陳瀟敏，趙峰，王淑燕，邵淑賢，吳文晞，林欽，王鵬杰，葉乃興*

福建野生茶樹(shù)資源嘌呤生物堿構(gòu)成評(píng)價(jià)及特異資源篩選

陳瀟敏1，趙峰2*，王淑燕1，邵淑賢1，吳文晞3，林欽4，王鵬杰1，葉乃興1*

1. 福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院/茶學(xué)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002；2. 福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建 福州 350122；3. 福建恒正檢測(cè)技術(shù)有限公司，福建 福州 350100；4. 福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 福州 350014

以43份福建野生茶樹(shù)種質(zhì)資源為供試材料，通過(guò)超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC-MS/MS）測(cè)定其嘌呤生物堿構(gòu)成，并經(jīng)描述統(tǒng)計(jì)分析及聚類(lèi)分析后，系統(tǒng)地分析了其特征屬性。結(jié)果顯示，參試資源樣的嘌呤生物堿構(gòu)成差異明顯，大致可劃歸4個(gè)具體類(lèi)群：類(lèi)群Ⅰ嘌呤生物堿總量及構(gòu)成接近于常見(jiàn)茶樹(shù)品種；類(lèi)群Ⅱ嘌呤生物堿較高，且主要由咖啡堿構(gòu)成，僅含少量苦茶堿和可可堿；類(lèi)群Ⅲ嘌呤生物堿較高，且苦茶堿與咖啡堿含量相當(dāng)，僅含少量可可堿；類(lèi)群Ⅳ嘌呤生物堿高，且構(gòu)成以苦茶堿為主，咖啡堿和可可堿都較低。經(jīng)綜合評(píng)價(jià)后，從中篩得嘌呤生物堿構(gòu)成較特異資源14份，包括高嘌呤生物堿（>60?mg·g-1）5份，高咖啡堿（>50?mg·g-1）7份，高苦茶堿（>30?mg·g-1）7份。本研究可為茶樹(shù)的種質(zhì)資源保護(hù)、創(chuàng)新、品種選育及生產(chǎn)利用提供更多種質(zhì)資源信息和科學(xué)依據(jù)。

茶樹(shù)；種質(zhì)資源；嘌呤生物堿；苦茶堿；液質(zhì)聯(lián)用

茶葉中富含嘌呤生物堿，目前，在茶葉中已發(fā)現(xiàn)的含嘌呤生物堿的組分有咖啡堿（Caffeine）、可可堿（Theobromine）、茶堿（Theophylline）和苦茶堿（Theacrine）；其中，最為常見(jiàn)且含量較高的是咖啡堿[1-2]。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，它們都屬于“黃嘌呤甲基化衍生物”，會(huì)通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制磷酸二酯酶，引起環(huán)磷腺苷增多和腎上腺素的釋放，進(jìn)而使中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮、支氣管平滑肌舒張和利尿。但是，它們各自的生物效應(yīng)的強(qiáng)弱存在一定的差異，例如：興奮神經(jīng)作用由強(qiáng)至弱依次為咖啡堿、可可堿、茶堿、苦茶堿；而松弛肌肉的利尿作用強(qiáng)弱順序卻恰好相反[3]。近年，在我國(guó)廣東乳源[4]、江西聶都[5]、福建蕉城[6]、貴州普安[7]等地發(fā)現(xiàn)了一系列因富含苦茶堿而滋味極苦的茶樹(shù)種質(zhì)資源。相關(guān)研究顯示，苦茶堿除了滋味苦外，還具有抗抑郁、鎮(zhèn)靜催眠和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝等其他藥理作用[8-9]。

福建地處亞熱帶季風(fēng)氣候區(qū)，茶樹(shù)栽培歷史悠久，茶樹(shù)種質(zhì)資源豐富。俞永明等[10]和詹梓金等[11]曾對(duì)福建野生茶樹(shù)資源的植被類(lèi)型、自然分布規(guī)律以及形態(tài)學(xué)特征開(kāi)展了較為系統(tǒng)的調(diào)查研究，并在安溪、尤溪、寧德等地發(fā)現(xiàn)了特異性野生茶樹(shù)資源。野生茶樹(shù)因生長(zhǎng)環(huán)境獨(dú)特，保持了原有演化特征，其茶樹(shù)葉片的形態(tài)特征或生化成分構(gòu)成也常異于栽培品種[12-14]，開(kāi)發(fā)潛力大，但目前尚未見(jiàn)從嘌呤生物堿構(gòu)成角度對(duì)其進(jìn)行研究的報(bào)道。

本課題組在茶樹(shù)種質(zhì)資源的調(diào)查研究中，收集了福建云霄、大田、漳平等產(chǎn)區(qū)滋味苦澀的特殊野生茶樹(shù)資源。對(duì)其苦味成因的現(xiàn)有研究顯示，富含嘌呤生物堿、兒茶素、花青素、苦味氨基酸以及茶皂素形成的復(fù)合物等，都有可能造成茶葉滋味苦澀[15-16]。本研究從嘌呤生物堿構(gòu)成的角度，對(duì)這些滋味苦澀的福建野生茶樹(shù)進(jìn)行剖析，旨在為此類(lèi)野生茶資源的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

以富含苦茶堿的“鳳凰苦茶”作為分析方法優(yōu)化的材料。其余資源樣品分別來(lái)源于福建省的云霄、大田、尤溪、蕉城、詔安、漳平和安溪等7個(gè)產(chǎn)區(qū)，共43份茶樹(shù)種質(zhì)資源；2021年3月中旬至4月中旬，采摘春季第一輪茶樹(shù)新梢的一芽二葉，芽葉色澤基本為綠色，未見(jiàn)黃化、白化和紅紫色芽葉。樣品信息如表1所示。按照《茶樹(shù)種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》[17]進(jìn)行采樣和固樣，采用120℃熱風(fēng)固樣，樣品粉碎過(guò)100目篩后待測(cè)。

1.2 嘌呤生物堿測(cè)定

1.2.1 儀器與設(shè)備

Nexera X2 LC-30A超高效液相色譜儀（Shimadzu公司，日本），串聯(lián)Sciex 4500 Q-Trap質(zhì)譜儀（Sciex公司，美國(guó)）；C18反相色譜柱（2.1?mm×100?mm，2.6?μm）（廣州菲羅門(mén)公司）；AB204-N分析天平（梅特勒公司，美國(guó)）；超純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；KQ-800E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MS3 basic渦旋振蕩儀[艾卡（廣州）儀器有限公司]。

1.2.2 試劑

色譜純甲醇購(gòu)自安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司，色譜純乙腈購(gòu)自上海默克化工技術(shù)有限公司，色譜純甲酸購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司?？Х葔A（CAF，1.0?mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液）、可可堿（TB，純度≥99.9%）、苦茶堿（TC，純度≥99%）和茶堿（TP，純度≥98%）標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自源葉生物科技有限公司。

表1 43份供試茶樹(shù)種質(zhì)資源樣品信息

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

分別稱(chēng)取可可堿、苦茶堿、茶堿標(biāo)準(zhǔn)品0.010?g，以50%甲醇溶解后定容至10?mL，得1.0?mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；咖啡堿為1.0?mg·mL-1安瓿瓶標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別取上述4種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00?mL于100?mL容量瓶，以50%（/）甲醇水定容，得10?μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，再次逐級(jí)稀釋?zhuān)苽錆舛葹?.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0?mg·mL-1的工作曲線(xiàn)。

1.2.4 浸提溶劑優(yōu)化

以“鳳凰苦茶”為試驗(yàn)樣品進(jìn)行方法優(yōu)化，比較純水、50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇等7種溶劑的浸提效率。具體操作如下，分別稱(chēng)取0.200?g樣品，加入25?mL溶劑，渦旋振蕩后超聲提取30?min，冷卻后定容至25?mL，4℃，10?000?r·min-1離心5?min，上清液過(guò)0.22?μm有機(jī)相微孔濾膜，分別稀釋10倍（用于可可堿和茶堿測(cè)定）和1?000倍（用于咖啡堿和苦茶堿測(cè)定）。

1.2.5 超聲提取時(shí)間優(yōu)化

以1.2.4章節(jié)優(yōu)化選擇的溶劑，對(duì)“鳳凰苦茶”進(jìn)行超聲輔助提取（10、20、30?min和45?min）后，按照1.2.4章節(jié)的方法處理后測(cè)定。

1.2.6 色譜條件

流動(dòng)相A為0.1%甲酸-水溶液（/），流動(dòng)相B為乙腈；流速為0.30?mL·min-1；柱溫為40℃；進(jìn)樣量為5.0?μL。梯度洗脫條件：0～0.2?min，10% B；0.2～2.5?min，10%～90% B；2.5～4.0?min，90% B；4.0～4.2?min，90%～10% B；4.2～6.0?min，10% B。

1.2.7 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜條件包括確定各目標(biāo)物質(zhì)母離子、子離子、去簇電壓、碰撞能量。分別取0.10?μg·mL-1單標(biāo)工作液，電噴霧源（ESI），正離子模式，氣簾氣（N2）壓力30?psi，電噴霧電壓4?500?V，輔助氣（N2）溫度550℃，噴霧氣（N2）壓力55?psi，輔助加熱氣（N2）壓力55?psi，質(zhì)譜注射進(jìn)樣，通過(guò)母離子掃描，調(diào)節(jié)碰撞能量，穩(wěn)定性好、信號(hào)強(qiáng)度高的碎片離子如表2所示，4種嘌呤生物堿的質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1。

1.2.8 方法學(xué)評(píng)價(jià)

方法的穩(wěn)定性通過(guò)日內(nèi)重現(xiàn)性和日間重現(xiàn)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

日內(nèi)重現(xiàn)性：稱(chēng)取茶樣制備后，同日內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣3次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。日間重現(xiàn)性：稱(chēng)取茶樣制備后，每日測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5?d，計(jì)算RSD。

方法的準(zhǔn)確度通過(guò)加標(biāo)回收率試驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

加標(biāo)回收率：在供試茶樣中分別按低、中、高濃度添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，3次重復(fù)，計(jì)算加標(biāo)回收率和RSD。

1.3 數(shù)據(jù)分析

每份野生茶樹(shù)資源均采集3個(gè)批次，每個(gè)方法條件優(yōu)化樣品均進(jìn)行3次重復(fù)，最終結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差”表示；使用Origin 2018（美國(guó)，OriginLab公司）制作折線(xiàn)圖和散點(diǎn)圖、Prism 8.0（美國(guó)，Graphpad公司）制作柱狀圖；采用SPSS 19.0（美國(guó)，IBM公司）軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析、差異顯著性檢驗(yàn)（<0.05）、描述統(tǒng)計(jì)分析及聚類(lèi)分析。

表2 4種嘌呤生物堿的色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜參數(shù)

注：a 代表定量子離子，其余為定性子離子

Note: a represents ion pair selected for MRM quantity

圖1 4種嘌呤生物堿質(zhì)譜圖

2 結(jié)果與分析

2.1 茶葉嘌呤生物堿測(cè)定方法優(yōu)化

2.1.1 提取溶劑篩選

如圖2所示，分別比較水、50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇等7種溶劑。50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇、50%乙醇、70%乙醇等5種溶劑咖啡堿的提取量較高，提取量顯著高于水和95%乙醇（<0.05）；50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇、70%乙醇等4種溶劑苦茶堿的提取量較高，顯著高于水、50%乙醇和95%乙醇的提取量（<0.05）；采用100%甲醇作溶劑時(shí)可可堿的提取量最高，顯著高于其他溶劑的提取量（<0.05）。綜上可見(jiàn)，100%甲醇對(duì)咖啡堿、苦茶堿和可可堿的提取效率均較高，因此選擇100%甲醇作為最終提取溶劑。

2.1.2 超聲提取時(shí)間

100%甲醇超聲提取10、20、30、45?min后，結(jié)果如圖3所示。

隨著提取時(shí)間的增加，咖啡堿和苦茶堿的提取量基本呈現(xiàn)逐步增加，至30?min達(dá)最高后，開(kāi)始下降；而可可堿則主要在20?min時(shí)略有降低；綜合各組分提取結(jié)果，選擇30?min為最終浸提時(shí)間。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及方法學(xué)評(píng)價(jià)

表3所示為各嘌呤生物堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及線(xiàn)性范圍等相關(guān)信息，在試驗(yàn)涉及的濃度范圍內(nèi)，曲線(xiàn)的線(xiàn)性相關(guān)性均超過(guò)0.99；檢出限區(qū)間為0.066～1.630?μg·L-1；定量限區(qū)間0.219～5.435?μg·L-1。該結(jié)果能夠滿(mǎn)足測(cè)試要求。測(cè)試結(jié)果精密度和準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)結(jié)果如表4所示?？芍?，除茶堿因未檢出無(wú)法進(jìn)行評(píng)價(jià)外，其余目標(biāo)組分的日內(nèi)重現(xiàn)性≤3.86%，日間重現(xiàn)性≤4.5%；全部4個(gè)目標(biāo)組分在各加標(biāo)水平下的回收率達(dá)91.03%～100.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤7.42%。可見(jiàn)，試驗(yàn)結(jié)果能夠滿(mǎn)足測(cè)試要求。

2.2 福建野生茶樹(shù)資源嘌呤生物堿構(gòu)成分析

2.2.1 嘌呤生物堿種類(lèi)及含量

普通茶樹(shù)品種的嘌呤生物堿總量約占干物質(zhì)的2%～5%，構(gòu)成上以咖啡堿占比最大（2%～4%），可可堿次之（0.05%），茶堿往往較低（0.002%）[1]?？嗖鑹A是一種較特殊的嘌呤生物堿，多發(fā)現(xiàn)于特異性茶樹(shù)種質(zhì)資源中，普通品種中基本不含。

注：圖中不同小寫(xiě)字母表示不同提取溶劑間差異顯著（P<0.05）

注：圖中不同小寫(xiě)字母表示不同提取時(shí)間間差異顯著（P<0.05）

表3 嘌呤生物堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、相關(guān)系數(shù)、線(xiàn)性范圍、檢出限和定量限

注：以3倍信噪比計(jì)算檢出限（LOD），以10倍信噪比計(jì)算定量限（LOQ）

Note: LOD was calculated by 3 times signal-to-noise ratio, LOQ was calculated by 10 times signal-to-noise ratio

表4 嘌呤生物堿測(cè)試方法的精密度和準(zhǔn)確度

表5所示為本研究中43份福建野生茶樹(shù)資源的嘌呤生物堿的描述統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，可知，全部參試樣品均含咖啡堿和可可堿，且均未檢出茶堿。其中，27份含苦茶堿；咖啡堿、可可堿和苦茶堿含量差異較大?？傕堰噬飰A含量較高的野生茶樹(shù)資源依次為：ZP11、YX03、DT03、ZP01、ZP10。

2.2.2 系統(tǒng)聚類(lèi)分析

以Ward法對(duì)43份福建野生茶的嘌呤生物堿構(gòu)成進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)分析，如圖4所示，當(dāng)距離取5時(shí)，上述資源可被歸為4個(gè)類(lèi)群，按照類(lèi)群對(duì)其嘌呤生物堿進(jìn)行描述統(tǒng)計(jì)分析（表6）。

第Ⅰ類(lèi)群共20份茶樹(shù)種質(zhì)資源，其嘌呤生物堿總量及構(gòu)成接近于常見(jiàn)品種茶樹(shù)。該類(lèi)群的嘌呤生物堿總量均值為43.55?mg·g-1，其中，咖啡堿、苦茶堿、可可堿分別為22.60～48.43、0～13.09、0.51～5.60?mg·g-1。涉及的種質(zhì)資源包括詔安（9份）、漳平（4份）、尤溪（3份）、云霄（3份）和安溪（1份）。

第Ⅱ類(lèi)群共7份茶樹(shù)種質(zhì)資源，其主要特征是嘌呤生物堿較高，且主要由咖啡堿構(gòu)成，僅含少量苦茶堿和可可堿。該類(lèi)群的咖啡堿含量均值為55.09?mg·g-1，其中咖啡堿最高的DT03含量達(dá)68.71?mg·g-1。

第Ⅲ類(lèi)群共7份茶樹(shù)種質(zhì)資源，其主要特征是嘌呤生物堿較高，且苦茶堿與咖啡堿含量相當(dāng)，僅含少量可可堿。該類(lèi)群的苦茶堿含量均值為26.29?mg·g-1，咖啡堿含量均值為31.89～45.14?mg·g-1主要來(lái)源包括云霄（2份）、大田（2份）、漳平（3份）。

第Ⅳ類(lèi)群包含9份資源樣，其主要特征嘌呤生物堿高，且構(gòu)成以苦茶堿為主，咖啡堿和可可堿都較低。咖啡堿平均含量為13.78?mg·g-1，苦茶堿平均含量為28.69?mg·g-1，JC01、JC02含有極低的咖啡堿，分別為0.52、4.01?mg·g-1，而它們的苦茶堿含量均高于20?mg·g-1，分別為22.77、23.12?mg·g-1。DT05為本研究中苦茶堿含量最高的種質(zhì)資源，為41.22?mg·g-1，而咖啡堿含量?jī)H為16.18?mg·g-1。

表5 福建野生茶樹(shù)資源嘌呤生物堿含量的描述統(tǒng)計(jì)分析

圖4 43份福建野生茶樹(shù)資源嘌呤生物堿含量聚類(lèi)圖

表6 43份福建野生茶樹(shù)資源各類(lèi)群嘌呤生物堿含量特征表

從產(chǎn)區(qū)角度觀察其所屬的群類(lèi)后，發(fā)現(xiàn)來(lái)自詔安的10份資源中，9份屬于第Ⅰ類(lèi)群；蕉城的3份資源均屬于第Ⅳ類(lèi)群。而漳平的10份資源在4個(gè)類(lèi)群中均有分布；其次為云霄和大田，各自6份資源，在3個(gè)類(lèi)群中均有分布；尤溪的6份資源主要分布于兩個(gè)類(lèi)群（第Ⅰ類(lèi)群和第Ⅱ類(lèi)群）。

2.2.3 特異性福建野生茶樹(shù)資源篩選

在聚類(lèi)分析的基礎(chǔ)上，按照嘌呤生物堿總量大于60?mg·g-1、咖啡堿大于50?mg·g-1和苦茶堿大于30?mg·g-1等3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，從43份福建野生茶樹(shù)種質(zhì)資源中獲得了嘌呤生物堿構(gòu)成特異的資源14份，具體如表7所示。

3 討論

3.1 與現(xiàn)有其他方法的比較

圖5為標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為500?μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)品）及典型樣品測(cè)定的總離子流圖，因4種嘌呤堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)相近，所以它們?cè)谏V上的保留時(shí)間也較接近。當(dāng)使用二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定時(shí)，需要耗費(fèi)大量的時(shí)間對(duì)色譜分離條件進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到基線(xiàn)分離，進(jìn)而避免由于峰疊加而導(dǎo)致定量結(jié)果偏差[18-25]，其余現(xiàn)有方法的分離耗時(shí)如表8所示，最長(zhǎng)甚至需要耗時(shí)65?min。

通過(guò)比較還可以看出，本研究構(gòu)建的UHPLC-MS/MS方法在嘌呤堿的種類(lèi)、檢出限、定量限和線(xiàn)性范圍區(qū)間上均優(yōu)于其他文獻(xiàn)方法。特別是由于應(yīng)用了質(zhì)譜檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了在目標(biāo)物未完全實(shí)現(xiàn)基線(xiàn)分離的條件下，進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量。根據(jù)方法學(xué)評(píng)估結(jié)果（表3和表4），在試驗(yàn)的濃度范圍內(nèi)，各目標(biāo)物質(zhì)的線(xiàn)性相關(guān)和回收率等均良好。相較于二極管陣列檢測(cè)器，質(zhì)譜對(duì)于化合物的定性具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)，且在檢出限上也具備了突出的優(yōu)勢(shì)（表8），加之本方法使用了超高效液相色譜，使得分析的時(shí)間被進(jìn)一步壓縮至6?min，特別適用于高通量資源樣品的嘌呤生物堿組分測(cè)定。

3.2 福建野生茶樹(shù)資源嘌呤生物堿構(gòu)成

在本研究中，系統(tǒng)聚類(lèi)根據(jù)43份野生茶樹(shù)資源的嘌呤生物堿構(gòu)成特征，將其劃分為4個(gè)類(lèi)群，從各類(lèi)的構(gòu)成特點(diǎn)上分析，第Ⅰ類(lèi)群資源的生物堿總量30～50?mg·g-1，基本與普通品種茶樹(shù)相似；第Ⅱ類(lèi)群和第Ⅲ類(lèi)群為高咖啡堿、高苦茶堿種質(zhì)資源，從測(cè)定結(jié)果上看，福建資源群體的苦茶堿含量明顯高于廣東（除乳源群體外）、江西和貴州[4-5,7,20]；第Ⅳ類(lèi)群，屬于高苦茶堿低咖啡堿資源，此類(lèi)群資源可作為篩選低咖啡堿茶樹(shù)的天然材料。

近年來(lái)，隨著對(duì)苦茶堿保健功效關(guān)注度的增加，其相關(guān)天然茶樹(shù)資源的發(fā)掘也日益受到重視[26-28]，參試的43份野生茶樹(shù)資源中，有27份含有苦茶堿，特別是大田采集的6份樣中均含有苦茶堿，且含量較高，特別突出的DT05，其苦茶堿含量甚至超過(guò)了40?mg·g-1。

表7 嘌呤生物堿含量特異的種質(zhì)資源

注：括號(hào)內(nèi)數(shù)據(jù)為各資源對(duì)應(yīng)的生化成分含量

Note: The data in brackets are the content of biochemical components corresponding to each resource

注：峰號(hào)1、2、3、4分別對(duì)應(yīng)的組分為可可堿（TB）、茶堿（TP）、苦茶堿（TC）和咖啡堿（CAF）

表8 茶葉中嘌呤生物堿檢測(cè)方法

注：*為本研究構(gòu)建方法，其他為文獻(xiàn)方法

Note: * refer to our current method, the others were methods form references

福建野生茶樹(shù)種質(zhì)資源豐富，對(duì)其嘌呤生物堿組分構(gòu)成的系統(tǒng)性評(píng)估，將為特異性茶樹(shù)資源的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。最終，從參試的野生茶樹(shù)資源中，篩得5份高嘌呤生物堿資源（含量大于60?mg·g-1），7份高咖啡堿資源（含量大于50?mg·g-1），7份高苦茶堿資源（含量大于30?mg·g-1）。

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Purine Alkaloid Evaluation and Excellent Resources Screening of Fujian Wild Tea

CHEN Xiaomin1, ZHAO Feng2*, WANG Shuyan1, SHAO Shuxian1, WU Wenxi3, LIN Qin4, WANG Pengjie1, YE Naixing1*

1. College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University/Key Laboratory of Tea Science in Universities of Fujian province, Fuzhou 350002, China; 2. School of Pharmacy, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, China; 3. Hengzheng Testing Technology Company, Fuzhou 350100, China; 4. Fujian Institute of Product Quality Inspection, Fuzhou 350014, China

A total of forty-three wild tea resources in Fujian Province were applied in the research and the contents ofpurine alkaloids were determined by ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). The descriptive statistical analysis and cluster analysis were carried out to systematically analyze and explore the composition characteristics of purine alkaloids in Fujian wild tea resources. The results show that large variations in the purine alkaloids were identified in tea resources, which could be divided into four specific groups: group Ⅰ with similar contents of purine alkaloids as those in normal tea cultivars, group Ⅱwith higher purine alkaloids especially high caffeine content and low theophylline and theobromine, group Ⅲwith higher purine alkaloids especially high bitter theophylline and theophylline contents, group Ⅳ with high purine alkaloids especially bitter theophylline. After comprehensive evaluation, 14 tea resources with specific purine alkaloid composition were identified, including five germplasm resources with high purine alkaloids (>60?mg·g-1), seven germplasm resources with high caffeine (>50?mg·g-1) and seven germplasm resources with high bitter theophylline (>30?mg·g-1). Through this study, it provided more information and a scientific basis for the protection, innovation, breeding, production and utilization of tea germplasm resources.

tea plant, germplasm resources, purine alkaloid, theacrine, liquid chromatography-mass spectrometry

S571.1；Q946.91+2

A

1000-369X(2022)01-018-11

2021-06-02

2021-10-09

茶學(xué)福建省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（KLTS2018002）、福建中醫(yī)藥大學(xué)引進(jìn)人才科研啟動(dòng)項(xiàng)目（2801/701190097）、福建農(nóng)林大學(xué)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文資助基金（1122YS01003）

陳瀟敏，女，碩士研究生，主要從事茶樹(shù)栽培育種方面的研究。*通信作者：zhaofeng0591@fjtcm.edu.cn；ynxtea@126.com

（責(zé)任編輯：趙鋒）