宋 瑋 李 英 宋瓊珠

肺癌的發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤種類中居世界首位，非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)占80% 左右，嚴(yán)重影響人類的生命健康[1-2]。對(duì)于早期患者，通常使用手術(shù)治療，至于晚期患者，全身化療成了重要的治療方法[3-4]。目前鉑類藥物在內(nèi)的細(xì)胞毒藥物是晚期NSCLC的標(biāo)準(zhǔn)一線化療藥物，其腎毒性、胃腸道毒性和神經(jīng)毒性等差異均較大[5]。有研究結(jié)果表示，遺傳因素與個(gè)體差異性相關(guān)，如單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)[6]。研究表明核苷酸切除修復(fù)酶(xeroderma pigmentosum group F，XPF) 功能缺陷罹患皮膚癌的風(fēng)險(xiǎn)增加，說(shuō)明其與腫瘤之間關(guān)系密切[7]，XPF已被證明與胃癌、胰腺癌等風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)[8]，然而XPF與肺癌發(fā)生之間的相關(guān)性研究較少，仍需要進(jìn)一步探索。本研究對(duì)XPF的多態(tài)性位點(diǎn)(rs28360317、rs2836007、rs1805377) 與NSCLC鉑類聯(lián)合化療效果及毒性反應(yīng)的相關(guān)性進(jìn)行分析，為了NSCLC的未來(lái)關(guān)于臨床預(yù)測(cè)的研究提供了一定的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 對(duì)象

選擇2016年5月至2018年5月于本院確診并治療的晚期NSCLC患者100例，男性58例、女性42例，年齡28～79歲，平均(59.21±8.76)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～80歲；②可測(cè)量的腫瘤病灶，組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診為ⅢA～Ⅳ期NSCLC；③身體體力狀態(tài)評(píng)分≤2分 ；④患者化療前血常規(guī)、心電圖檢查、肝腎功能正常且接受鉑類化療；排除標(biāo)準(zhǔn)：①已接受手術(shù)治療或同步放療方案患者；②合并嚴(yán)重心、肝、肺、腎等臟器及骨髓功能異常的肺癌患者；③合并心、肝、脾、腎等嚴(yán)重疾病。其中納入研究對(duì)象100例，腺癌65例、鱗癌20例、腺鱗癌4例、其他11例 ；ⅢA期11例、ⅢB期34例、Ⅳ期55例；PS評(píng)分0～1 分78例、2分22例；吸煙者56例、不吸煙者44例。

1.2 化療方案

患者均經(jīng)靜脈滴注，卡鉑(CBP)或順鉑(DDP)作為基礎(chǔ)，聯(lián)合紫杉醇(paclitaxel，TAX)、長(zhǎng)春瑞濱(navelbine，NVB)、多西紫杉醇(docetaxel，DOC)、吉西他濱(gemcitabine，GEM)的兩藥聯(lián)用一線化療方案。給藥方案如下，①NP/NC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+NVB 25 mg·m-2，d1、d8，共48例 ；②GP/GC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+GEM 1200 mg·m-2，d1、d8，共17例；③TP/TC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+TAX 175 mg·m-2，d1，共28例；④DP/DC：給予DDP 75 mg·m-2，d1+DOC 75 mg·m-2，d1，共7例。

1.3 收集樣本以及臨床資料

患者于化療前抽取2 ml靜脈血 ，采用QIAamp DNA試劑盒提取DNA。記錄患者性別、年齡、腫瘤病理組織分型、PS評(píng)分、化療方案、療效、臨床分期和不良反應(yīng)等臨床資料。

1.4 基因分型

根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)獲取3個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)的序列，運(yùn)用Taqman SNP Genotyping Assays檢測(cè)XPF基因多態(tài)性位點(diǎn)(rs28360317、rs1805377、rs2836007)。設(shè)計(jì)熒光素藍(lán)色和綠色熒光標(biāo)記探針，AppliedBiosystems Step One Software v2.1進(jìn)行基因分型，并重復(fù)3次(試劑均購(gòu)自ABI公司)。隨機(jī)抽取10%樣品，經(jīng)分子量陣列技術(shù)鑒定不同基因型的DNA樣本，如果一致性100%，則說(shuō)明其準(zhǔn)確性和可靠性。

1.5 患者的化療療效和不良反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)

化療2個(gè)周期后，經(jīng)CT復(fù)查，由實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)療效，分完全緩解(complete response，CR)、部分緩解(partial response，PR)、疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)和疾病進(jìn)展(progressive disease，PD)，其中CR+PR為客觀有效，CR+PR+SD為疾病控制。不良反應(yīng)由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所常規(guī)毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(NCICTC 3.0)判定，分為0～Ⅳ級(jí)。評(píng)估血液學(xué)毒性和胃腸道毒性，其中低毒性為0～Ⅱ級(jí)，嚴(yán)重不良反應(yīng)為Ⅲ～Ⅳ級(jí)，見(jiàn)表1。

表1 胃腸道及血液學(xué)毒性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

收集的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS21.0分析，計(jì)數(shù)資料采用頻數(shù)以及構(gòu)成比表示，比較時(shí)卡方檢驗(yàn)法，采用校正Logistic法對(duì)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)分析，相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度用比值比(odds ratio，OR)以及95%可信區(qū)間(95% confidential intervals，95%CI)表示，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析法，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均經(jīng)雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因型分布

攜帶rs28360317Ⅱ、ID和DD基因型的患者分別為47例(47.00%)、39例(39.00%)和14例(14.00%)，攜帶rs1805377 AA、AG和GG基因型的患者分別為52例(52.00%)、43例(43.00%)和5例(5.00%)，攜帶rs2836007 CC、CT和TT基因型的患者分別為63例(63.00%)、33例(33.00%)和4例(4.00%)。

2.2 患者化療療效以及不良反應(yīng)情況

接受化療患者中的客觀有效率為20.00%(20/100)，疾病控制率為80.00%(80/100)；22例(22.00%)發(fā)生嚴(yán)重的血液學(xué)毒性，18例(18.00%)出現(xiàn)嚴(yán)重的惡心、嘔吐等胃腸道毒性反應(yīng)。

2.3 XPF 基因多態(tài)性與鉑類聯(lián)合化療療效的相關(guān)性

XPF的3 個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性均與鉑類聯(lián)合化療的療效相關(guān)。對(duì)于 rs28360317，相對(duì)于Ⅱ基因型，ID基因型療效較好(P<0.05)。對(duì)于rs1805377，GG 基因型患者的療效顯著優(yōu)于 AA 基因型患者(P<0.05)；隱性模型結(jié)果的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)于 rs2836007 ， TT 基因型療效顯著優(yōu)于 CC 基因型(P<0.05)，隱性模型差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 XPF基因多態(tài)性與患者鉑類聯(lián)合化療療效的相關(guān)性分析

2.4 XPF 基因多態(tài)性與患者血液學(xué)毒性的相關(guān)性

XPF的rs28360317和rs2836007位點(diǎn)多態(tài)性與鉑類聯(lián)合化療的血液學(xué)毒性相關(guān)。對(duì)于rs28360317，ID、DD發(fā)生Ⅲ～Ⅳ級(jí)血液學(xué)毒性的幾率顯著高于Ⅱ級(jí)(P<0.05)；對(duì)于rs2836007，相較于CC ，CT出現(xiàn)Ⅲ～Ⅳ級(jí)血液學(xué)毒性的概率偏低(P<0.05)(表 3)。

表3 XPF基因多態(tài)性與患者血液學(xué)毒性的相關(guān)性分析

2.5 XPF基因多態(tài)性與患者胃腸道毒性的相關(guān)性分析

rs1805377多態(tài)性與胃腸道毒性有相關(guān)性，其他2個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與胃腸道毒性無(wú)相關(guān)性。rs1805377位點(diǎn)的AA基因型發(fā)生Ⅲ～Ⅳ級(jí)胃腸道毒性的幾率顯著低于AG基因型(P<0.05)(表 4)。

表4 XPF基因多態(tài)性與患者胃腸道毒性的相關(guān)性分析

3 討論

目前NSCLC是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤，晚期NSCLC患者已出現(xiàn)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，無(wú)法采用手術(shù)治療[9]。由于擁有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，臨床治療方案常常選擇鉑類藥物聯(lián)合化療[10]。本研究發(fā)現(xiàn)患者鉑類聯(lián)合化療的客觀有效率為20.0%，疾病控制率為80.0%，與現(xiàn)有的研究報(bào)道一致[11]。

目前NSCLC患者預(yù)后主要通過(guò)療效和毒性來(lái)評(píng)價(jià)，還會(huì)受其他因素的干擾，比如有遺傳因素，如單核苷酸多態(tài)性，與鉑類藥物化療的個(gè)體性差異密切相關(guān)[12-13]。有研究報(bào)道lncRNA可以在生物學(xué)過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用，包括細(xì)胞的生長(zhǎng)以及凋亡等[14]。其中XPF可以參與識(shí)別損傷的DNA，結(jié)合受損傷的片段，核酸內(nèi)切酶活性被激活。DNA的修復(fù)功能是細(xì)胞遺傳物質(zhì)維持穩(wěn)定與完整性的主要作用機(jī)制之一。所有編碼DNA修復(fù)酶的基因，單核苷酸多態(tài)都對(duì)基因的結(jié)構(gòu)與功能產(chǎn)生了影響，SNPs與個(gè)體的遺傳易感性可能有一定的相關(guān)性。XPF基因多態(tài)性在腫瘤方面的研究也備受醫(yī)學(xué)界關(guān)注[15]。XPF作為NER途徑的一種重要的蛋白質(zhì)，并且它與多種癌癥引起的順鉑為主的化療的相關(guān)[16]。且已有研究表明XPF基因多態(tài)性與NSCLC治療效果相關(guān)[17]。鑒于此本研究選取了rs1805377和rs2836007位在第7內(nèi)含子、rs28360317位在XPF第3內(nèi)含子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)XPF的3個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性均與鉑類聯(lián)合化療的療效相關(guān)，其中XPF的rs28360317，相對(duì)于Ⅱ基因型患者，ID基因型的患者療效較好；攜帶Ⅱ+ID基因型的患者療效顯著優(yōu)于DD基因型患者。對(duì)于rs1805377，GG基因型患者的療效顯著優(yōu)于AA 基因型患者。對(duì)于rs2836007，TT基因型的患者療效顯著優(yōu)于CC基因型患者。這與目前研究結(jié)果一致，且結(jié)果表明鉑類聯(lián)合化療對(duì)rs28360317和rs2836007純合子突變基因型的患者療效更好。

目前有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)XPF多態(tài)性與晚期NSCLC患者的疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[18]，本研究表明對(duì)于rs28360317，ID、DD發(fā)生Ⅲ～Ⅳ級(jí)血液學(xué)毒性的幾率顯著高于Ⅱ級(jí)；對(duì)于rs2836007，相較于CC，CT出現(xiàn)Ⅲ～Ⅳ級(jí)血液學(xué)毒性的概率偏低。rs1805377位點(diǎn)的AA基因型發(fā)生Ⅲ～Ⅳ級(jí)胃腸道毒性的幾率顯著低于AG基因型。這與現(xiàn)有的研究結(jié)果一致，但仍需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，XPF基因多態(tài)性與晚期NSCLC鉑類聯(lián)合化療的療效以及不良反應(yīng)相關(guān)，基因位點(diǎn)rs28360317、rs1805377和rs2836007多態(tài)性可能是晚期NSCLC潛在的生物標(biāo)志物之一，但仍需要多中心以及大樣本量來(lái)減少研究結(jié)果的偏移。