王雪

摘要：用液相色譜法檢測(cè)食品中的食品添加劑，需要進(jìn)行檢測(cè)前的準(zhǔn)備工作，如流動(dòng)相過濾脫氣處理、高效液相色譜柱壓力檢測(cè)和排氣泡處理、色譜柱和樣品處理等，樣品的分析過程應(yīng)嚴(yán)格規(guī)定，有些設(shè)備檢測(cè)后應(yīng)妥善處理。

關(guān)鍵詞：液相色譜法檢測(cè);食品添加劑;準(zhǔn)確性

一、引言

食用添加劑可以增強(qiáng)食品的防腐能力，從而提高食品的質(zhì)量和口感。因此，在許多食品加工過程中，通常會(huì)添加一種或幾種食品添加劑，如脫氫乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精鈉和乙?；前?。根據(jù)實(shí)際需要，上述食用添加劑還可發(fā)揮增稠、增甜、防腐、乳化、染色、護(hù)色、膨化、增香、漂白、消泡、防結(jié)塊等多種功能。然而，一些非法生產(chǎn)商為了牟取更多利潤(rùn)，不惜非法添加食品添加劑，嚴(yán)重危害食品安全甚至人類健康。因此，人們必須正確檢測(cè)食物中的食用添加劑。雖然一般使用液相色譜法進(jìn)行測(cè)試，但是，在實(shí)際測(cè)試中，可能會(huì)由于某些因素而影響最后的測(cè)試結(jié)果。因此，應(yīng)當(dāng)采取更有效的措施，通過增加液相色譜法測(cè)定食品中食物添加劑的準(zhǔn)確性，從而確定食品安全[1]。

二、液相色譜法原理

液相色譜法是一種以液體為流動(dòng)相的色譜分析方法。色譜法產(chǎn)生于1906年。當(dāng)時(shí)俄羅斯著名的植物學(xué)家zwitt在獲得植物色素后，用石油醚分散不同的顏色，在色譜柱上顯示出不同顏色的色帶，不同的植物色素有不同的色帶。色譜法也應(yīng)運(yùn)而生。液相色譜的分離機(jī)理主要基于混合物中各組分的固定相和流動(dòng)相之間的親和力差異。根據(jù)固定相的類型和狀態(tài)差異，液相色譜法分為液-液相色譜法、液-固色譜法和鍵合相色譜法。近年來，人們?cè)谝合嘀V體系中加入了高壓的液體流動(dòng)系統(tǒng)，使流動(dòng)相在高壓下迅速地流動(dòng)，以改善分離效率，從而產(chǎn)生了高效液相色譜法。隨著食品行業(yè)的發(fā)展，食品添加劑的品種也日益豐富，但由于食用添加劑成本低，副作用明顯，所以目前食用添加劑的濫用現(xiàn)狀仍然十分嚴(yán)峻，對(duì)食用添加劑進(jìn)行長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)已勢(shì)在必行。液相色譜法就是最常見的食用添加劑監(jiān)測(cè)的方法之一。

二、做好檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作

（一）流動(dòng)相過濾脫氣處理

為了用液相色譜法檢測(cè)食品中的添加劑，首先要進(jìn)行流動(dòng)相過濾和脫氣處理。一般來說，在樣品溶劑和流動(dòng)相溶液中，直徑大于0.45μM的微粒。但是，由于試驗(yàn)中使用的色譜柱內(nèi)腔非常小，填料也非常小，樣品溶液中產(chǎn)生的細(xì)顆?？赡軙?huì)阻礙色譜柱。因此，在試驗(yàn)前后，應(yīng)對(duì)所有樣品溶液進(jìn)行充分過濾，以去除雜質(zhì)顆粒。流動(dòng)相的脫氣過程也是非常關(guān)鍵的，它可以防止系統(tǒng)中出現(xiàn)泡沫或溢出，避免對(duì)泵的正常運(yùn)行產(chǎn)生負(fù)面影響，確保HPLC檢測(cè)器具有良好的極限靈敏度和穩(wěn)定性，使測(cè)試更加成功。對(duì)于低沸點(diǎn)溶液，在處理空氣萃取法和沸騰法時(shí)，還必須注意溶液揮發(fā)引起的成分變化。樣品通常通過超聲波脫氣處理，這可以減少對(duì)溶液成分的影響。一般情況下，超聲波脫氣過程可在20～30分鐘內(nèi)完成。在處理過程中，應(yīng)注意防止溶劑瓶接觸超聲波罐的底部和側(cè)壁，導(dǎo)致溶劑瓶破裂和損壞。另外，注意合理調(diào)整容器內(nèi)的液位，不要超過水位太多[2]。

（二）HPLC柱壓測(cè)試和排氣泡試驗(yàn)處理

對(duì)HPLC柱壓檢查，可以確定其工作狀況正常。但一旦柱壓產(chǎn)生異常情況，則導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果不正確。但通常，在HPLC發(fā)生柱壓過高的情形較為多見。因此，應(yīng)該先把保護(hù)柱拆下并觀測(cè)柱壓。如果柱壓降則可以確定保護(hù)柱存在故障;而如果柱壓未降，則需要重新進(jìn)行檢查。從HPLC中取出色譜柱，然后觀察柱壓。一旦柱壓沒有下降，判斷可能是管道堵塞造成的，徹底清洗后繼續(xù)檢測(cè)。當(dāng)色譜柱的入口和出口反向連接時(shí)，用超過色譜柱體積十倍的流體沖洗色譜柱，然后觀察色譜柱壓力。如果柱壓力沒有降低，繼續(xù)后續(xù)檢測(cè)。更換色譜柱入口篩板，觀察柱壓。如果此時(shí)柱壓降低，則表明其受到樣品溶液中雜質(zhì)顆粒的影響，導(dǎo)致入口篩板堵塞。如果色譜柱壓力仍在下降，則必須聯(lián)系制造商進(jìn)行維護(hù)。HPLC進(jìn)樣裝置與保護(hù)柱之間可設(shè)置在線過濾器，有效避免柱壓過高。此外，必須準(zhǔn)確去除輸液管中的氣泡，以提高測(cè)量精度。在分析過程中，如果建筑管線中出現(xiàn)氣泡，會(huì)影響柱壓的穩(wěn)定性。如果圖集建筑基線的穩(wěn)定性不夠，可能會(huì)形成假峰，影響最終檢驗(yàn)結(jié)論的正確性。

（三）色譜柱及樣品處理

除上述準(zhǔn)備工作外，為了確保測(cè)試結(jié)果正確，還必須進(jìn)行其他準(zhǔn)備工作，如根據(jù)測(cè)試實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境溫度變化了解電流和調(diào)節(jié)電壓波形，確保流動(dòng)性過濾頭、保護(hù)桿、泵墊片、止回閥、比例閥等儀表設(shè)備完好。檢測(cè)前，色譜柱必須充分沖洗，并與色譜柱保持平衡。在沖洗過程中，先用80%純乙腈和高濃度乙醇溶液在30分鐘內(nèi)沖洗，然后用乙腈和高濃度乙醇沖洗約30分鐘，最后通過流動(dòng)相對(duì)色譜柱調(diào)整平衡，使其達(dá)到基線穩(wěn)定狀態(tài)。樣品必須嚴(yán)格按照相關(guān)規(guī)范進(jìn)行處理。一旦樣品處理不合格，可能會(huì)產(chǎn)生與待測(cè)組分結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)組分，或未完全分離，最終檢驗(yàn)結(jié)論較高，或未完全分離純化，導(dǎo)致最后檢驗(yàn)結(jié)論偏低。因此，在樣品處理中，必須嚴(yán)格遵循有關(guān)規(guī)范規(guī)定，并合理調(diào)節(jié)樣品處理的溫度、時(shí)間，包括試劑添加的數(shù)量和方法等，而對(duì)平行樣的處理也應(yīng)該嚴(yán)格依照相同要求進(jìn)行[3]。

三、嚴(yán)格規(guī)范樣品的分析過程

（一）定性分析過程

定性分析法步驟比較簡(jiǎn)單，是利用對(duì)同種試樣的加標(biāo)實(shí)現(xiàn)。選取不含待測(cè)組分的同種試樣，將相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)試樣加入，比較各試樣的保存時(shí)間，進(jìn)行定性分析技術(shù)測(cè)量。如果儲(chǔ)存時(shí)間相同，則將與樣品中待測(cè)組分濃度相同的等體積標(biāo)準(zhǔn)溶液放入待測(cè)樣品中進(jìn)行定量分析。如果加標(biāo)樣品中待測(cè)成分存在交叉峰，則應(yīng)排除待測(cè)成分的可能性。如果假設(shè)加標(biāo)樣品中待測(cè)成分沒有交叉峰，則使用標(biāo)準(zhǔn)HPLC溶液對(duì)測(cè)組分標(biāo)樣、樣品、溶液濃度進(jìn)行測(cè)定，并經(jīng)過混合計(jì)算，如果得出結(jié)果顯示存在著相同的溶液濃度，則確認(rèn)其為待測(cè)組分，如果結(jié)果差異很大，則沒有待測(cè)組分。

（二）定量分析過程

在特定條件下，可通過添加相同體積的標(biāo)準(zhǔn)樣品獲得相應(yīng)的聲應(yīng)力值。繪制響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)樣品含量的校正曲線。然后對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行測(cè)試，利用校正曲線找出對(duì)應(yīng)待測(cè)組分響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)組分濃度范圍。如果在測(cè)定過程中，待測(cè)組的含量低于或低于檢測(cè)限，則使用標(biāo)準(zhǔn)方法未完成的濃度，并篩選出結(jié)果。如果可以濃縮，則應(yīng)在濃縮后進(jìn)行試驗(yàn)。如果可以增加取樣容量，則應(yīng)在擴(kuò)展后進(jìn)行試驗(yàn)。如果待測(cè)成分的含量高于校準(zhǔn)曲線的上限，則應(yīng)在適當(dāng)稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)。因此，在檢測(cè)苯甲酸、糖精鈉和山梨酸的過程中，苯甲酸的檢測(cè)可能會(huì)出現(xiàn)乙?；前贩澹摎湟宜岬姆蹇赡軙?huì)出現(xiàn)在糖精鈉的前面。

四、結(jié)語(yǔ)

針對(duì)食品行業(yè)中食用添加劑的測(cè)定，相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)較高，應(yīng)用高效液相色譜儀分析技術(shù)，有較好的定性準(zhǔn)確度、分辨率高、靈敏度好，可應(yīng)用于食品檢驗(yàn)領(lǐng)域。為逐步達(dá)到較高水平的檢驗(yàn)規(guī)范，并進(jìn)一步提高液相色譜法檢驗(yàn)食物中食用添加劑的準(zhǔn)確度，可從檢測(cè)前的準(zhǔn)備工作、取樣與分析步驟、以及檢測(cè)后的數(shù)據(jù)處理等方面著手，以獲得較為精確的檢測(cè)結(jié)論。

參考文獻(xiàn)：

[1]液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑分析[J]. 劉少梅.?現(xiàn)代食品. 2021（11）.

[2]百草枯合成中間體MPC檢測(cè)方法的建立與評(píng)價(jià)[J]. 周浩，溫蘭蘭，張強(qiáng)，劉典典，王佳.?安徽化工. 2021（01）.

[3]提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性的措施[J]. 夏星.?現(xiàn)代食品. 2018（02）.