侯志遠(yuǎn)，劉 源，楊超然，趙繼森，程樹(shù)杰

河北大學(xué)附屬醫(yī)院 肝膽外科，河北 保定 071000

原發(fā)性肝癌被認(rèn)為是全球第六大最常診斷的癌癥，也是全球第三大癌癥死亡原因，肝癌在全球發(fā)病率中排名第五，其中肝細(xì)胞癌(HCC)占75%～85%[1]。中國(guó)是肝癌的發(fā)病大國(guó)之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界肝癌患者中55%來(lái)自中國(guó)[2]。肝癌的主要危險(xiǎn)因素是慢性HBV或HCV感染、黃曲霉毒素B1暴露、飲酒和代謝綜合征[3]。目前HCC的全球負(fù)擔(dān)仍在增加，可能很快超過(guò)每年100萬(wàn)例的發(fā)病率[4]。盡管臨床治療(如切除)取得了進(jìn)步，但由于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，晚期肝癌患者的預(yù)后并不理想，因此，術(shù)前早期診斷、術(shù)后恰當(dāng)?shù)妮o助治療成為延長(zhǎng)患者生存期的重要方法，但由于缺乏可靠的診斷手段和有效的治療方法，肝癌的死亡率在我國(guó)仍排在第2位[5]，故需要迫切尋找更敏感、更具特異性的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。目前，肝癌患者經(jīng)過(guò)治療后，通常使用影像學(xué)檢查作為常規(guī)的臨床監(jiān)測(cè)方法，雖然包括CT、MRI或超聲造影在內(nèi)的成像技術(shù)已將靈敏度從66%提高到82%，特異度提高到90%以上，但僅僅是用于檢測(cè)直徑至少為1 cm的結(jié)節(jié)[6]，而對(duì)直徑<1 cm的極早期或不典型肝癌，使用液體活檢技術(shù)則更有助于診斷及制訂治療方案。

液體活檢的新診斷概念在過(guò)去幾年中得到了極大的關(guān)注[7]。液體活檢技術(shù)收集人體非固體生物組織的樣本(如血液)用于不同的分析，其他的體液也可用于特殊的液體活檢，如用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的腦脊液、用于頭頸部腫瘤的唾液、用于胸腔及轉(zhuǎn)移性腫瘤的胸水、用于腹部及轉(zhuǎn)移性腫瘤的腹水、用于胃腸道腫瘤的糞便和用于尿道癌的尿液[8]。液體活檢由循環(huán)腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞游離核酸[如循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)]、外泌體或腫瘤誘導(dǎo)的血小板等不同的生物基質(zhì)組成。

游離DNA(cell-free DNA, cfDNA)是Mandel和Metais在1948年首次報(bào)道的在血液非細(xì)胞成分中發(fā)現(xiàn)的片段化DNA[9]。cfDNA通常為150～200個(gè)堿基對(duì)大小的雙鏈DNA片段，其主要通過(guò)細(xì)胞凋亡或壞死釋放到血流中。來(lái)自正常細(xì)胞的cfDNA在血漿中含量較低(平均為10～15 ng/mL)[10]，并且在一些生理或者病理情況下(如運(yùn)動(dòng)、炎癥、糖尿病、敗血癥、心肌梗塞及孕婦)，cfDNA的水平會(huì)增加[11]。據(jù)觀察，癌癥患者中的cfDNA總體水平高于未患癌癥的人[10]。ctDNA是特異性來(lái)源于原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腫瘤的cfDNA的一部分，盡管ctDNA在cfDNA中具有<0.1%～>90%的波動(dòng)比例[8]，但因其具有短半衰期、高敏感性、微創(chuàng)性、攜帶腫瘤的遺傳信息等特點(diǎn)，可對(duì)其進(jìn)行定量或定性分析，從而確定其在腫瘤的早期診斷、治療和進(jìn)展監(jiān)測(cè)方面的重要臨床價(jià)值[12]。事實(shí)上，ctDNA的潛在價(jià)值在包括肝癌在內(nèi)的各種癌癥中得到了廣泛的研究[13]。

1 ctDNA在HCC中的應(yīng)用

目前，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)已批準(zhǔn)cfDNA應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌的治療[8,14]，通過(guò)檢測(cè)血漿中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的突變情況來(lái)指導(dǎo)靶向藥物的應(yīng)用，還可用于檢測(cè)EGFR靶向酪氨酸激酶抑制劑(TKI)治療后癌癥進(jìn)展患者的T790M EGFR突變，這種突變會(huì)導(dǎo)致治療耐藥，從而指導(dǎo)更換靶向藥物為第三代EGFR抑制劑(如奧希替尼)。同時(shí)，F(xiàn)DA也批準(zhǔn)了cfDNA在結(jié)直腸癌中的應(yīng)用[14]，通過(guò)檢測(cè)血漿中SEPT9啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)來(lái)指導(dǎo)藥物對(duì)結(jié)直腸癌的應(yīng)用，且已證實(shí)cfDNA高甲基化狀態(tài)與結(jié)直腸癌的發(fā)生有關(guān)。

隨著監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)了多種新藥，晚期HCC的臨床管理在過(guò)去幾年中發(fā)生了顯著變化[15]。一線和二線的治療分配不是基于腫瘤特征，因?yàn)槌思滋サ鞍缀屠啄J單抗以外，沒(méi)有生物標(biāo)志物可以預(yù)測(cè)對(duì)任何特定治療的反應(yīng)[16]。von Felden等[17]為了能夠分析基因的突變情況并確定對(duì)全身治療反應(yīng)的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物，研究了121例晚期HCC患者的突變情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)具有PI3K/MTOR通路中DNA突變的患者在接受索拉非尼治療后的無(wú)進(jìn)展生存期明顯短于沒(méi)有突變的患者，說(shuō)明PI3K/MTOR通路是索拉非尼耐藥的主要驅(qū)動(dòng)因素。盡管研究結(jié)果還需要大量的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，但也證明了ctDNA分析的臨床實(shí)用性及其對(duì)未來(lái)HCC生物標(biāo)志物開(kāi)發(fā)的重要性。

如今，移植腫瘤學(xué)在治療肝膽惡性腫瘤方面具有廣闊的應(yīng)用前景，但由于術(shù)后復(fù)發(fā)和移植后排斥，使得移植腫瘤學(xué)的發(fā)展受到阻礙。cfDNA已經(jīng)成為器官移植患者管理的重要工具，cfDNA技術(shù)的進(jìn)步為進(jìn)行微小殘留病灶(MRD)的移植前評(píng)估、移植排斥和癌癥復(fù)發(fā)的移植后評(píng)估提供了選擇[18]。Ng等[19]連續(xù)2年進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明GcfDNA片段的大小譜是評(píng)估肝移植后移植物損傷和排斥反應(yīng)的潛在生物標(biāo)志物。

1.1 ctDNA在HCC診斷中的應(yīng)用 大多數(shù)HCC在早期是無(wú)癥狀的，而往往都是在后期被發(fā)現(xiàn)。目前，AFP是使用最廣泛的HCC腫瘤標(biāo)志物，但其缺乏敏感度(39%～65%)和特異度(76%～94%)[3]，在早期肝癌中無(wú)法被檢測(cè)到，甚至還會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果[20]。Chen等[21]分析了10項(xiàng)研究，他們?cè)u(píng)估了ctDNA與AFP聯(lián)合檢測(cè)的方法，發(fā)現(xiàn)ctDNA和AFP的聯(lián)合檢測(cè)比單獨(dú)檢測(cè)AFP能更準(zhǔn)確地識(shí)別肝癌患者，并且相比于影像學(xué)檢測(cè)，ctDNA檢測(cè)能更早的識(shí)別出疾病復(fù)發(fā)或進(jìn)展的患者。

盡管HCC中沒(méi)有明確的致癌基因[1]，但研究[22]已經(jīng)驗(yàn)證了檢測(cè)ctDNA中與HCC相關(guān)的體細(xì)胞突變以篩查早期患者的可行性。Wang等[13]檢測(cè)到ctDNA中存在非常普遍的基因改變，如TP53、CTNNB1、AXIN1和TERT啟動(dòng)子，并且這項(xiàng)檢測(cè)在包含331例患者的驗(yàn)證隊(duì)列中表現(xiàn)出100%的敏感度和94%的特異度。研究[13]表明，基因啟動(dòng)子的高甲基化已被證明是HCC發(fā)生的早期事件。DNA甲基化可導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性以及DNA與蛋白質(zhì)的相互作用發(fā)生變化，從而控制基因表達(dá)。Mohamed等[23]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血清RASSF1A的甲基化水平可能有助于早期診斷HCC，尤其是在HCV感染的高危患者中。另外，即使HCC患者在相似的巴塞羅那臨床肝癌分期系統(tǒng)(BCLC)階段，不同的個(gè)體可能具有不同的分子特征，因此對(duì)靶向治療的反應(yīng)不同[24]。故而，在診斷時(shí)對(duì)自身腫瘤分子特征進(jìn)行分類(lèi)識(shí)別對(duì)于了解腫瘤的生物學(xué)背景、指導(dǎo)患者分層、提高治療效果、預(yù)測(cè)預(yù)后至關(guān)重要[22]。

1.2 ctDNA判斷HCC患者的預(yù)后 早期研究[25]表明，血漿中cfDNA水平與腫瘤負(fù)荷顯著相關(guān)，因其具有高度特異性和短的半衰期，使得cfDNA具有預(yù)后價(jià)值的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。有證據(jù)[26]表明，cfDNA突變可能與血管侵襲密切相關(guān)，且cfDNA突變患者的無(wú)復(fù)發(fā)生存期更短。García-Fernández等[27]發(fā)現(xiàn)，cfDNA中突變的P53基因可能被用作HCC患者肝移植后腫瘤復(fù)發(fā)的生物標(biāo)志物。此外，因其較短的半衰期，cfDNA對(duì)治療后腫瘤負(fù)荷的變化可以做出快速反應(yīng)，因此可以通過(guò)檢測(cè)腫瘤特異性分子的改變情況來(lái)改善預(yù)后。還有研究[28]表明，HCC患者手術(shù)后cfDNA水平顯著下降，表明動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)cfDNA水平的變化可以為術(shù)后殘留病變和早期復(fù)發(fā)提供實(shí)時(shí)信息。

最近，對(duì)155例接受手術(shù)切除的HCC患者的一項(xiàng)研究[29]表明，cfDNA中胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7的啟動(dòng)子甲基化與較差的總生存期和早期腫瘤復(fù)發(fā)存在顯著聯(lián)系。也有報(bào)道稱(chēng)，ctDNA中的異常甲基化可識(shí)別AFP陰性的HCC患者[30]，并且異常甲基化與轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)增加[31]、更大的腫瘤[32]和更差的預(yù)后[30,32]相關(guān)?？傮w而言，ctDNA的濃度、突變和甲基化模式等變化可以為檢測(cè)殘留病變、識(shí)別早期復(fù)發(fā)和預(yù)測(cè)HCC預(yù)后提供參考。

1.3 ctDNA指導(dǎo)個(gè)體化用藥 cfDNA應(yīng)用于個(gè)體化治療的腫瘤基因譜鑒定，這已成為癌癥醫(yī)學(xué)的基本實(shí)踐[33]。近年來(lái)，免疫療法已經(jīng)成為HCC患者治療所選擇的最有希望的方法之一[34]。TKI一直是局部晚期HCC患者的標(biāo)準(zhǔn)全身治療選擇，一線藥物如索拉非尼和侖伐替尼顯示出較好的療效，二線藥物如瑞戈非尼、卡博替尼和雷莫蘆單抗為晚期HCC的序貫全身治療提供了更多機(jī)會(huì)。然而，只有不到40%的HCC患者才有資格接受免疫治療[35]，咎其原因可能是復(fù)雜和異質(zhì)的突變環(huán)境。使用ctDNA對(duì)HCC中的突變進(jìn)行量化已被證明是對(duì)免疫治療和TKI反應(yīng)的非常好的預(yù)測(cè)指標(biāo)。因此，迫切需要評(píng)估和開(kāi)發(fā)ctDNA的用途，以檢查其是否可以成為評(píng)估免疫療法或TKI反應(yīng)的有效工具。研究[36]表明，TP53基因組的改變與VEGF-A表達(dá)增加相關(guān)，此類(lèi)腫瘤可能成為貝伐珠單抗等抗血管生成藥物的靶點(diǎn)。同時(shí)，一項(xiàng)針對(duì)于TP53突變的非小細(xì)胞肺癌患者的回顧性研究[37]表明，采用含貝伐珠單抗治療的無(wú)進(jìn)展生存期更長(zhǎng)于不含貝伐珠單抗治療的患者。另一項(xiàng)前瞻性研究[17]表明，PI3K/MTOR通路突變的患者在使用TKI后的無(wú)進(jìn)展生存期明顯短于沒(méi)有這些突變的患者，但不是在免疫檢查點(diǎn)抑制之后，說(shuō)明ctDNA可作為對(duì)全身治療原發(fā)性耐藥的預(yù)測(cè)因子。

1.4 通過(guò)ctDNA監(jiān)測(cè)對(duì)治療的反應(yīng) ctDNA檢測(cè)除了指導(dǎo)分子靶向治療以外，還可能有助于監(jiān)測(cè)治療反應(yīng)，因?yàn)檠獫{中的突變狀態(tài)已被證明可以反映患者的腫瘤負(fù)荷并與患者的臨床狀態(tài)有關(guān)[38]。到目前為止，尚未檢測(cè)到相同的基因組譜，這表明分析患者的突變基因組景觀可以實(shí)現(xiàn)有針對(duì)的特異性治療。例如，Ikeda等[39]評(píng)估了14例患者，結(jié)果表明具有PTEN失活和MET激活突變的晚期HCC患者可以從西羅莫司和卡博替尼的治療中受益，具有CDKN2A失活和CTNNB1激活突變的患者在接受帕博西尼和塞來(lái)昔布聯(lián)合治療后，AFP水平降低。其次，ctDNA還可以作為評(píng)估瑞美替尼單藥治療和瑞美替尼與索拉非尼聯(lián)合治療在具有突變RAS等位基因的晚期HCC患者中的治療效率的合格工具[40]。此外，Galle等[41]研究證明，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)驅(qū)動(dòng)的DNA甲基化是晚期HCC患者對(duì)索拉非尼耐藥性的基礎(chǔ)。因此，通過(guò)監(jiān)測(cè)EMT過(guò)程中ctDNA的甲基化變化，可以預(yù)測(cè)腫瘤反應(yīng)及耐藥機(jī)制。

以免疫檢查點(diǎn)阻斷(ICB)為代表的免疫療法已經(jīng)改變了癌癥治療的臨床實(shí)踐。目前，對(duì)于血清AFP水平≥400 ng/mL的晚期HCC患者，推薦雷莫蘆單抗作為索拉非尼之后的二線藥物[16]。盡管ICB全身治療取得了初步成功，但需要使用分子檢測(cè)來(lái)確定適合免疫治療的患者。ctDNA可以區(qū)分真正的腫瘤進(jìn)展和由ICB治療造成的炎癥引起的假進(jìn)展[15]，并且ctDNA中某些特定基因的改變可能與免疫相關(guān)不良事件有關(guān)[42]。

肝切除、肝移植和局部治療(如消融治療、動(dòng)脈化療栓塞、內(nèi)外放療和肝動(dòng)脈灌注化療)已被廣泛應(yīng)用于HCC的治療[28，43]。盡管如此，5年內(nèi)HCC患者的術(shù)后復(fù)發(fā)率仍保持在>60%的高水平[44]，相當(dāng)多的術(shù)后患者可能有隱匿性微轉(zhuǎn)移或MRD，而沒(méi)有臨床或影像學(xué)跡象。然而，ctDNA可以作為檢測(cè)MRD的生物標(biāo)志物。值得說(shuō)明的是，MRD是指癌癥在治療后體內(nèi)持續(xù)存在的低于常規(guī)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的殘留在體內(nèi)的少量癌細(xì)胞。這部分癌細(xì)胞多屬于對(duì)治療無(wú)反應(yīng)或耐藥的癌細(xì)胞，一般不會(huì)引起任何癥狀或體征，且不能被傳統(tǒng)影像學(xué)(包括PET/CT)或?qū)嶒?yàn)室檢查方法發(fā)現(xiàn)。并且研究[45]表明，MRD的存在與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)增加和較短的生存期有關(guān)。如今，MRD檢測(cè)技術(shù)已被應(yīng)用于部分血液系統(tǒng)疾病中(如急性髓性白血病)[46]。Cai等[26]的一項(xiàng)研究結(jié)果顯示，術(shù)后ctDNA陽(yáng)性患者被認(rèn)為是早期復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的高危風(fēng)險(xiǎn)因素，說(shuō)明ctDNA可以作為監(jiān)測(cè)HCC中MRD的可靠生物標(biāo)志物。其結(jié)果還顯示，ctDNA與蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物脫-γ-羧基凝血酶原的結(jié)合提高HCC患者M(jìn)RD評(píng)估的敏感度，這將有利于更好的指導(dǎo)術(shù)后治療的臨床決策。另一項(xiàng)研究[47]也得出了類(lèi)似的結(jié)論，研究者鑒定了4種熱點(diǎn)突變(TP53-rs28934572、TRET-rs1242535815、CTNNB1-rs121913412 和 CTNNB1-rs121913401)，結(jié)果表明ctDNA中特定的突變可定義為HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此外，ctDNA可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)不同突變體的縱向變化和治療反應(yīng)。例如，Cai等[25]報(bào)道了1例患有體細(xì)胞突變(HCKp.V174M)的患者，這種改變?cè)诘?次TACE治療后被發(fā)現(xiàn)，然后在第2次肝臟手術(shù)后變得無(wú)法檢測(cè)到，并在第2次復(fù)發(fā)時(shí)急劇增加?？傊?，與傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查和蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物不同，跟蹤ctDNA的體細(xì)胞突變頻率能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤負(fù)荷和評(píng)估預(yù)后結(jié)果。

2 挑戰(zhàn)與展望

盡管ctDNA作為用于無(wú)癥狀個(gè)體和殘留疾病的癌癥檢測(cè)的新型液體活檢標(biāo)志物已獲得相當(dāng)大的關(guān)注，但要實(shí)施于臨床工作中仍存在許多挑戰(zhàn)。由于ctDNA從癌細(xì)胞中釋放出來(lái)，其攜帶腫瘤特異性遺傳信息或表觀遺傳變化，這些信息在正常cfDNA中是找不到的，因此準(zhǔn)確檢測(cè)和區(qū)分有效的ctDNA與正常cfDNA非常重要。同時(shí)血漿中的ctDNA主要來(lái)源于腫瘤細(xì)胞的破裂和釋放，血漿ctDNA的濃度會(huì)受到不同生理和病理?xiàng)l件的影響，這些影響會(huì)增加ctDNA的降解或白細(xì)胞裂解產(chǎn)生的細(xì)胞基因組DNA的污染[48]。所以，如何保證ctDNA是癌癥特異性來(lái)源并不含有其他雜質(zhì)的，這就成為一個(gè)不容忽視的新問(wèn)題[37]。還有研究[49]已經(jīng)證明，造血細(xì)胞具有非惡性突變的克隆造血。這就模糊了cfDNA是來(lái)自外周血細(xì)胞的破裂還是造血細(xì)胞的克隆性造血，造成基于特定cfDNA基因分型指導(dǎo)癌癥治療的準(zhǔn)確性降低。事實(shí)上，人們一致認(rèn)為通過(guò)使用細(xì)胞穩(wěn)定管并避免重復(fù)凍融循環(huán)進(jìn)行特殊處理可以提高ctDNA的產(chǎn)量和純度，但是不同的ctDNA純化方法和各種修改方案都可能會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響。其次，與患者相關(guān)的因素(如醫(yī)療、吸煙、運(yùn)動(dòng)、與年齡相關(guān)的克隆性造血、炎癥或心肺疾病等)，也有助于ctDNA的釋放[11]。此外，臨床醫(yī)生迫切需要一種具有高敏感度和特異度的通用工具來(lái)保證研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。

盡管ctDNA的突變及其甲基化模式作為MRD的檢測(cè)已成功應(yīng)用于晚期常見(jiàn)癌癥，但15%的轉(zhuǎn)移性癌癥患者可能沒(méi)有足夠的ctDNA水平來(lái)進(jìn)行血漿突變分析[50]。另外，HCC患者缺乏有效的藥物治療和普遍可行的突變，導(dǎo)致基于HCC相關(guān)基因突變的血漿中基于ctDNA的MRD檢測(cè)的醫(yī)學(xué)應(yīng)用很少。在過(guò)去十年中，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多用于ctDNA基因分型的檢測(cè)技術(shù)(如ddPCR、NGS、MFC等)。然而，每種技術(shù)的測(cè)試特征各不相同，并且適用于不同檢測(cè)下限的不同患者群體。因此，若要直接比較各種技術(shù)的高診斷特異度與適度敏感度，需要嚴(yán)格的交叉分析比較。ctDNA檢測(cè)對(duì)癌癥的低診斷敏感度可能是導(dǎo)致組織和ctDNA基因分型結(jié)果不一致的主要原因[51]。

根據(jù)系統(tǒng)生物學(xué)的觀點(diǎn)，基因組代表的是一種潛能，其經(jīng)轉(zhuǎn)錄和翻譯之后所形成的基因產(chǎn)物——蛋白質(zhì)是機(jī)體生物學(xué)行為的最終“執(zhí)行者”，與癌癥的發(fā)生、發(fā)展和治療直接相關(guān)。而且，蛋白質(zhì)的表達(dá)并不完全依從于基因組：一方面基因組水平檢測(cè)到的突變?cè)诜g階段可能會(huì)存在沉默表達(dá)，最終并沒(méi)有執(zhí)行實(shí)際生物學(xué)功能；另一方面許多癌癥的發(fā)生可能起源于蛋白質(zhì)整個(gè)翻譯過(guò)程的調(diào)控階段，而僅基于DNA層面的突變檢測(cè)難以確定其與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性。此外，遺傳信息從DNA傳遞到蛋白質(zhì)的過(guò)程中存在級(jí)聯(lián)放大現(xiàn)象，一個(gè)DNA分子由多個(gè)堿基對(duì)組成，因堿基對(duì)突變的多樣性，故產(chǎn)生的蛋白質(zhì)同樣具有多種性，此處包含了轉(zhuǎn)錄、非編碼調(diào)控、翻譯效率、蛋白修飾等的影響，也包含與該蛋白相互作用或者同一信號(hào)通路的相關(guān)分子的改變。另外值得注意的是，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，腫瘤的周?chē)h(huán)境也會(huì)隨之發(fā)生改變，該改變甚至?xí)缬谀[瘤發(fā)生，機(jī)體的免疫監(jiān)測(cè)及反應(yīng)在不同患者之間甚至在不同癌癥之間可能不盡相同。由于該步驟不涉及核酸序列水平變化，常規(guī)的DNA檢測(cè)無(wú)法企及。通過(guò)蛋白(或蛋白多組學(xué))進(jìn)行腫瘤特征分子發(fā)現(xiàn)，可以進(jìn)一步過(guò)濾假陽(yáng)性的可能。

在精準(zhǔn)個(gè)體化治療的時(shí)代，ctDNA檢測(cè)技術(shù)改變了腫瘤的診斷方式和治療方案，因其可應(yīng)用于腫瘤的早期診斷、預(yù)后判斷、療效檢測(cè)及復(fù)發(fā)預(yù)警等多個(gè)方面，從而為臨床工作帶來(lái)了新的決策思路。但因其獨(dú)特的生物學(xué)特點(diǎn)、檢測(cè)方法和技術(shù)的限制，應(yīng)用于臨床實(shí)踐仍有較大難度。考慮市場(chǎng)應(yīng)用前景、產(chǎn)品研發(fā)進(jìn)程及蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)中的關(guān)鍵位置，基于蛋白的檢測(cè)技術(shù)有必要嘗試，且值得期待。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：侯志遠(yuǎn)負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，資料分析，撰寫(xiě)論文；劉源、楊超然參與收集數(shù)據(jù)，修改論文；趙繼森、程樹(shù)杰負(fù)責(zé)擬定寫(xiě)作思路，指導(dǎo)撰寫(xiě)文章并最后定稿。