王 婧 李海婷

目前我國頭頸部惡性腫瘤的發(fā)病率約15/10萬，而頭頸部惡性腫瘤中的舌鱗狀細胞癌更是排在惡性腫瘤的第6位[1]。由于舌鱗狀細胞癌的發(fā)病部位特殊，舌內血管較為豐富，且運動頻繁，導致容易出現(xiàn)早期淋巴結轉移，并且治療后也容易復發(fā)[2]。粘附分子E(epithelial-cadherin，E-cadherin)是一種粘附分子，在胚胎的形成、組織結構的維持中發(fā)揮著重要意義，并參與到腫瘤的增生、分化和轉移當中[3]。平足蛋白(podoplanin，PDPN)能夠促進淋巴管祖母細胞自胚胎靜脈發(fā)育生成淋巴內皮細胞，是腫瘤淋巴結轉移的必要條件[4]。Toll樣受體4(Toll-like receptor 4 TLR4)是Toll樣受體的一種，在調劑免疫反應中發(fā)揮著重要的作用，近年來已被證實參與腫瘤的分化和轉移當中[5]。本研究選取我院收治82例舌鱗狀細胞癌患者臨產資料，以研究E-cadherin、PDPN、TLR4在舌鱗狀細胞癌中的表達及與淋巴結轉移的相關性研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月～2020年1月我院收治82例舌鱗狀細胞癌患者作為研究對象。納入標準：①患者符合《口腔頜面腫瘤病理學》[6]中舌鱗狀細胞癌診斷標準；②患者通過病理學證實為舌鱗狀細胞癌；③患者無第二原發(fā)腫瘤；④患者術前未接受抗腫瘤治療。排除標準：①患者存在嚴重肝腎功能不全；②患者合并其他部位惡性腫瘤；③患者存在嚴重凝血功能障礙；④患者為妊娠期女性。82例舌鱗狀細胞癌患者，男性40例， 女性42例，年齡30～84歲，平均年齡(55.65±20.51)歲，根據(jù)TMN分期標準：Ⅰ期31例，Ⅱ期25例，Ⅲ期26例，分化程度：低分化34例，中分化36例，高分化12例，淋巴結轉移38例，無淋巴結轉移44例。

1.2 方法

E-cadherin表達水平檢測方法：手術中切取患者癌組織和周圍健康組織，標本連續(xù)切片2張，分別采用HE和免疫組化染色法，嚴格按照SPTM法進行檢測，其中對于抗原的修復采用高溫高壓抗原組織修復法，送往鏡檢，在光鏡下進行觀察，胞膜內可觀察出棕黃色顆粒則可判斷為陽性，參考Shimzu標準，使用半計量法，分別對染色的細胞進行分部和染色分數(shù)計算：染色細胞標準：無著色細胞為0分，著色細胞低于組織細胞的三分之一為1分，著色細胞高于組織細胞的三分之一但不高于二分之三為2分，著色細胞高于二分之三為3分；染色細胞深度標準：不著色為0分，色淺為1分，色深為2分。將染色細胞和染色細胞深度分數(shù)相加，0分為-，2分為+，3分為++，4分為+++，5分為++++。

PDPN表達水平檢測方法：手術中切取患者癌組織和周圍健康組織，制成石蠟標本。采用二甲苯脫蠟，乙醇脫水，隨后以3%過氧化氫溶液去除標本內源性過氧化物酶，以pH 6.0的檸檬酸鈉緩沖液進行微波抗原修復，分別在兩個組織內滴加1∶2000稀釋的CellSignaling Technology公司的濃縮型兔抗人PDPN單克隆抗體，以4 ℃孵育，并隨后進行顯色、復染、脫色等操作送往鏡檢，在光鏡下進行觀察，染色細胞深度標準：無著色為0分，輕度著色或者淺黃色為1分，中度著色或者深黃色為2分，重度著色或者棕色為3分；在光鏡下隨機視野內500個細胞，1分為≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～80%，4分為>80%。將染色細胞和染色細胞深度分數(shù)相加，0分為-，2分為+，3分為++，4分為+++，5分為++++。

TLR4表達水平檢測方法：手術中切取患者癌組織和周圍健康組織，制成石蠟標本放于60 ℃烤箱內，隨后進行復水、清洗，采用檸檬酸鈉微波抗原修復，滴入Santa Cruz公司的兔抗人TLR4多克隆抗體，以4 ℃孵育，并隨后進行顯色、復染、脫色等操作送往鏡檢，在光鏡下進行觀察，400倍光鏡下進行技計數(shù)，光鏡下可發(fā)現(xiàn)細胞質以及細胞膜表現(xiàn)為棕黃色則可判定為陽性，切片隨機收集10個高倍視野內的細胞，每個切片內所含的陽性細胞數(shù)量為陽性細胞率，≥10%則判定為+，≥75%則為++，≤10%則為-。

1.3 觀察指標

檢測患者舌鱗狀細胞癌組織以及癌旁正常組織內E-cadherin、PDPN、TLR4的表達，同時與患者臨床特征進行分析。

1.4 方法

2 結果

2.1 舌鱗狀細胞癌組織以及癌旁正常組織內E-cadherin表達對比

舌鱗狀細胞癌組織中E-cadherin陽性表達率[41.46%(34/82)]顯著低于癌旁組織[85.36%(70/82)]，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 舌鱗狀細胞癌組織以及癌旁組織中E-cadherin表達對比(例，%)

2.2 舌鱗狀細胞癌組織以及癌旁組織內PDPN表達水平對比

PDPN在舌鱗狀細胞癌組織中陽性表達率[86.58%(71/82)]顯著高于癌旁組織[24.39%(20/82)]，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

表2 舌鱗狀細胞癌組織以及癌旁組織內PDPN表達對比(例，%)

2.3 舌鱗狀細胞癌組織以及癌旁組織內TLR4表達對比

TLR4在舌鱗狀細胞癌組織中陽性表達率[87.80%(72/82)]顯著高于癌旁組織[13.41%(11/82)]，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 舌鱗狀細胞癌組織以及癌旁組織內TLR4表達對比(例，%)

2.4 E-cadherin表達與患者臨床特征分析

E-cadherin表達與患者性別、年齡無相關性(P>0.05)；TMNⅢ～Ⅳ期E-cadherin表達明顯低于TNMⅠ～Ⅱ期，淋巴結轉移患者E-cadherin表達水平明顯低于無淋巴結轉移的患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 E-cadherin表達與患者臨床特征的關系/例

2.5 PDPN表達與患者臨床特征的關系

PDPN表達與患者性別、年齡無相關性(P>0.05)；TMNⅢ～Ⅳ期PDPN表達明顯高于TNMⅠ～Ⅱ期，有淋巴結轉移患者PDPN表達水平明顯高于無淋巴結轉移患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表5。

表5 PDPN表達與其臨床特征的關系/例

2.6 TLR4表達與其臨床特征的關系

TLR4表達與患者性別、年齡無相關性(P>0.05)；TMNⅢ～Ⅳ期TLR4表達明顯高于TNMⅠ～Ⅱ期，有淋巴結轉移患者TLR4表達水平明顯高于無淋巴結轉移患者，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表6。

表6 TLR4表達與其臨床特征的關系/例

3 討論

由于舌部的血管豐富，并且經常運動，導致舌鱗狀細胞癌的轉移率明顯更高，患者的生存率約在60%，患者死亡的主要原因是淋巴結轉移或者復發(fā)[7-8]。隨著生物分子學的不斷進步，多項研究認為腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及淋巴結轉移與生物學分子密切相關[9-10]。目前臨床上對于E-cadherin、PDPN、TLR4在舌鱗狀細胞癌表達的研究仍較少，本次研究在此基礎上對于其與患者臨床特征相關性進行分析，以為臨床診斷與治療提供指導。

E-cadherin是一種具有較高鈣依賴性的粘附因子，可以在人體的上皮組織內檢測到，分別由胞外區(qū)、跨膜區(qū)以及胞內區(qū)構成[11]。E-cadherin能夠作為受體也能夠充當配體。負責細胞間黏附反應的介導，當E-cadherin發(fā)揮作用時，其余粘附系統(tǒng)會失去作用.有研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin結構功能出現(xiàn)異常時，上皮結構的生成會出現(xiàn)障礙，將E-cadherin的基因轉染腫瘤細胞，能夠對腫瘤的侵襲和轉錄行為進行抑制，說明，E-cadherin是一種腫瘤抑制基因[12]。本研究表示：E-cadherin在患者舌鱗狀細胞癌組織的表達顯著低于癌旁組織(P<0.05)。Sgaramella等[13]發(fā)現(xiàn)：舌鱗狀細胞癌患者隨著癌組織內E-cadherin表達的升高，淋巴結轉移的存在一定的降低趨勢。這與本研究結果TMNⅢ～Ⅳ期E-cadherin表達明顯低于TNMⅠ～Ⅱ期，存在淋巴結轉移患者E-cadherin表達明顯低于不存在淋巴結轉移的患者(P<0.05)一致。分析因為E-cadherin對癌細胞的同嗜性粘附急性介導，組織癌細胞的脫落，從而限制癌細胞的轉移[14]。PDPN在人體的淋巴管內皮細胞中具有較高的表達，同時在侵襲性腫瘤內同樣具有一定的表達[15]。本研究表示：PDPN在患者舌鱗狀細胞癌組織的表達顯著高于癌旁組織(P<0.05)。有研究表示：PDPN在舌鱗狀細胞癌組織的表達明顯高于癌旁組織，且與淋巴結轉移存在相關性[16]，這與本研究結果TMNⅢ～Ⅳ期的患者癌組織內PDPN表達明顯高于TNMⅠ～Ⅱ期，存在淋巴結轉移患者癌組織內PDPN、表達明顯高于不存在淋巴結轉移的患者(P<0.05)一致。我們推測可能因為PDPN能夠造成E-cadherin的低表達，進而使細胞的接觸抑制，引起上皮間質轉化，進而促進癌細胞的轉移和增生[17]。TLR4屬于TLRs 的一種，在多種腫瘤細胞內均有一定的表達。TLR4雖然能夠加強人體對于腫瘤的免疫反應，但也能為腫瘤細胞的增殖發(fā)育提供環(huán)境，促進腫瘤的增殖分化[18-19]。本次研究發(fā)現(xiàn)：TLR4在患者舌鱗狀細胞癌組織的表達顯著高于癌旁組織(P<0.05)。有研究認為TLR4能夠促進腫瘤壞死因子-α的分泌，進而促進樹突細胞的成熟，加強T細胞以及巨噬細胞的合成，殺死腫瘤細胞。Anna等[20]研究得出，TLR4在患者舌鱗狀細胞癌組織的表達明顯升高，但與患者的淋巴結轉移無相關性。這與本研究結果不一致，分析可能由于病例收集較少所引起。本次研究E-cadherin、PDPN、TLR4在舌鱗狀細胞癌中的表達的基礎上對其與淋巴結節(jié)轉移進行相關性研究，為舌鱗狀細胞癌的診斷與淋巴結轉移預測提供幫助，但是本次研究仍存在一定的局限性，主要因為病例收集較少，且均來自同一省份，可能造成一定的偏差，所以以后應當加大病例的采集。

綜上所述，舌鱗狀細胞癌患者體內E-cadherin存在明顯的降低，PDPN、TLR4明顯升高，并且研究發(fā)現(xiàn)存在淋巴結轉移以及分期較高的患者體E-cadherin顯著更低，PDPN、TLR4顯著更高。