朱麗娟 王愛華 段曉艷 李 淵

在我國，上皮性卵巢癌發(fā)病率非常高，是女性生殖系統(tǒng)腫瘤最常見的卵巢癌類型，其死亡率最高，5年生存率非常低，不足20%[1]。在患病早期，由于其缺乏高特異性的腫瘤標(biāo)志物和早期診斷的特異性臨床癥狀，故難以發(fā)現(xiàn)或診斷。目前，對于該病的發(fā)病機制各種理論并不統(tǒng)一，但都認(rèn)為可以從分子或基因水平研究細胞周期的相關(guān)調(diào)控機制對惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程的作用。X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白(X-linked apoptotic suppressor proteins,XIAP)對內(nèi)源性天冬氨酸蛋白酶具有較強的抑制性，并具有明顯的特征性。文獻[2]提示XIAP可在乳腺癌、甲狀腺癌、肺癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程發(fā)揮作用，并與化療耐藥具有密切關(guān)系。相關(guān)的研究指出[3]在缺氧的微環(huán)境下，惡性腫瘤是通過乏氧誘導(dǎo)因子-1(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1)來改善腫瘤內(nèi)細胞代謝的，同時還能夠促進腫瘤內(nèi)部新的血管的生成，進而對腫瘤的生長具有加速作用，其中HIF-1a是HIF-1最重要的亞型單位之一。本研究探討了上皮性卵巢癌組織中XIAP、HIF-1a表達及臨床意義，旨在為卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展機制提供新的思路，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院在2017年1月至2020年2月期間保存的上皮性卵巢癌標(biāo)本92例作為研究對象，均經(jīng)病理學(xué)確診且術(shù)前未接受過放療、化療等抗腫瘤的治療，所有臨床病理資料保存完整。排除合并有其他系統(tǒng)惡性腫瘤、合并有免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病、急慢性感染者等等。同時選取良性卵巢腫瘤60例(34例黏液性囊腺瘤、26例漿液性囊腺瘤)，正常卵巢44例(因?qū)m頸癌或內(nèi)膜癌手術(shù)切除的，經(jīng)病理證實為正常卵巢組織)作為對照，各組在一般資料上進行比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

表1 各組一般資料比較(例，%)

1.2 實驗方法

本次研究采用免疫組化染色法對XIAP、HIF-1a表達進行檢測，具體操作：將上皮性卵巢癌標(biāo)本組織用甲醛固定后，采用石蠟包埋，并行常規(guī)連續(xù)切片后烤片，然后采用二甲苯及梯度乙醇脫蠟至水化并3次PBS沖洗；EDTA修復(fù)抗原；3%過氧化氫孵育10 min封閉過氧化物酶， 3次PBS沖洗；滴加山羊血清溫育30 min，分別滴加XIAP、HIF-1a二抗，室溫2 h孵育；PBS沖洗后滴加生物素標(biāo)記的二抗，溫育30 min，PBS沖洗，DAB溶液顯色；蘇木精復(fù)染；封片觀察[4]。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

XIAP在細胞膜、細胞質(zhì)及細胞核均有表達，表現(xiàn)為淡藍色背景下棕褐色染色團塊或顆粒；HIF-1a主要在細胞膜及細胞質(zhì)中表達，表現(xiàn)為淡藍色背景下棕褐色染色顆?；驁F塊。染色結(jié)果評價采用半定量評分，染色范圍為：0分為陽性細胞比例≤5%，1分為陽性細胞比例范圍>5%～25%，2分為陽性細胞比例范圍>25%～50%，3分為陽性細胞比例范圍>50%～75%，4分為陽性細胞比例范圍>75%；染色強度為：0分無著色，1分黃色，2分棕黃色，3分棕褐色。陽性表達為染色范圍和染色強度得分之積≥4分[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本次研究涉及的數(shù)據(jù)采用SPSS22.0軟件包進行統(tǒng)計分析，其中計數(shù)資料行χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，當(dāng)P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組織XIAP、HIF-1a表達比較

上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a陽性表達率分別為81.52%和68.48%，明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢(P<0.05)；良性卵巢腫瘤和正常卵巢XIAP、HIF-1a陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組織XIAP、HIF-1a表達比較(例，%)

2.2 XIAP、HIF-1a表達與上皮性卵巢癌臨床病理關(guān)系

FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者XIAP、HIF-1a陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)。見表3。

表3 XIAP、HIF-1a表達與上皮性卵巢癌臨床病理關(guān)系(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

上皮性卵巢癌組織XIAP與HIF-1a表達呈正相關(guān)(γs=0.340，P<0.05)，見表4。

表4 相關(guān)性分析

3 討論

上皮性卵巢癌是卵巢腫瘤最常見的病理類型，但是在臨床上，早期該病無明顯的臨床表征，很難及時確診，以至有超過80%的患者在被確診時，就已經(jīng)有腹腔內(nèi)種植、淋巴轉(zhuǎn)移或處于中晚期階段了，這也是該病高死亡率的最主要原因[6]。有臨床研究人員發(fā)現(xiàn)[7]上皮性卵巢癌可根據(jù)患者的分級或分期不同，給予不同的手術(shù)方案，由此可見，提高上皮性卵巢癌早期診斷和評估疾病進展準(zhǔn)確率對提高治療效果具有非常重要的指導(dǎo)意義。

目前，針對上皮性卵巢癌的診斷臨床上主要有影像學(xué)檢查(B超等)聯(lián)合血清標(biāo)志物(CA125等)，但其結(jié)果不明顯，特異性較低，無法準(zhǔn)確地確定腫瘤的分期。XIAP在惡性腫瘤組織的成人與胎兒的所有組織中均有高表達，與腫瘤的進展、化療耐藥及預(yù)后不佳均相關(guān)[8]；HIF-1a能夠?qū)毎蛲?、血管新生及糖酵解進行調(diào)控[9]。各組織XIAP、HIF-1a表達比較結(jié)果形式上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a陽性表達率分別為81.52%和68.48%，明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢；良性卵巢腫瘤和正常卵巢XIAP、HIF-1a陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。上述結(jié)果證實上皮性卵巢癌XIAP、HIF-1a存在較高的陽性表達率，XIAP、HIF-1a具有成為診斷上皮性卵巢癌重要指標(biāo)的潛力。

本研究結(jié)果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者XIAP陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，該結(jié)果提示XIAP參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生與發(fā)展過程，XIAP的表達與惡性腫瘤的惡性程度有關(guān)。XIAP是IAP家族的重要成員之一，它被認(rèn)為是家族中功能最強和最具有特征性的Caspase抑制因子，可與凋亡效應(yīng)因子caspase-3，caspase-7及啟動因子caspase-9結(jié)合的凋亡抑制蛋白，進而參與上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程[10-11]。

本研究結(jié)果顯示FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期患者HIF-1a陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，該結(jié)果也提示HIF-1a的表達與惡性腫瘤的惡性程度有關(guān)，其參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程。HIF-1a是人體參與細胞內(nèi)氧代謝的重要調(diào)節(jié)因子，有氧環(huán)境下HIF-1可經(jīng)羥基化后結(jié)合泛肽連接酶，進而通過自身泛肽化從而降解；在缺氧環(huán)境下HIF-1是無法被羥基化，所以體內(nèi)HIF-1濃度會升高。有研究結(jié)果表明當(dāng)HIF-1含量升高時，其可能參與了惡性腫瘤相適應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄，從而形成新生血管和維持腫瘤細胞的能量代謝[12]。有文獻也指出[13]當(dāng)缺氧時，抑制了HIF-1的表達可作為腫瘤治療的新方法。在腫瘤迅速增長的過程中，患者會出現(xiàn)因惡性腫瘤細胞快速增殖進而誘發(fā)細胞內(nèi)部缺氧的現(xiàn)象，在多種腫瘤患者中均發(fā)現(xiàn)HIF-1的高表達，因此可以推測HIF-1參與了腫瘤的浸潤、生長和轉(zhuǎn)移等病理生理過程。

相關(guān)性分析上皮性卵巢癌組織XIAP與HIF-1a的表達呈正相關(guān)，主要是因為HIF-1a能夠并對細胞凋亡、血管新生及糖酵解有良好的調(diào)控作用；在正常條件下，HIF-1a能夠與基因產(chǎn)物pYHL結(jié)合并被降解，其半衰期僅為數(shù)分鐘，但在pVHL和缺氧環(huán)境下HIF-1a會快速上升[14-16];而XIAP是細胞凋亡的調(diào)節(jié)器，通過BIR1結(jié)構(gòu)域的linker區(qū)調(diào)節(jié)Caspase相關(guān)因子，進而通過多種信號途徑參與抑制內(nèi)源性或外源性凋亡誘導(dǎo)信號引起的細胞凋亡，因此XIAP與HIF-1a均通過調(diào)節(jié)惡性腫瘤細胞的凋亡來影響上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。

總之，在上皮性卵巢癌患者的組織中XIAP、HIF-1a表達上調(diào)，與FIGO分期有關(guān)，兩者間表達存在正相關(guān)關(guān)系。