朱曼，郭曉鋒，魏昕，周福有

［安陽市腫瘤醫(yī)院（河南科技大學(xué)第四附屬醫(yī)院）1.檢驗科；2.胸外科，河南 安陽455000］

食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一，河南省安陽地區(qū)是食管鱗癌的高發(fā)區(qū)［1］，食管鱗癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）嚴(yán)重威脅著當(dāng)?shù)厝嗣竦纳】?。近年來，食管鱗癌的診療手段不斷革新，胃鏡和病理檢查能為腫瘤的診斷提供強有力的依據(jù)，但是仍有相當(dāng)一部分患者抵觸胃鏡檢查，延誤病情，就診時已錯過最佳診療時機。血液腫瘤標(biāo)志物作為一種補充手段，創(chuàng)傷小，更容易被患者接受，可以為臨床醫(yī)生診斷腫瘤和治療療效、預(yù)后判斷提供依據(jù)。因此，發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標(biāo)志物和挖掘其新用途勢在必行。本文將現(xiàn)階段研究熱點人類可溶性程序性死亡配體-1（soluble programmed death ligand-1，sPD-L1）和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）相結(jié)合，探究其對ESCC 預(yù)后的評估價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016 年11 月至2017 年2 月安陽市腫瘤醫(yī)院經(jīng)術(shù)后病理確診為ESCC 的患者105 例，其中男71 例，女34 例；年齡60～70，平均（64.50±5.57）歲。另選健康體檢者35 例作為對照，其中男31 例，女4 例；年齡60～70，平均（65.77±5.58）歲。ESCC 組患者TNM 分期參照UICC/AJCC 2017 年第八版食管癌TNM 分期標(biāo)準(zhǔn)［2］，其中Ⅰ+Ⅱ期49 例，Ⅲ+Ⅳ期56 例；有家族史者49例，無家族史者56 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者53 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者52 例；腫瘤直徑＜3.5 cm 者42例，腫瘤直徑≥3.5 cm 者63 例。所有研究對象均排除內(nèi)分泌、免疫及代謝疾病。

對所有患者采用電話和門診的方式隨訪，所有患者術(shù)后1 個月、3 個月、半年各隨訪一次，之后半年隨訪一次，隨訪截止日期2020 年4 月，生存時間按“個月”計算。

本實驗經(jīng)安陽市腫瘤醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準(zhǔn)，所有研究對象知曉實驗內(nèi)容，并簽署受試者知情同意書。

1.2 方法

采集受試者治療前空腹靜脈血3 mL，室溫靜置30 min，離心分離血清后檢測。sPD-L1 和VEGF 均采用酶標(biāo)測定儀（LabSystems Multiskan MS-352，芬蘭雷勃公司）檢測。sPD-L1 試劑由上海喬羽生物科技有限公司提供，VEGF 試劑由北京健平金星生物科技有限公司提供。所有操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及圖表制作。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩兩比較采用t檢驗；計數(shù)資料以百分率（%）表示，比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析三指標(biāo)對ESCC 患者長期死亡率的預(yù)測價值。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ESCC 組、正常對照兩組血清sPD-L1、VEGF 水平比較

ESCC 組血清sPD-L1、VEGF 的水平與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 ESCC 組、正常對照兩組血清sPD-L1、VEGF 水平比較（±s，pg/mL）

表1 ESCC 組、正常對照兩組血清sPD-L1、VEGF 水平比較（±s，pg/mL）

2.2 患者臨床病理學(xué)特征與血清sPD-L1、VEGF水平的關(guān)系

按性別、年齡、TNM 分期及腫瘤直徑分組，患者血清sPD-L1、VEGF 水平的比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。有家族史的患者的血清VEGF的水平高于沒有家族史的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清sPD-L1、VEGF 的水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 血清sPD-L1、VEGF 水平與患者生存時間的關(guān)系

生存時間＜3 年的患者有46 例，生存時間＞3 年的患者有59 例，三年生存率為56.19%。生存時間＜3 年的患者的血清sPD-L1、VEGF 水平高于生存時間＞3 年的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 血清sPD-L1、VEGF 預(yù)測ESCC 患者3 年內(nèi)死亡的ROC 曲線

ROC 曲線結(jié)果顯示，血清sPD-L1、VEGF 預(yù)測ESCC 患者3 年內(nèi)死亡的AUC 分別為0.820、0.733，兩者聯(lián)合預(yù)測3 年內(nèi)死亡的曲線下面積（AUC）為0.842。其敏感性為84.7%，特異性為78.3%。見圖1。

表2 患者臨床病理學(xué)特征與血清sPD-L1、VEGF 水平的關(guān)系（±s，pg/mL）

表2 患者臨床病理學(xué)特征與血清sPD-L1、VEGF 水平的關(guān)系（±s，pg/mL）

表3 血清sPD-L1、VEGF 水平與患者生存時間的關(guān)系（±s，pg/mL）

表3 血清sPD-L1、VEGF 水平與患者生存時間的關(guān)系（±s，pg/mL）

圖1 血清sPD-L1、VEGF 預(yù)測ESCC 患者3 年內(nèi)死亡的ROC 曲線

3 討論

食管鱗癌是一種預(yù)后較差的惡性腫瘤，其5 年相對生存率為20.9%，1 年、3 年和5 年觀察生存率分別為54.0%、25.5%和18.4%［3］。近些年由于生活水平的提高，食管鱗癌的發(fā)病率有下降趨勢［4］，但依然是威脅人類健康的惡性因素。目前治療食管鱗癌的方式以手術(shù)為主［5］，放化療輔助?，F(xiàn)階段的研究仍未找到食管鱗癌的敏感靶點，免疫治療舉步維艱。

PD-1/PD-L1 通路是現(xiàn)階段的研究熱點，腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)PD-L1 與T 細(xì)胞表面表達(dá)的PD-1相結(jié)合，阻礙T 細(xì)胞的分化，使T 細(xì)胞停留在G0期，失去了殺傷腫瘤細(xì)胞的功效，從而導(dǎo)致腫瘤的免疫逃逸。PD-L1 在體內(nèi)免疫系統(tǒng)中不光以細(xì)胞膜型（mPD-L1）的形式存在，還有可溶性（sPD-L1）的形式存在［6］。CHEN 等［7］研究發(fā)現(xiàn)，血清sPD-L1的水平與組織中mPD-L1 的表達(dá)強度正相關(guān)。施敏驊等［8］發(fā)現(xiàn)mPD-L1 和sPD-L1 有相似的生物學(xué)功能，并且都能與T 細(xì)胞表面PD-1 受體結(jié)合，負(fù)向調(diào)控免疫系統(tǒng)。sPD-L1 相較于mPD-L1 取材方便，更容易在臨床作為一項腫瘤標(biāo)志物開展?，F(xiàn)階段研究報道，sPD-L1 與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、治療療效和預(yù)后相關(guān)［9-13］。

在實體腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中，VEGF 發(fā)揮重要作用。VEGF 是垂體濾泡細(xì)胞分泌的糖蛋白［14］，能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和新血管形成，同時還可以改變細(xì)胞外基質(zhì)［15］，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。近年來，血清VEGF 的檢測在臨床上廣泛開展，其在腫瘤的療效判斷和預(yù)后方面具有舉足輕重的作用。

本研究結(jié)果顯示，ESCC 組血清sPD-L1、VEGF 的水平明顯高于正常對照組，這和食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，在腫瘤病灶的長期慢性刺激下，腫瘤細(xì)胞或宿主對腫瘤的刺激可合成和分泌特異性蛋白或相關(guān)的因子，這些蛋白或因子的水平檢測在腫瘤的診斷、治療和預(yù)后判斷上提供輔助信息。有家族史的患者血清VEGF 的水平高于無家族史的患者（P＜0.05），說明VEGF 可能在ESCC 的基因?qū)W研究上有一定的價值。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清sPD-L1、VEGF 的水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明兩個指標(biāo)參與了腫瘤的進(jìn)展過程，是ESCC 潛在的治療相關(guān)的生物標(biāo)志物。生存時間＜3 年的患者為46例，生存時間＞3 年的患者為59 例，三年生存率為56.19%，和其他學(xué)者的研究報道［16-17］基本相符。生存時間＜3 年的患者的血清sPD-L1、VEGF 水平高于生存時間＞3 年的患者（P＜0.05）。ROC 曲線結(jié)果顯示，血清sPD-L1、VEGF 聯(lián)合預(yù)測3 年內(nèi)死亡可能性的價值優(yōu)于單一預(yù)測，表示這兩項指標(biāo)可以為臨床醫(yī)生判斷預(yù)后提供參考依據(jù)。

綜上所述，血清sPD-L1、VEGF 可以作為食管鱗癌預(yù)后判斷的參考依據(jù)。但本研究仍舊存在不足之處，主要有以下三點：①本研究是單中心研究，其研究結(jié)果需要多中心驗證；②樣本量較少，需要進(jìn)一步擴大樣本量來證實實驗結(jié)果；③現(xiàn)階段這兩項指標(biāo)的檢測方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法，該方法的干擾因素較多，可能會使實驗結(jié)果產(chǎn)生誤差，隨著研究深入和技術(shù)革新，發(fā)現(xiàn)更精確的檢測方法可以進(jìn)一步驗證本研究的結(jié)果。