(jīng)保護作用[33]，實驗證實其可增加小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的去甲腎上腺素(NE)、5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)，從而表現(xiàn)出抗抑郁活性[34]；DS5是黨參中的異黃酮，在婦女圍絕經(jīng)期失眠障礙治療中可發(fā)揮作用[35]；動物實驗證實BX4在小鼠CNS中具有抗焦慮和鎮(zhèn)靜作用[36]；CP3在嚙齒類動物的研究中發(fā)現(xiàn)可改變其晝夜節(jié)律[37]；XF5是已知的鎮(zhèn)定鎮(zhèn)痛助眠藥物；BX3通過增強突觸可塑性，減少氧化損傷和限制神經(jīng)炎癥，改善d-半乳糖誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)和記憶障礙[38]。

根據(jù)PPI網(wǎng)絡(luò)得到的核心靶點中：Akt1編碼的Akt1激酶在神經(jīng)元細胞之間通訊、神經(jīng)元存活和記憶形成中發(fā)揮作用[39]；CREB1編碼磷酸化依賴性轉(zhuǎn)錄因子，參與晝夜節(jié)律同步等多種細胞過程，且與快速動眼(REM)睡眠在抑郁癥中的作用有關(guān)[40-41]；ADRB2編碼β腎上腺素能受體，該基因在清醒及睡眠剝奪時表達上調(diào)[42]；SLC6A4編碼調(diào)控5-HT膜蛋白，而5-HT是已知的促覺醒和抑制REM睡眠的神經(jīng)遞質(zhì)[43]；NTRK1編碼神經(jīng)營養(yǎng)性酪氨酸激酶受體，可與神經(jīng)營養(yǎng)因子結(jié)合[44]，有研究表明其與抑郁、焦慮、睡眠障礙等癥狀存在相關(guān)性[45]；動物實驗證實，TNF增強或抑制可分別促進和抑制睡眠，且在相關(guān)研究[46]得到相似結(jié)論；ESR1、AR分別編碼雌激素、雄激素受體，而性激素對睡眠過程產(chǎn)生重要影響，雌激素和黃體酮調(diào)控女性一生荷爾蒙周期相關(guān)的睡眠方式變化，雄激素可影響晝夜節(jié)律時相[47-48]；一氧化氮合酶2(NOS2)編碼一氧化氮合酶，有研究顯示，一氧化氮(NO)參與調(diào)節(jié)REM睡眠[49]；HIF1A編碼低氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)α亞基，HIF-1可充當(dāng)缺氧適應(yīng)性反應(yīng)的主要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，認為與睡眠障礙中的阻塞性睡眠呼吸暫停引起的缺氧有關(guān)[50]。

關(guān)于失眠障礙的病理機制尚不明確，但公認的機制為神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)節(jié)障礙(GABA、5-HT、DA、NE等)、信號傳導(dǎo)障礙(下丘腦-垂體-腎上腺軸)、代謝障礙(能量、脂質(zhì)、氨基酸及腸道微環(huán)境等)、內(nèi)分泌失調(diào)(生長激素、食欲素、性激素等)、免疫功能異常(炎癥)、遺傳(基因)及心理因素刺激等引起睡眠-喚醒節(jié)律紊亂[51-53]，由GO功能富集分析得到主要生物結(jié)果對上述機制幾乎均涉及，可見核心組方參與多種機制，從多途徑對失眠障礙發(fā)揮治療作用。KEGG通路富集分析主要包括神經(jīng)活性配體-受體相互作用、血清素能突觸、多巴胺能突觸(已在病理機制中概括)；酪氨酸參與合成DA、NE等神經(jīng)遞質(zhì)，并可增加催乳素釋放，催乳素被認為是睡眠的誘導(dǎo)因子之一[54-55]；鈣是神經(jīng)元中重要的第二信使，動物研究發(fā)現(xiàn)其可參與膽堿能神經(jīng)元對睡眠-覺醒的調(diào)節(jié)[55]；cAMP、cGMP等核苷酸代謝產(chǎn)物腺苷被認為是睡眠的平衡調(diào)節(jié)劑[56]。

分子對接結(jié)果顯示，關(guān)鍵有效成分和關(guān)鍵靶點多數(shù)可結(jié)合為穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，其中與各關(guān)鍵成分對接較好的靶點為Akt1、NTRK1、SLC6A4和NOS2，而α-香樹脂醇(BZ1)、豆甾醇(C)、蒲公英賽醇(DS8)和二氫齒孔酸(FL6)是與關(guān)鍵靶點對接較好的成分，提示核心組方可能由這4種成分作用于上述的靶點，即通過Akt1激酶、神經(jīng)營養(yǎng)因子、血清素能突觸等方面發(fā)揮治療失眠障礙的作用。

通過對“胃不和則臥不安”討論并結(jié)合數(shù)據(jù)挖掘方法，得到賈躍進從肝脾論治失眠障礙的核心組方為茯苓、黨參、半夏、白術(shù)、陳皮、香附，并初步預(yù)測其多成分、多靶點、多通路作用機制涉及的關(guān)鍵成分為α-香樹脂醇、豆甾醇、蒲公英賽醇和二氫齒孔酸；關(guān)鍵靶點為Akt1、NTRK1、SLC6A4和NOS2；關(guān)鍵通路為神經(jīng)活性配體-受體相互作用、血清素能突觸，該結(jié)論可為臨床應(yīng)用和進一步研究提供參考。