李春楠，呂經(jīng)緯，蘭 夢，程端端，趙峻璐，張輝

（長春中醫(yī)藥大學(xué)人參科學(xué)研究院，長春 130117）

梔子（Gardenia jasminoidesEllis），又名黃梔子、山梔、紅枝子等。生于丘陵或山坡灌林中，傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。在我國，梔子主產(chǎn)于浙江、福建、江西、湖南、廣東等地。梔子性味苦寒，入心、肺、胃三焦等經(jīng)，具瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒之功，是臨床常見的護(hù)肝利膽之藥，臨床常見復(fù)方有梔子厚樸湯、梔子豉湯等。

梔子是藥食同源的中藥，主要有效成分包括環(huán)烯醚萜類、有機(jī)酸類以及梔子黃色素等，其主要成分梔子苷含量最高。民間常以花茶服用，由于西紅花苷類成分較多，是一種很好的食物色素，其梔子苷的代謝產(chǎn)物京尼平也是很好的染色劑，是常見的紋身染料，應(yīng)用甚是廣泛。但隨著對梔子的深入研究，發(fā)現(xiàn)梔子服用不當(dāng)存在一定風(fēng)險(xiǎn)，會引起中毒。明末《醫(yī)宗必讀》已有指出：“梔子大苦大寒，能損胃伐氣，虛者忌之”[1]，已闡明梔子具有一定毒性須慎用，對損傷臟器進(jìn)行了描述。自古以來何首烏、番瀉葉、大黃等中藥材毒性已被熟知，使用前藥物需經(jīng)過炮制處理或者用量較少。但梔子的不良反應(yīng)是客觀存在的，阻礙了臨床處方中梔子的廣泛使用。本文通過文獻(xiàn)檢索，總結(jié)了梔子的護(hù)肝藥理作用，同時(shí)將梔子肝毒性等不良反應(yīng)進(jìn)行匯總，對其雙重作用進(jìn)行綜述，為今后梔子相關(guān)藥物的臨床合理應(yīng)用提供一定依據(jù)。

1 梔子保肝作用研究

1.1 肝損傷修復(fù)研究 肝臟是人體內(nèi)最大也是新陳代謝最主要的器官，具有解毒作用，在體內(nèi)起著抗氧化、儲存肝糖、分泌蛋白質(zhì)的合成等作用。由于藥物本身或其代謝產(chǎn)物、一些不良的生活習(xí)慣、病原體感染、代謝障礙等會對肝臟造成不同程度的損傷[2]。

研究發(fā)現(xiàn)，梔子及其主要化合物可以對不同肝損傷模型具有很好的修復(fù)作用。Ping Chen 等學(xué)者將梔子的主要化學(xué)成分梔子苷、西紅花苷類及西紅花酸進(jìn)行了CCl4肝損傷模型大鼠的藥理研究，病理觀察發(fā)現(xiàn)這些成分均能提高肝損傷修復(fù)能力，抗氧化、肝功能指標(biāo)上升，說明梔子苷和西紅花酸衍生物均具有保肝作用[3]。此外，梔子生品、炒品、焦品可以降低CCl4造成的急性肝損傷大鼠AST、ALT、LDH 水平，提高SOD水平，表明梔子具有很好的保肝降酶、抗氧化作用，炒品能夠改善生品苦寒之性的缺點(diǎn)[4]。梔子黃色素中西紅花酸也可有效調(diào)節(jié)CCl4肝損傷小鼠血清相關(guān)檢測指標(biāo)，提高谷胱甘肽的濃度和增強(qiáng)谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)肽酶和谷胱甘肽氧化酶的活性，改善微循環(huán)，并能夠促進(jìn)膽汁的分泌和排泄[5]。梔子主要成分梔子苷對大鼠肌注黃曲霉毒素B1 誘導(dǎo)的肝損傷也具有一定的保護(hù)作用，可能是由于梔子苷參與了肝臟組織的防御機(jī)制，增加了GST 活性對AFB1 的解毒作用和介導(dǎo)γ-谷酰胺半胱氨酸合成酶對GSH 的合成，通過增加 AFB1 的新陳代謝來減少AFB1 誘導(dǎo)的非程序 DNA 合成，這可能是梔子發(fā)揮肝保護(hù)的化學(xué)預(yù)防效應(yīng)的機(jī)制之一。除了梔子的常見成分，也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)梔子油可提高酒精所致急性肝損傷小鼠的脂質(zhì)代謝水平，增強(qiáng)了抗氧化酶體系的活力并能抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)及炎性因子相關(guān)表達(dá)[6]。梔子根醇提物也可對CCl4所致急性小鼠ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL 水平有抑制作用，提高肝組織中SOD 活性，減輕肝損傷，能調(diào)節(jié)抗氧化、膽汁酸膽紅素代謝等作用[7]。梔子的藥對配伍更可以有效提高其保肝功效，降低小鼠肝組織氧化應(yīng)激損傷和炎癥反應(yīng)，減輕酒精性肝損傷，有效提高肝組織抗氧化酶活力的升高，降低p-p38MAPK、p-JNK、NF-κB P65 蛋白表達(dá)水平。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究表明梔子保肝作用主要與癌癥途徑、脂質(zhì)與動脈粥樣硬化、乙型肝炎、AGERAGE 信號通路、MAPK 信號通路、PI3K-Akt 信號通路等有關(guān)，表明其保肝作用具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn)。

1.2 抗肝纖維化研究 慢性肝損傷會導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）如α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）在肝臟中積累，隨后導(dǎo)致肝纖維化和后期肝硬化，許多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，梔子對治療肝纖維化也有很好的藥理作用。董玲等[8]學(xué)者利用梔子水提物對CCl4誘導(dǎo)肝纖維化大鼠進(jìn)行了作用研究，除了正常的試劑盒檢測氧化指標(biāo)和病理觀察外，還應(yīng)用免疫組化法檢測發(fā)現(xiàn)肝臟組織中α 平滑肌激動蛋白（α?SMA）及Ⅳ型膠原蛋白（ColⅣ）的蛋白表達(dá)下降，證明了梔子根水提物對肝纖維化大鼠具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與降解細(xì)胞外ECM及抗脂質(zhì)過氧化作用有關(guān)。Ying-Hua Chen等[9]研究發(fā)現(xiàn)梔子可以減輕膽管結(jié)扎大鼠和人肝星狀細(xì)胞的肝細(xì)胞損傷和纖維化，降低轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、I型膠原蛋白（Col I）和α-SMA 的肝臟 mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)，抑制 LX-2 細(xì)胞中TGF-β1誘導(dǎo)的 Smad2 磷酸化。

2 梔子的肝毒性研究

2.1 肝毒性作用 隨著梔子引起中毒的臨床報(bào)道的出現(xiàn)，學(xué)者開始對其毒性展開研究，但圍繞最多的還是針對代謝器官肝臟研究。學(xué)者將梔子主要成分梔子苷分別給藥SD 大鼠、Wistar 大鼠與ICR 小鼠進(jìn)行肝毒性研究比較，首先證明了在高劑量下梔子苷對實(shí)驗(yàn)動物會引起中毒反應(yīng)[10]。此外，楊洪軍等[11]證實(shí)3.08 g/kg 的水提物、1.62 g/kg 的醇提物、0.28 g/kg 梔子苷組均具有明顯的肝臟毒性，表明梔子苷是梔子引起肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。邱賽紅[12]用梔子水提液進(jìn)行小鼠灌胃，最大耐受量（MTD）是 160 g/kg。深入研究發(fā)現(xiàn)，梔子黃色素口服后也會導(dǎo)致腹瀉和丙氨酸轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性的增加[13-14]。王波等[15-17]學(xué)者以不同濃度等級的梔子水提物、醇提物、梔子苷進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，證實(shí)了梔子濃度過大會引起明顯的肝中毒反應(yīng)，但是梔子主要引起肝毒性的成分與作用機(jī)制并不十分明確。

Yamano T[18]認(rèn)為梔子苷到京尼平的轉(zhuǎn)化與梔子的肝毒性相關(guān)，而且肝臟的非巰基蛋白在調(diào)節(jié)毒性方面起重要作用。任艷青、王坤等[19-21]通過大鼠肝組織病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，梔子苷及梔子組大鼠肝發(fā)生病變，HE 染色可見肝細(xì)胞水腫明顯，并伴有大量細(xì)胞壞死，細(xì)胞間質(zhì)呈現(xiàn)明顯的淋巴細(xì)胞浸潤；對藥物肝毒性篩選模型 HepG2 細(xì)胞檢測發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞存活率、Mn-SOD活性顯著下降、活性氧（ROS）及丙二醛（MDA）含量均顯著上升，并初探了梔子的配伍減毒的機(jī)制。王清然等[22]研究了梔子肝毒性時(shí)效性，大鼠灌胃給藥梔子水提物低、中、高（3、10、30 g）劑量后，分別在給藥7、14、28 d 后采血，測定大鼠堿性磷酸酶（ALP）、谷氨酸脫氫酶（GLDH）活性以及總膽汁酸（TBA）和總膽紅素（TBIL）的含量并觀察肝臟組織病理學(xué)改變，結(jié)果血清中ALT、AST、ALP、TBA、TBIL、GLDH有升高，中、高劑量組顯著增高，而14、28 d 中的血清指標(biāo)均顯著增高，表明大鼠重復(fù)灌胃梔子水提物引起肝臟的毒性隨劑量增加而增加。

2.2 機(jī)制作用研究 雖然現(xiàn)已通過病理等手段證實(shí)，梔子存在一定肝毒性，不過毒性機(jī)制研究較少。田婧卓等[23]對梔子苷引起的大鼠肝毒性進(jìn)行作用機(jī)制研究，PCR 的結(jié)果顯示與對照組相比梔子苷高劑量組FXR、NTCP 和BSEP 的mRNA 表達(dá)顯著降低，梔子苷的中、低劑量組與對照組相比總膽紅素顯著降低，Mrp2 的mRNA 表達(dá)顯著升高，其作用機(jī)制可能是通過抑制FXR 的表達(dá)，進(jìn)而抑制NTCP 和BSEP 的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)的。此外梔子苷在中、低劑量下可能通過促進(jìn)Mrp2 的表達(dá)，增加了肝臟中總膽紅素排泄。周淑娟等[24]對給藥梔子苷后的大鼠肝臟微粒體中CYP3A2酶活性進(jìn)行研究，闡明了大鼠肝臟中的重要藥物代謝酶CYP3A2 的表達(dá)較高，認(rèn)為梔子存在基于藥物代謝酶機(jī)制方面的肝毒性作用。王坤等[20]對灌胃梔子大鼠的肝組織測定超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性顯著降低，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量顯著升高；TUNEL 法測肝組織中細(xì)胞凋亡、免疫組化法測肝組織中凋亡相關(guān)蛋白Bax，Bcl-2 的表達(dá)，結(jié)果顯示累積吸光度，凋亡指數(shù)，Bax，Bax/Bcl-2 顯著升高，證明了梔子引起肝中毒。另外，以大鼠為研究對象，學(xué)者考察了給藥后大鼠的血清樣本，通過UPLC-MS 檢測，主成分分析（PCA）結(jié)合正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）等方法進(jìn)行代謝差異表征研究，找到差異代謝物及可能的代謝通路，結(jié)果發(fā)現(xiàn)組間代謝差異明顯，鑒定出11 個(gè)差異代謝物，其機(jī)制可能與葡萄糖、尿苷、肌苷、溶血磷脂酰膽堿下降有關(guān)。

2.3 動力學(xué)研究 針對京尼平苷在大鼠體內(nèi)的毒性余丹等[25-26]進(jìn)行了動力學(xué)研究，采用單次灌胃京尼平苷正常劑量（60 mg/mL）與毒性劑量（580、700、870 mg/mL）后，建立了LC-MS/MS 法測血漿、組織中京尼平苷和京尼平的濃度，得出毒性劑量下京尼平苷主要分布于腎中，而京尼平主要分布于肝中，并且隨著劑量的增大，二者集中分布于腎或肝的特點(diǎn)更加明顯。

3 梔子的其他毒性研究

相對于肝毒性，梔子及其成分引起的其他組織毒性研究較少，但也有學(xué)者已經(jīng)對其腎毒性進(jìn)行了深入研究。王波等[15]考察了梔子水提物、醇提物、梔子苷的腎臟病理學(xué)特征，發(fā)現(xiàn)高劑量濃度可導(dǎo)致大鼠腎臟指數(shù)升高，腎曲管不同等度腫脹，腎腔內(nèi)可見粉紅色物質(zhì)沉積，部分曲管壞死，失去正常組織，集合管內(nèi)有蛋白性物質(zhì)滲出，兼有大量淋巴細(xì)胞浸潤。馮筱懿[21]分析發(fā)現(xiàn)梔子可引起大鼠的腎臟損傷因子（KIM-1），中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（NGAL）顯著升高，血液檢測尿素氮（BUN）和肌酐（CRE）也升高[27]。另外，長期給藥腎毒性研究均可下調(diào)Oat1 和Oat3 的mRNA 和蛋白表達(dá)，上調(diào)NGAL、Timp-1、CLUSTERIN mRNA 表達(dá)，增加腎臟基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子Timp-1 的表達(dá)，可能在一定程度上影響了細(xì)胞外基質(zhì)的合成與降解，從而對腎臟造成一定的影響[28]。學(xué)者還利用胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)、大鼠植入后全胚胎培養(yǎng)試驗(yàn)和微團(tuán)培養(yǎng)試驗(yàn)評價(jià)梔子的胚胎發(fā)育毒性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)梔子黃色素可引起胚胎發(fā)育毒性，并經(jīng)全胚胎培養(yǎng)預(yù)測模型評價(jià)梔子黃色素為無胚胎早期發(fā)育毒性化學(xué)物。

4 小結(jié)與展望

梔子是藥食同源中藥，作為保健養(yǎng)生常用藥，存在一定風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)該值得注意?？偨Y(jié)發(fā)現(xiàn)，梔子的護(hù)肝利膽等藥理作用是顯著的，臨床也常以復(fù)方形式發(fā)揮療效，通過配伍可有效降低其單一中藥引起的不良反應(yīng)，但是藥三分毒，需合理規(guī)范應(yīng)用。目前，對梔子的毒性成分、劑量和引起肝、腎毒性及其他毒性的機(jī)制研究還不夠深入，提示我們其肝毒性的劑量還未明確，建議臨床應(yīng)用要遵循《中國藥典》規(guī)定劑量，且不宜長期服用。隨著現(xiàn)代系統(tǒng)觀和整體論的引入，基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)以及網(wǎng)絡(luò)毒理學(xué)等新方法，都可以應(yīng)用于中藥毒性標(biāo)志物挖掘和毒性預(yù)警等方面[29]，如何在保證梔子藥理活性的基礎(chǔ)上，避免或者減輕毒性作用，合理開發(fā)梔子產(chǎn)品值得進(jìn)一步研究。