林明星，余見棟

(平陽縣畜牧獸醫(yī)管理中心，浙江 平陽 325400)

鴿新城疫又稱鴿瘟或鴿I型副黏病毒(PPMV-I)病，是一種由禽I型副黏病毒引起的、流行于鴿群的高度接觸性急性傳染病，且普遍存在于各種鴿群(肉鴿、信鴿和賽鴿)中[1]。該病主要以腸炎、嚴(yán)重腹瀉和神經(jīng)癥狀為特征，傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高，常給鴿場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。由于鴿屬珍稀家禽，市場(chǎng)對(duì)鴿專用的鴿副黏病毒疫苗需求量較少，鴿I型副黏病毒與雞新城疫病毒同為副黏病毒，有相似的免疫原性。據(jù)楊秀環(huán)等[3]報(bào)道，用雞的新城疫弱毒疫苗和滅活疫苗對(duì)鴿進(jìn)行免疫，可有效地預(yù)防和控制鴿新城疫的感染和傳播。生產(chǎn)上常借用雞新城疫疫苗進(jìn)行免疫預(yù)防。大量研究和實(shí)踐證明，疫苗的免疫接種可有效地預(yù)防和控制疾病的發(fā)生與流行，但有關(guān)鴿體對(duì)這些疫苗的免疫相關(guān)研究報(bào)道較少。為探討不同類型雞新城疫疫苗對(duì)種鴿的免疫效果和抗體消漲情況，我們開展了不同類型雞新城疫疫苗對(duì)種鴿免疫效果的試驗(yàn)，免疫后定期檢測(cè)其血清抗體的效價(jià)，了解血清抗體消長規(guī)律及其相互關(guān)系，以期為鴿場(chǎng)選擇和使用新城疫疫苗時(shí)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

試驗(yàn)鴿為570 d齡、臨床健康、公母配對(duì)的美國白羽王鴿高代雜交種，共320對(duì)(640羽)。

1.1.2 疫苗

雞新城疫I系活疫苗、雞新城疫L系活疫苗購自哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司；雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)油乳滅活疫苗購自青島易邦生物工程有限公司。

1.1.3 試劑

血凝抑制試驗(yàn)用雞新城疫病毒抗原及標(biāo)準(zhǔn)陽性血清購自青島易邦生物工程有限公司，經(jīng)HA試驗(yàn)檢測(cè)效價(jià)后，配成4個(gè)血凝單位抗原備用；紅細(xì)胞懸液按常規(guī)方法制備，用PBS配成1%雞紅細(xì)胞懸液，4 ℃保存?zhèn)溆茫话⑹弦?、磷酸鹽緩沖液(PBS)，按相關(guān)方法自行配制，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4 儀器設(shè)備

96孔V型微量板、微量移液器(配滴頭，規(guī)格為10、100、200 μL等)、微型振蕩器、溫箱等。

1.2 方法

1.2.1 分組及免疫

種鴿采血檢測(cè)其新城疫原有抗體水平后，將整個(gè)實(shí)驗(yàn)鴿群分成5組，每組128只，每對(duì)1籠，共16個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4對(duì)，常規(guī)飼養(yǎng)。A組采用雞新城疫I系活疫苗1倍劑量肌注免疫1次；B組采用雞新城疫L系活疫苗4倍劑量肌注免疫1次；C組采用雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)油乳滅活疫苗0.4 mL肌注免疫1次；D組采用雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)油乳滅活疫苗0.4 mL肌注免疫，隔21 d加強(qiáng)免疫1次；E組生理鹽水1 mL肌注免疫一次，作為對(duì)照。

1.2.2 樣品收集

兩組試驗(yàn)鴿于免疫后第1周、第2周、第3周、第4周、第5周、第7周、第11周、第15周、第19周、第23周、第31周分別進(jìn)行翅下靜脈采血，每組抽樣不少于12羽，每羽采血1～2 mL，血液樣品于室溫放置30 min后，再置4 ℃冰箱中30 min，室溫下4 000 r·min-1離心5 min，收集上清液于一新EP管中。

1.2.3 檢測(cè)方法

新城疫免疫抗體檢測(cè)按照《新城疫診斷技術(shù)》(GB/T 16550—2008)規(guī)范進(jìn)行，采用血凝(HA)試驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)抗原的血凝價(jià)，制備4單位抗原并驗(yàn)證，采用血凝抑制(HI)試驗(yàn)檢測(cè)血清樣品的新城疫抗體效價(jià)，每次檢測(cè)的抗體效價(jià)以log2值表示。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

新城疫抗體效價(jià)≥5 log2判定為免疫合格，利用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和合格率等統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

免疫前各組的HI抗體滴度平均值為1.67 log2，使用不同的雞新城疫疫苗對(duì)種鴿進(jìn)行免疫后各組種鴿產(chǎn)生的新城疫抗體滴度從3 log2到9 log2不等，對(duì)照組抗體滴度在0.44 log2～1.25 log2。免疫后第1周上升最快的是A組，其HI抗體滴度平均值為6.17 log2；抗體滴度峰值最高的是D組，其HI抗體滴度平均值為9.63 log2(圖1)。

圖1 各組新城疫抗體消漲情況

A組經(jīng)雞新城疫I系活疫苗單次免疫后，相應(yīng)的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為6.17 log2、6.81 log2、7.44 log2、5.94 log2、6.31 log2、5.94 log2、5.69 log2、4.88 log2、4.56 log2、5.06 log2、4.56 log2，其中抗體合格率在第1周至第15周達(dá)到75%以上，結(jié)果顯示，A組試驗(yàn)種鴿在免疫1周后，新城疫抗體水平顯著上升，至第15周抗體滴度平均值降至免疫合格線(5 log2)以下，同時(shí)抗體合格率在第19周開始小于70%，免疫抗體保護(hù)期約80 d。

B組經(jīng)雞新城疫L系活疫苗單次免疫后，相應(yīng)的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為3.17 log2、5.19 log2、5.50 log2、5.56 log2、5.88 log2、4.75 log2、5.50 log2、4.38 log2、4.31 log2、4.75 log2、3.25 log2，其中抗體合格率僅在第5周達(dá)到75%，結(jié)果顯示，B組試驗(yàn)種鴿在免疫1周后，新城疫抗體水平有所上升，但上升幅度小且免疫合格率低，免疫抗體保護(hù)期約28 d。

C組經(jīng)雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)油乳滅活疫苗單次免疫后，相應(yīng)的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為5.33 log2、9.29 log2、9.13 log2、9.00 log2、8.65 log2、8.19 log2、7.94 log2、7.19 log2、6.38 log2、6.31 log2、6.14 log2，其中抗體合格率在第1周達(dá)到75%，其后抗體合格率保持在86%以上，結(jié)果顯示，C組試驗(yàn)種鴿在免疫1周后，新城疫抗體水平顯著上升，至第31周抗體滴度平均值仍在免疫合格線(5 log2)以上，免疫抗體保護(hù)期長達(dá)220 d，且均勻度佳。

D組經(jīng)雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)油乳滅活疫苗二次免疫后，相應(yīng)的HI抗體滴度在第1、2、3、4、5、7、11、15、19、23和31周平均值分別為5.17 log2、9.00 log2、8.56 log2、9.00 log2、9.63 log2、9.19 log2、8.75 log2、7.92 log2、8.00 log2、7.43 log2、7.17 log2，其中抗體合格率在第1周達(dá)到67%，其后抗體合格率保持在92%以上，抗體在免疫后第2周首次達(dá)峰值9.00 log2，21 d加強(qiáng)免疫后有所下降，在第5周激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生更高抗體水平再次達(dá)峰值9.63 log2，結(jié)果顯示D組試驗(yàn)種鴿在免疫一周后，新城疫抗體水平顯著上升，至第31周抗體滴度平均值仍在7 log2以上，免疫抗體保護(hù)期長達(dá)220 d，且均勻度佳。

3 小結(jié)與討論

本研究使用不同的雞新城疫疫苗對(duì)種鴿群進(jìn)行免疫試驗(yàn)，免疫后7 d各免疫組均產(chǎn)生抗體，A、B組使用活疫苗免疫，抗體在免疫后第3～5周達(dá)峰值分別為7.44 log2、5.88 log2，C、D組使用滅活疫苗免疫，抗體在免疫后第2～5周達(dá)峰值分別為9.29 log2、9.63 log2，對(duì)照組抗體水平在原有水平上略下降。通過分析免疫抗體水平可知，在試驗(yàn)中鴿體對(duì)不同的雞新城疫疫苗具有免疫反應(yīng)，表明雞新城疫疫苗能誘導(dǎo)出鴿體的新城疫免疫抗體，這與研究相符[4]。滅活疫苗免疫的C、D組產(chǎn)生抗體的峰值明顯高于使用活疫苗免疫的A、B組，且維持的時(shí)間更久，表現(xiàn)出良好的抗原性和免疫效果。

A組經(jīng)雞新城疫I系活疫苗免疫后7 d免疫抗體水平達(dá)到6.17 log2，與B組的3.17 log2、C組的5.53 log2、D組的5.17 log2相比上升最快，同時(shí)抗體水平下降也快，這與高琳等[5]研究中不同雞新城疫疫苗免疫效果對(duì)比試驗(yàn)中接種I系疫苗的雞抗體水平上升最快，但達(dá)到峰值后下降也最快的結(jié)果一致，表明雞新城疫活疫苗I系比較適用于緊急免疫。

江斌等[6]研究表明，鴿群?jiǎn)为?dú)使用雞新城疫L系活疫苗免疫兩次的效果較首次免疫使用雞新城疫L系活疫苗第二次免疫使用雞新支流三聯(lián)滅活疫苗的效果差，其HI抗體滴度峰值僅為5.1 log2；呂艷秋等[7]研究中，鴿群使用雞新城疫L系活疫苗滴鼻點(diǎn)眼免疫兩次后，其新城疫抗體水平有所升高，但不足于達(dá)到對(duì)鴿群的有效保護(hù)。同時(shí)柳曉峰等[8-9]研究發(fā)現(xiàn)，使用新城疫L系活疫苗免疫雞將加重或誘發(fā)I群血清4型禽腺病毒、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病毒的致病作用，而在鴿群中使用雞新城疫L系活疫苗是否加重或誘發(fā)此類垂直傳播性病毒的致病作用還有待研究。試驗(yàn)中B組使用雞新城疫L系活疫苗免疫后在各組中免疫抗體上升最慢且峰值最低，僅達(dá)到5.88 log2，抗體合格率僅在第5周達(dá)到70%以上。據(jù)以上研究，不建議在鴿群中單獨(dú)使用雞新城疫L系活疫苗進(jìn)行免疫。

C、D組使用二聯(lián)油乳滅活疫苗免疫，C組新城疫抗體在免疫后第2周首次達(dá)峰值9.29 log2；D組新城疫抗體在免疫后第2周首次達(dá)峰值9.00 log2，21 d加強(qiáng)免疫后抗體滴度有所下降，在第5周激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生更高抗體水平再次達(dá)峰值9.63 log2，這與鄒永新等[10]研究的結(jié)果一致。滅活疫苗在第二次免疫和第三次免疫后7 d抗體滴度發(fā)生不同程度的下降，這可能與進(jìn)入機(jī)體內(nèi)的疫苗抗原與機(jī)體血清中原有抗體發(fā)生部分中和反應(yīng)有關(guān)，14 d后抗體滴度迅速回升，是由于機(jī)體免疫記憶細(xì)胞的作用使抗體水平能在短時(shí)間內(nèi)迅速上升，并達(dá)到更高水平且維持更長時(shí)間。試驗(yàn)中接種二聯(lián)油乳滅活疫苗的種鴿抗體水平能達(dá)到更高水平且在達(dá)到峰值后能夠在較高的抗體水平維持更長時(shí)間，表明二聯(lián)油乳滅活疫苗較適于日常的預(yù)防接種。

有研究顯示，使用雞新城疫活疫苗免疫鴿易因種間差異、個(gè)體、日齡和疫苗毒力等造成免疫不穩(wěn)定[11]。針對(duì)種鴿存欄期長、雛鴿自然孵化需哺喂、同舍乳鴿日齡差異大、乳鴿母源抗體參差不齊等現(xiàn)狀，同時(shí)乳鴿免疫接種活疫苗其免疫效果易受母源抗體影響，而應(yīng)用滅活疫苗受影響較小。同時(shí)鴿場(chǎng)一旦使用弱毒疫苗，易發(fā)生病毒擴(kuò)散，導(dǎo)致鴿場(chǎng)疾病遷延不斷。根據(jù)本試驗(yàn)對(duì)鴿場(chǎng)使用滅活疫苗的免疫效果監(jiān)測(cè)分析表明，滅活疫苗免疫后，抗體效價(jià)高、合格率高、整齊度好、免疫保護(hù)期長，試驗(yàn)中運(yùn)用的雞新城疫、禽流感二聯(lián)油乳滅活疫苗為成熟的滅活疫苗[12]，對(duì)鴿安全穩(wěn)定，具有無病毒擴(kuò)散、不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)，有利于鴿場(chǎng)新城疫疫病的凈化，適于養(yǎng)鴿場(chǎng)推廣應(yīng)用。結(jié)合雞新城疫、禽流感(H9亞型)二聯(lián)油乳滅活疫苗免疫后備鴿抗體水平研究，建議鴿場(chǎng)在實(shí)際生產(chǎn)中，后備鴿及首次產(chǎn)蛋成鴿(60～180 d齡)采用“二次免疫法”；1 a及以上成鴿可以采用“單次免疫法”，每年免疫1次。