周杰， 方英玉， 尹秀梅， 王思宏

(1.延邊大學(xué) 分析測試中心， 吉林 延吉 133002； 2.延邊大學(xué) 藥學(xué)院， 吉林 延吉 133002)

龍牙草(AgrimoniapilosaLedeb)為薔薇科多年生草本植物，又稱金頂龍牙、地仙草、仙鶴草、石打穿、瓜香草等.龍牙草入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，主要用于治療止血、咯血、尿血、便血、崩漏等多種出血癥以及赤白痢疾、勞傷脫力等病癥[1-3].研究顯示：龍牙草中含有黃酮苷類、三萜類、異香豆素和木質(zhì)素等成分[4-6]，具有抗炎、抗氧化、抗菌和抗病毒等多種藥理作用[7-9].另外，龍牙草也是一種食用野菜，具有強化人體免疫能力的功效[10-12].2022年Lee等研究顯示，龍牙草乙醇提取物的抗原蟲選擇指數(shù)(3.35)高于磺胺嘧啶(2.08)[13]，該研究表明龍牙草具有良好的抗寄生蟲作用.為了探討龍牙草(全草)在石油醚中的溶解成分以及開發(fā)利用龍牙草，本文對延邊產(chǎn)龍牙草石油醚提取物中的成分進(jìn)行了研究.

1 試劑與儀器

1.1 試劑與藥材

正己烷(色譜純)， Merck公司生產(chǎn)； 0.45 μL微孔濾膜、石油醚(60～90 ℃)，麥克林試劑公司生產(chǎn)；無水碳酸鈉(分析純)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；龍牙草(采自吉林省延邊大學(xué)藥草園)，經(jīng)延邊大學(xué)藥學(xué)院呂惠子教授鑒定.

1.2 儀器

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(6890N -5937)，安捷倫科技有限公司生產(chǎn)；微型注射器(100 μL)，Hamilton公司生產(chǎn)；超純水機(Milli -Q系列)，Millipore公司生產(chǎn)；低溫冷卻液循環(huán)泵，上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)；索式提取器，上海熙揚儀器有限公司生產(chǎn)； RV -3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，艾卡儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)； DZF -1真空干燥箱，北京永光明醫(yī)療儀器有限公司生產(chǎn)； WJX -A500高速多功能粉碎機，上海緣沃工貿(mào)有限公司生產(chǎn)； AL204 -IC電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn).

2 方法

2.1 龍牙草石油醚提取物的制備

龍牙草曬干后粉碎，過0.15 mm篩.稱取100 g粉末置于索式提取器中，加入400 mL石油醚后置于電熱套中(保持石油醚微沸5 h).共收集石油醚提取物3.20 g，并將提取物用正己烷定容于5 mL的容量瓶中；搖勻后過0.45 μL微孔濾膜，所得溶液用于GC -MS分析.

2.2 檢測分析條件

氣相色譜條件：HP -5MS石英毛細(xì)管柱(0.25 μm×0.25 mm×30 m)，載氣為氦氣，流速為1 mL·min-1，進(jìn)樣口溫度為280 ℃，分流進(jìn)樣(分流比為50∶1).

程序升溫條件： 40 ℃保持2 min，再以10 ℃·min-1升溫至300 ℃(保持15 min).

質(zhì)譜條件：離子源為EI源，電子能量為70 eV，離子溫度為230 ℃，四級桿溫度為150 ℃，倍增管電壓為1.6 kV，掃描質(zhì)量范圍為m/z35～550.

3 結(jié)果與分析

經(jīng)計算得龍牙草石油醚提取物的收率為3.20%.圖1為龍牙草石油醚提取物的總離子流色譜圖.由圖1可以看出：色譜峰集中出現(xiàn)在30.00～45.00 min和55.00～65.00 min 2個時間段；在GC -MS聯(lián)用技術(shù)色譜圖中出現(xiàn)了35個較強的色譜峰.將質(zhì)譜掃描圖中的各峰與美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院(National Institute of Standards and Technology，NTST)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行對照后確定了其中27個成分的結(jié)構(gòu)信息.

上述確定的27個成分的結(jié)構(gòu)式見圖2.綜合比較各成分的結(jié)構(gòu)式可以發(fā)現(xiàn)，其成分主要為烴類、醇類、酸類、酯類、甾類及酮類化合物.其中：烴類化合物有7個(其中3個為大于30個碳的單鏈烷烴)，醇類化合物有5個，酸類化合物有2個，酯類化合物有6個，甾類化合物有3個，酮類化合物有4個.

圖1 龍牙草石油醚提取物的總離子流色譜圖

依據(jù)GC -MS聯(lián)用技術(shù)，采用峰面積歸一化法計算的27個成分的相對百分含量見表1.由表1可知： 27個成分占龍牙草總成分的45.28%，相對含量大于3%的有4種，大于2%的有2種；相對含量最多的種類是酯類化合物，其次是烴類和醇類化合物，分別占總石油醚提取物的11.43%、10.63%和7.84%； 相對含量最多的成分是環(huán)[3,5,7]癸烷 -1-羧酸辛酯(占總石油醚提取物的6.42%，保留時間為40.43 min)，其次為膽酸乙酯(占總石油醚提取物的3.87%，保留時間為59.37 min).

將本文研究結(jié)果與文獻(xiàn)[14-15]中的研究結(jié)果進(jìn)行對比可知，不同產(chǎn)地的龍牙草其化學(xué)揮發(fā)成分存在顯著差異.其中文獻(xiàn)[14]的作者利用GC -MS聯(lián)用技術(shù)對安徽亳州產(chǎn)龍牙草中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析顯示，其相對百分含量較多的成分是6 -10 -14-三甲基 -2-十五烷酮和α-沒藥醇；而文獻(xiàn)[15]的作者利用GC -MS聯(lián)用技術(shù)對湖南產(chǎn)龍牙草中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析顯示，其相對百分含量較多的成分是醇類和單萜類化合物.不同產(chǎn)地的龍牙草其揮發(fā)成分存在顯著差異的原因可能與龍牙草的品種、產(chǎn)地、采收時間、提取工藝等有關(guān).

圖2 27個成分的結(jié)構(gòu)

表1 27個成分的相對百分含量和保留時間

續(xù)表1

4 結(jié)論

本文利用GC -MS聯(lián)用技術(shù)對延邊產(chǎn)龍牙草的石油醚提取物中的揮發(fā)成分進(jìn)行了分析，且在較強的35個色譜峰中共鑒定出27個成分(占總石油醚提取物的45.28%).在鑒定出的27個成分中，相對百分含量最多的成分是環(huán)[3,5,7]癸烷 -1-羧酸辛酯，其次為膽酸乙酯.本文研究結(jié)果可為龍牙草石油醚提取物的活性測試提供藥效物質(zhì)信息.在今后的研究中，我們將通過擴(kuò)大質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫容量以及選用不同提取方法來更全面地鑒定和分析龍牙草中的有效成分，以為開發(fā)和利用龍牙草提供更為全面的物質(zhì)組成信息.