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        灰樹花多肽-鈣螯合物對(duì)小鼠衰老性骨質(zhì)疏松的改善作用

        2022-03-04 04:53:28張鳳麗趙立娜
        中國(guó)食品學(xué)報(bào) 2022年2期
        關(guān)鍵詞:小鼠劑量血清

        熊 煜, 張鳳麗, 劉 斌,2, 趙立娜*

        (1 福建農(nóng)林大學(xué) 國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心 福州350002 2 福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院 福州350002)

        原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥從病因?qū)W分為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(Postmenopausal osteoporosis, PMOP)(Ⅰ型)和老年性骨質(zhì)疏松癥(Ⅱ型)[1]。 絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松通過去勢(shì)法等被國(guó)內(nèi)外學(xué)者廣泛研究[2-3]。 由于老年性骨質(zhì)疏松癥(SOP)是生物衰老在骨骼方面的一種特殊表現(xiàn), 且復(fù)制SOP 動(dòng)物模型的周期長(zhǎng),死亡率較高,因此研究SOP 較困難。 目前,D-半乳糖致雄性鼠骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型是研究SOP的一個(gè)重要工具, 具有簡(jiǎn)便易行、 價(jià)格低廉的特點(diǎn)。 大量D-半乳糖可致睪丸功能減退,雄激素水平降低,這與衰老致性腺功能退化相似[4]。

        灰樹花是擔(dān)子菌亞門的一種藥食兩用珍稀菇類,因含有豐富的多糖、蛋白質(zhì)及微量元素等活性物質(zhì),已成為亞洲流行的食用菌。其蛋白質(zhì)含量高達(dá)31.5%,必需氨基酸在總氨基酸中占比高達(dá)45.5%,遠(yuǎn)高于香菇、銀耳、金針菇、黑木耳等常見食用菌[5]。 灰樹花多肽具有抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)、降血脂和降血糖等活性。 鈣是人體必需的一種重要礦質(zhì)元素,能有效防治骨質(zhì)疏松[6],而日常膳食并不能滿足機(jī)體每日需求量。 中國(guó)現(xiàn)有膳食結(jié)構(gòu)的營(yíng)養(yǎng)調(diào)查表明,我國(guó)居民鈣攝入量普遍偏低,僅達(dá)鈣推薦供給量(RDA)的50%左右[7]。我國(guó)市場(chǎng)流通鈣制劑約2 700 種, 然而普遍存在生物利用度低的現(xiàn)象[8]。 生物活性肽具有鈣元素載體的作用,可輸送鈣元素到人體各處,充分發(fā)揮其功能[9]。 肽與鈣離子螯合形成的肽鈣螯合物, 能夠通過腸道對(duì)小分子肽段的吸收機(jī)制以螯合物的形式被小腸主動(dòng)吸收,不易形成磷酸鈣沉積物,能提高鈣的生物利用度,具有雙重營(yíng)養(yǎng)功能,是一種理想的補(bǔ)鈣制劑[10]。Bao 等[11]、張根生等[12]證明多肽鈣制劑能夠有效預(yù)防大鼠骨質(zhì)疏松癥。本文通過腹腔注射D-半乳糖建立衰老性骨質(zhì)疏松大鼠模型, 結(jié)合體外Caco-2 細(xì)胞試驗(yàn), 探討灰樹花多肽-鈣螯合物對(duì)衰老性骨質(zhì)疏松癥的影響。

        1 材料與方法

        1.1 動(dòng)物與細(xì)胞

        SPF 級(jí)成年雄性ICR 小鼠50 只,每只體質(zhì)量(45±5)g, 由吳氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 許可證號(hào):SCXK(滬)2017-0005。 Caco-2 細(xì)胞,由福州大學(xué)生物工程研究所提供。

        1.2 主要試劑及儀器

        灰樹花,慶元縣宏億農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司;無水乙醇、氫氧化鈉(NaOH)、HCL、無水氯化鈣,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;D-半乳糖,Aladdin 公司;鈣測(cè)定試劑盒、血清無機(jī)磷測(cè)定試劑盒、堿性磷酸酶測(cè)試盒,南京建成生物工程研究所;DMEM 培養(yǎng)基,美國(guó)Hyclone 公司;特級(jí)胎牛血清,澳洲Gibco公司;1xPBS,美國(guó)Hyclone 公司;Fluo-3-Am,美國(guó)Sigma 公司。

        X52 酶標(biāo)儀, 美國(guó)Molecullar 公司;Alpha 1-4LD 型凍干機(jī), 德國(guó)Christ 公司;BR 4i 型高速冷凍離心機(jī),法國(guó)Jouan 公司;AA-6800 原子吸收分光光度計(jì),島津制作儀器有限公司;AL204 精密分析天平,梅特利托利多儀器(上海)有限公司;SHA.B 精達(dá)水浴恒溫振蕩器, 常州精達(dá)儀器制造有限公司;THZ-82 細(xì)胞培養(yǎng)箱,日本SANYO 公司。

        1.3 方法

        1.3.1 灰樹花多肽-鈣螯合物的制備 參考實(shí)驗(yàn)室前期優(yōu)化條件制備灰樹花多肽-鈣螯合物[13]。 灰樹花磨粉過40 目篩, 按料液比1∶50 加蒸餾水溶解,1 mol/L NaOH 調(diào)pH 值至10.0。置于恒溫振蕩器中60 ℃水浴90 min,冷卻后6 層紗布過濾。 上清液用1 mol/L HCl 調(diào)pH 值至2.5。5 000 r/min 離心10 min,沉淀冷凍干燥后即灰樹花蛋白。稱取一定量的灰樹花蛋白,按照液料比40∶1 加入超純水進(jìn)行溶解,調(diào)pH 值至7.5(復(fù)合蛋白酶最適pH),加復(fù)合蛋白酶(溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%), 將其放置于53 ℃水浴搖床中充分反應(yīng)4 h, 沸水浴滅酶10 min,冷卻至室溫,離心(4 500 r/min)10 min,取上清液冷凍干燥即得灰樹花多肽。 按溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%復(fù)溶多肽,肽鈣質(zhì)量比2∶1 加入無水氯化鈣,充分?jǐn)嚢?,調(diào)節(jié)pH 值至8.0,60 ℃恒溫反應(yīng)60 min。反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫, 加入95%乙醇洗滌靜置過夜后離心(5 000 r/min,10 min),取沉淀進(jìn)行冷凍干燥,得到灰樹花多肽-鈣螯合物。 螯合物用火焰原子吸收光譜儀測(cè)得鈣含量為7%。

        1.3.2 動(dòng)物分組 空白對(duì)照組(不造模+去離子水灌胃)10 只;模型對(duì)照組(造模+去離子水灌胃)10只;陽性對(duì)照組(HCaCO3,造模+高劑量碳酸鈣灌胃)10 只;陽性有機(jī)鈣對(duì)照組(HGCa,造模+高劑量葡萄糖酸鈣灌胃)10 只; 試驗(yàn)組 (Hgps-Ca,造模+高劑量灰樹花多肽-鈣螯合物灌胃)10 只。

        1.3.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 50 只雄性ICR 小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周,自由飲水飲食,室溫控制在20~25 ℃,濕度60%左右。按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組,除了空白對(duì)照組外,其它5 組均給予腹腔注射120 mg/(kg d)的D-半乳糖[14],骨質(zhì)疏松癥模型造模;空白對(duì)照組給予腹腔注射同等劑量的生理鹽水。 8 周后造模成功,空白對(duì)照組、模型對(duì)照組均給予去離子水灌胃; 陽性對(duì)照組分別給予高劑量碳酸鈣(HCa-CO3),高劑量葡萄糖酸鈣(HGCa)灌胃;試驗(yàn)組給予高劑量灰樹花多肽-鈣螯合物灌胃(高劑量組按生藥量換算為53.2 mg/kg bw)。 飼養(yǎng)過程中小鼠自由進(jìn)食基礎(chǔ)飼料和自由飲用去離子水。 基礎(chǔ)飼料為南通特洛菲LAD 0001 標(biāo)準(zhǔn)飼料。 各組連續(xù)灌胃4 周后,采血取材檢測(cè)血生化指標(biāo)。

        1.3.4 血清樣本采集及檢測(cè)方法 在12 h 禁食后, 眼球取血, 將血樣品轉(zhuǎn)移到裝有抗凝劑的2 mL 離心管中。在4 ℃下將血清離心10 min(3 000 r/min),取其上清,-20 ℃保藏備用。 用于血清指標(biāo)的測(cè)定:1)血清Ca2+濃度檢測(cè):采用鄰甲酚肽絡(luò)合酮法測(cè)定;2) 血清P 濃度檢測(cè): 采用磷鉬酸法測(cè)定;3)血清ALP 活性檢測(cè):采用微量酶標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定;4)血清CAT 活性檢測(cè):檢測(cè)步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

        1.3.5 骨指標(biāo)的測(cè)定 12 周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,術(shù)前小鼠禁食, 取每只小鼠左右股骨和脛骨, 去除軟組織,用數(shù)字卡尺測(cè)量左股骨、左脛骨的長(zhǎng)度直徑。應(yīng)用GraphPad Prism 7.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。

        1.3.6 細(xì)胞培養(yǎng) 將Caco-2 細(xì)胞置于37 ℃,體積分?jǐn)?shù)5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至20~40 代。培養(yǎng)基采用DMEM 加入20%胎牛血清、1%雙抗[15]。細(xì)胞培養(yǎng)過程中每周換液2~3 次, 待貼壁細(xì)胞匯合率達(dá)到80%~90%時(shí)進(jìn)行傳代。棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基, 加入適量0.25%胰蛋白酶消化2~3 min,觀察細(xì)胞變圓后加入適量DMEM 培養(yǎng)基終止消化,按1∶3 的比例進(jìn)行傳代。

        1.3.7 細(xì)胞毒性試驗(yàn) 將傳代后的Caco-2 細(xì)胞培養(yǎng)至生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期, 采用胰蛋白酶對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞進(jìn)行消化。 并加入含有20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,制得細(xì)胞密度為2×104CFU/mL 的細(xì)胞懸液。 將細(xì)胞懸液以每孔200 μL 體積接種于96 孔培養(yǎng)板,細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后,小心吸出培養(yǎng)基,向其中加入不同鈣含量的灰樹花多肽-鈣螯合物(GPs-Ca),每個(gè)濃度設(shè)置6 孔為平行試驗(yàn)??瞻讓?duì)照組設(shè)置為只加入等量培養(yǎng)基, 不加入細(xì)胞懸液,也不加入樣品。陰性對(duì)照組設(shè)置為只加入等量培養(yǎng)基, 不加樣品。 陽性對(duì)照組設(shè)置為氯化鈣,葡萄糖酸鈣。將試驗(yàn)組,空白對(duì)照組,陰性對(duì)照組,陽性對(duì)照組同時(shí)置于CO2含量為5%的細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)。 24 h 后, 每孔中加入20 μL MTT(5 mg/mL)溶液,繼續(xù)孵育4 h 后棄去上清液,每孔中加入150 μL DMSO,充分震蕩溶解。 采用酶標(biāo)儀于波長(zhǎng)570 nm 處測(cè)定每孔的吸光值并記錄,空白孔調(diào)零[16]。 按照如下公式進(jìn)行計(jì)算細(xì)胞存活率(IC):

        IC(%)=(OD試驗(yàn)組/OD對(duì)照組)×100

        1.3.8 GPs-Ca 對(duì)細(xì)胞鈣攝取的影響 灰樹花多肽-鈣螯合物(GPs-Ca)的Caco-2 細(xì)胞攝取試驗(yàn)采用Fluo-3-AM 細(xì)胞內(nèi)鈣離子探針進(jìn)行細(xì)胞吸收鈣量的測(cè)定[17]。按5×104CFU/mL 的細(xì)胞密度,將細(xì)胞接種于6 孔板上,將接種板置于37 ℃,CO2含量為5%的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d。 設(shè)定灰樹花多肽-鈣螯合物(Hgps-Ca) 試驗(yàn)組,CaCl2陽性對(duì)照組,空白對(duì)照組,依據(jù)MTT 細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果,考察不同鈣濃度(2.5,5,7.5,10,15,20,25,30 mmol/L)的樣品對(duì)細(xì)胞鈣攝取的影響。 將培養(yǎng)14 d 的細(xì)胞上層培養(yǎng)液小心吸取出來, 加入新鮮的培養(yǎng)液與各組分樣品處理1 h 后,吸去培養(yǎng)液,加入HBSS 緩沖液清洗3 遍后,再加入10 μmol/L Fluo-3-AM 細(xì)胞內(nèi)鈣離子探針作用1 h, 用HBSS 緩沖液沖洗3 遍后,移取樣品至1.5 mL 離心管中,1 0000 r/min,離心5 min,吸取上清液,采用流式細(xì)胞儀對(duì)各試驗(yàn)組Caco-2 細(xì)胞攝取鈣離子含量進(jìn)行檢測(cè)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 血清生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

        D-半乳糖誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥,其突出表現(xiàn)即為血清鈣/磷水平的顯著變化。 圖1 結(jié)果顯示:在第4 周,高劑量碳酸鈣(HCaCO3)、高劑量葡萄糖酸鈣(HGCa)、高劑量灰樹花多肽-鈣螯合物(Hgps-Ca)喂養(yǎng)的小鼠血清Ca 高于模型組(P<0.05),且喂食Hgps-Ca 的小鼠血清Ca 水平略高于高劑量碳酸鈣(HCaCO3)、高劑量葡萄糖酸鈣(HGCa)組。試驗(yàn)組的血清P 水平,與模型組相比也均有顯著上升(P<0.01),喂食Hgps-Ca 的小鼠血清P 水平與空白對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 此外,模型組血清ALP 水平顯著高于空白組(P<0.01),這種增加可歸因于成骨細(xì)胞活躍和成骨率增加[18]。 喂食高劑量碳酸鈣(HCaCO3)、高劑量葡萄糖酸鈣(HGCa)、高劑量灰樹花多肽-鈣螯合物(Hgps-Ca)小鼠灌胃4 周后血清ALP 值均顯著下降(P<0.01)。 自由基和氧化應(yīng)激與骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制有關(guān)[19],通過血清過氧化氫酶(CAT)水平的顯著下降可以清楚地表明這一點(diǎn)。由圖1d 可看出,與正常對(duì)照組相比,模型組血清CAT 水平下降約60%。Manolagas[20]報(bào)告說,過氧化氫酶的使用可以防止大鼠骨丟失, 推測(cè)具有抗氧化特性的化合物是預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥的最佳候選。 灌胃4 周后,小鼠血清過氧化物酶(CAT)水平幾乎恢復(fù)到正常值(P>0.05)。 這一效應(yīng)或可歸因于富含多肽的灰樹花多肽-鈣螯合物部分的強(qiáng)抗氧化性,具有調(diào)節(jié)核因子-紅細(xì)胞-2 相關(guān)因子2(Nrf2)/Kelch樣ECH 相關(guān)蛋白(Keap)通路途徑的作用[21]。

        圖1 各組小鼠血清生化指標(biāo)Fig.1 Biochemical parameters in the serum of mice for each group

        2.2 骨形態(tài)檢測(cè)結(jié)果

        股骨指數(shù)可以反映動(dòng)物體的骨骼生長(zhǎng)狀況。圖2 顯示了所有組的股骨和脛骨質(zhì)量和長(zhǎng)度。 在灌胃4 周結(jié)束時(shí),各組股骨質(zhì)量、長(zhǎng)度較模型組均有所上升,無機(jī)鈣源加鈣組(HCaCO3)和高劑量灰樹花多肽-鈣螯合物組(Hgps-Ca)和模型組相比有顯著差異(P<0.01),與空白對(duì)照組相比無顯著性差異(P>0.05),而高劑量灰樹花多肽-鈣螯合物組(Hgps-Ca)更接近空白對(duì)照組。脛骨長(zhǎng)度在各組中未觀察到顯著差異。高劑量灰樹花多肽-鈣螯合物組和葡萄糖酸鈣組脛骨質(zhì)量顯著高于模型組(P<0.01),且與對(duì)照組相比無顯著差異(P>0.05)。

        圖2 各組小鼠股骨、脛骨質(zhì)量及長(zhǎng)度Fig.2 Weight and length of femurs and tibia for each group

        2.3 骨組織顯微結(jié)構(gòu)的觀察

        H & E 染色顯示各組樣品對(duì)股骨病理學(xué)特征的影響。 連續(xù)注射8 周D-半乳糖,小鼠骨形態(tài)特性發(fā)生顯著變化。 與對(duì)照組(圖3a)相比,模型組(圖3b)骨小梁稀少或斷裂,小梁變細(xì),體積減小,連接減少,游離端增多,小梁數(shù)、小梁鏈接和小梁骨面積觀察到顯著減少,骨礦化受損。通過灰樹花多肽-鈣螯合物和葡萄糖酸鈣(圖3d,3e)處理后,股骨細(xì)胞系正常排列,成骨細(xì)胞較模型組有明顯增加趨勢(shì),結(jié)構(gòu)顯著改善[22]。

        圖3 各組試驗(yàn)小鼠股骨組織病理切片觀察(200x)Fig.3 Pathological sections of femur in experiment of mice for each group (200x)

        2.4 MTT 毒性評(píng)價(jià)

        由圖4 可知,當(dāng)多肽-鈣螯合物的鈣濃度小于15 mmol/L 時(shí),Caco-2 細(xì)胞存活率均大于85%。 而相同鈣濃度下(15 mmol/L),CaCl2和葡萄糖酸鈣組細(xì)胞存活率為80.91%,75.49%。 因此,肽-鈣螯合物的鈣濃度在0~15 mmol/L 范圍均不會(huì)對(duì)Caco-2細(xì)胞造成損傷,且在相同鈣濃度下,相比無機(jī)鈣和葡萄糖酸鈣,螯合鈣對(duì)細(xì)胞造成損傷最小,存活率更高。

        圖4 不同鈣濃度下Caco-2 細(xì)胞活力Fig.4 Cell viability of Caco-2 cells in different calcium concentration

        2.5 多肽促鈣吸收試驗(yàn)

        通過比較灰樹花多肽-鈣螯合物和CaCl2、葡萄糖酸鈣在鈣吸收上的差異可以明確多肽在腸道細(xì)胞中的促鈣吸收作用。 由圖5 可知,Caco-2 細(xì)胞對(duì)CaCl2中鈣離子的攝取率最低, 且一定濃度后吸收率變化不顯著; 細(xì)胞對(duì)葡萄糖酸鈣的鈣吸收率略高于CaCl2。而對(duì)于多肽-鈣螯合物,細(xì)胞對(duì)鈣離子的攝取率隨鈣濃度的增大逐漸增大。 試驗(yàn)結(jié)果表明, 灰樹花多肽與Ca2+的螯合作用能有效促進(jìn)腸道細(xì)胞中鈣的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn), 這與文獻(xiàn)所述結(jié)果一致, 即多肽能與Ca2+結(jié)合產(chǎn)生可溶性絡(luò)合物, 防止Ca2+在呈中性或弱堿性環(huán)境的小腸內(nèi)沉淀,從而促進(jìn)鈣的吸收和利用[23]。

        圖5 不同鈣濃度下細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i 變化Fig.5 Changes of intracellular [Ca2+]i in different calcium concentrations

        3 討論

        D-半乳糖致雄性鼠骨質(zhì)疏松是一個(gè)較為實(shí)用的研究衰老性骨質(zhì)疏松(SOP)的動(dòng)物模型,相比于其它SOP 動(dòng)物模型簡(jiǎn)便易行、價(jià)格低廉。 通過持續(xù)6~10 周每天注射50~500 mg/(kg·d)[24-25]劑量的D-半乳糖,建立D-半乳糖致動(dòng)物衰老模型。連續(xù)注射D-半乳糖后,睪丸功能減退,雄性激素水平降低。此外,體內(nèi)產(chǎn)生過多的氧自由基破壞了膠原蛋白,導(dǎo)致各種細(xì)胞氧化損傷,影響了骨細(xì)胞的正常代謝, 造成礦物質(zhì)流失, 加速雄性鼠的衰老,使其骨量減少,骨質(zhì)丟失。 本研究給予ICR 小鼠120 mg/d 的D-半乳糖,持續(xù)8 周,觀察到股骨體積和框架體積減小,骨孔隙率和框架密度增加,股骨細(xì)胞松散多孔,像蜂窩狀,肥大軟骨細(xì)胞區(qū)的顯著擴(kuò)張, 即在股骨近端干骺端發(fā)生小梁組織形態(tài)學(xué)變化,骨小梁數(shù)顯著減少,表明衰老性骨丟失動(dòng)物模型的建立。 成骨作用和溶骨作用的正常進(jìn)行是維持血液中鈣、 磷含量穩(wěn)定的重要環(huán)節(jié)。 同樣,血液中鈣、磷含量的高低又直接影響骨的鈣化與溶解,它們是相互影響,互相制約的,并受1,25-(OH)2D3、甲狀旁腺素及降鈣素等的調(diào)節(jié)和控制[26]。 堿性磷酸酶(ALP)能分解有機(jī)磷酸化合物,產(chǎn)生大量的無機(jī)磷酸鹽離子,促使其與鈣離子結(jié)合成磷酸鈣而沉淀于骨組織內(nèi)。 Robison[27]揭示了ALP 在骨鈣化過程中起主要作用,在異常鈣化的情況下,其表達(dá)升高。本研究發(fā)現(xiàn)模型組小鼠的幾種重要礦物質(zhì)如鈣、 磷含量相比于同齡正常小鼠均有顯著降低,血清ALP 水平顯著升高。 目前,有機(jī)鈣(特別是肽鈣復(fù)合物)作為一種新型的鈣補(bǔ)充劑,已成為研究熱點(diǎn)[28-29]。灌胃4 周后,高劑量的灰樹花多肽-鈣螯合物處理組的小鼠血清Ca、P 水平升高,并上升到與空白對(duì)照組相當(dāng)?shù)闹担@與之前的研究一致。在骨鈣化過程中,ALP 起著重要作用。高血清ALP 水平可能干擾鈣吸收[30]?;覙浠ǘ嚯?鈣螯合物飼喂的小鼠血清ALP 值低于碳酸鈣組和葡萄糖酸鈣組, 表明肽鈣螯合的有機(jī)鈣更容易被吸收和鈣化。CAT 水平較模型組顯著上升,表明其抗氧化能力或許對(duì)衰老性骨質(zhì)疏松有一定預(yù)防作用[31-32]。Fluo-3-Am 作為一種新型的高度特異性Ca2+熒光指示劑, 可以靈敏地反映細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的變化。 研究結(jié)果顯示,灰樹花多肽-鈣螯合物相比CaCl2、 葡萄糖酸鈣更易被細(xì)胞吸收。 灰樹花肽-鈣螯合物一方面能防止肽的水解,使鈣離子在經(jīng)過胃及小腸中的吸收部位時(shí)都以螯合態(tài)形式存在, 不易形成磷酸鈣沉積物; 另一方面, 肽-鈣螯合物也更多地利用肽轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)吸收,從而有效提高鈣的生物利用率。

        4 結(jié)論

        本試驗(yàn)采用復(fù)合蛋白酶水解灰樹花蛋白制備多肽, 以多肽和CaCl2為原料采用液體反應(yīng)法合成灰樹花多肽-鈣螯合物,經(jīng)測(cè)定,鈣含量為7%。結(jié)果表明,Hgps-Ca 具備促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)發(fā)育的作用,對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的小鼠衰老性骨質(zhì)疏松有一定改善作用。 同時(shí)體外吸收試驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)其具備促進(jìn)鈣吸收作用。灰樹花多肽-鈣螯合物促進(jìn)鈣吸收行使的多肽轉(zhuǎn)運(yùn)途徑和金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)途徑其分子機(jī)制和轉(zhuǎn)運(yùn)途徑仍需進(jìn)一步研究。 本課題組將對(duì)灰樹花多肽-鈣螯合物在動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制和病理毒理學(xué)進(jìn)行深入研究。

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