韓鳳娟 陳光煜 霍慧娟

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是全球老年男性最常見(jiàn)的癌癥之一[1]。早期PCa患者因癥狀不明顯往往容易被忽視，發(fā)現(xiàn)時(shí)大多數(shù)已是晚期PCa，因此患者生存期較短以及生活質(zhì)量較差[2-3]。鑒于此，在了解PCa的生物學(xué)基礎(chǔ)上并尋找用于臨床結(jié)果預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物至關(guān)重要。微小RNA(miRNA)是一類(lèi)非編碼小RNA[4]，通過(guò)影響靶基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，來(lái)參與機(jī)體多種生物學(xué)功能[5]。雙鏈miRNA包含引導(dǎo)鏈和滯后鏈，miR-223-3p和miR-223-5p作為滯后鏈，在少數(shù)惡性實(shí)體瘤中異常表達(dá)已有研究報(bào)道，包括外陰癌和膀胱癌[6]。miR-223-5p可以通過(guò)靶向多種致癌基因(例如E2F8和ANLN)起到了抗腫瘤的作用[7]，但是，其在PCa中的作用仍是未知的。因此本研究對(duì)miR-223-3p和miR-223-5p水平與前列腺癌中的臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)進(jìn)行研究分析，旨在為PCa確立生物標(biāo)志物的進(jìn)一步研究提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月至2019年9月本院收治的64例PCa患者，年齡45～86歲，平均(67.31±9.65)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者經(jīng)CT 檢查和前列腺穿刺活檢病理檢查確診為前列腺癌；②符合根治性前列腺切除術(shù)指征；③臨床及隨訪(fǎng)資料完整；④患者簽署自愿受試同意書(shū)，患者及其家屬需簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已接受放療、化療及手術(shù)治療者；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并心肺等器質(zhì)嚴(yán)重性病變患者。

1.2 治療方式

所有研究對(duì)象均接受根治性前列腺切除術(shù)，術(shù)后選擇內(nèi)分泌治療，激素敏感型晚期患者以?xún)?nèi)分泌治療為主，包括手術(shù)或藥物去勢(shì)和比卡魯胺或氟他胺等抗雄激素治療；對(duì)去勢(shì)抵抗性患者采取新型內(nèi)分泌治療藥物(多西他賽、阿比特龍)或二線(xiàn)內(nèi)分泌治療。

1.3 臨床資料收集

收集患者年齡、術(shù)前前列腺特異性抗原(PSA)、Gleason 評(píng)分、TNM 分期、骨轉(zhuǎn)移。Gleason評(píng)分≤6分，為低危，7分為中危，≥8分為高危，因此將患者按照低危(Gleason評(píng)分<7分)和中高危(Gleason評(píng)分≥7)分為2組。

1.4 miR-223-3p和miR-223-5p水平檢測(cè)

抽取受試者靜脈血5 mL，3 500 rpm 離心 15 min 后，提取上層清液。使用TRIzol?LS 試劑盒提取總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA 濃度及純度。取 2 μg 總 RNA 使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為 95 ℃ 30 s，60 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，循環(huán) 40 次。用2-ΔΔCt法計(jì)算各組基因的相對(duì)表達(dá)量。引物均送上海生工生物公司合成，引物如下：miR-223-3p：F：5’-ACACTCCAGCTGGGTGTCAGTTTGTCAAAT-3’，R：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTGGGGTAT-3’；miR-223-5p：F：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，R：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。

1.5 隨訪(fǎng)

采用電話(huà)及門(mén)診或住院復(fù)查等方式進(jìn)行隨訪(fǎng)1年，了解患者生存情況。隨訪(fǎng)時(shí)間截至2020年12月。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血清中miR-223-3p和miR-223-5p表達(dá)與 PCa 臨床病理特征的關(guān)系

患者年齡、術(shù)前PSA均無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Gleason評(píng)分≥7、有骨轉(zhuǎn)移、TNM臨床分期Ⅲ+Ⅳ期患者血清miR-223-3p、miR-223-5p表達(dá)水平高于Gleason評(píng)分<7、無(wú)骨轉(zhuǎn)移、Ⅰ+Ⅱ期(P< 0.05)， 見(jiàn)表1。

表1 前列腺癌血清中miR-223-3p和miR-223-5p 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.2 存活組與死亡組PCa患者的基線(xiàn)特征比較

存活組與死亡組PCa患者的基線(xiàn)特征比較，死亡組的血清miR-223-3p、miR-223-5p水平顯著高于存活組(P<0.05)，Gleason評(píng)分≥7、有骨轉(zhuǎn)移、TNM臨床分期Ⅲ+Ⅳ期的患者存活率顯著低于Gleason評(píng)分<7、無(wú)骨轉(zhuǎn)移、Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)，見(jiàn)表 2。

表2 存活組與死亡組患者的基線(xiàn)特征比較

2.3 影響前列腺癌患者預(yù)后多因素logistic分析

多因素Logistic回歸分析顯示，miR-223-3p、miR-223-5p水平上升為影響腦膜瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)， 見(jiàn)表3。

表3 影響前列腺癌患者預(yù)后的多因素logistic分析

3 討論

PCa作為一種生長(zhǎng)緩慢的腫瘤，在早期階段患者臨床癥狀不明顯，明確識(shí)別早期PCa對(duì)患者的及時(shí)治療很關(guān)鍵[8-9]。目前在臨床實(shí)踐中，基于PSA測(cè)定的PCa篩查方法可以在疾病早期階段檢測(cè)出，有助于降低PCa引起的死亡率[10-11]。但是，血清PSA作為生物標(biāo)志物依然存在，盡管PSA對(duì)前列腺組織具有特異性，但其癌癥特異性較低[12]。因此，PSA篩查已造成對(duì)PCa的過(guò)度診斷[13-14]，而且并非所有前列腺癌都會(huì)導(dǎo)致血清PSA濃度的升高[15]。此外，血清PSA水平也與腫瘤的侵襲性、生存率或?qū)λ幬镏委煹姆磻?yīng)無(wú)關(guān)，容易引起對(duì)患者的過(guò)度治療[16-17]。因此，能夠準(zhǔn)確識(shí)別PCa患者的非侵入性診斷生物標(biāo)志物是目前所必需的。

MiRNA是保守的非編碼RNA，長(zhǎng)19～22個(gè)核苷酸，能夠介導(dǎo)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，通過(guò)結(jié)合靶mRNA上的互補(bǔ)位點(diǎn)而影響mRNA的穩(wěn)定性[18]。有研究表明，miRNA在多種生物過(guò)程均起到了關(guān)鍵性作用，包括細(xì)胞增殖、分化、凋亡和癌變等[19]。有研究結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，前列腺腫瘤組織中miRNA表達(dá)失調(diào)，有作為PCa診斷生物標(biāo)志物的潛力[20-21]。還有研究稱(chēng)，miR-223在各種癌癥中起到了重要作用[22]。其中，miR-223在不同的泌尿生殖系統(tǒng)癌癥中均出現(xiàn)了異位表達(dá)，例如膀胱癌，腎癌和睪丸腫瘤[23]。另外miR-223-5p與癌癥的發(fā)病機(jī)制也有關(guān)，包括外陰癌，非小細(xì)胞肺癌，膀胱癌[24]。本研究發(fā)現(xiàn)血清miR-223-3p、miR-223-5p表達(dá)水平Gleason 評(píng)分≥7、有骨轉(zhuǎn)移、TNM臨床分期Ⅲ+Ⅳ期比Gleason評(píng)分<7、無(wú)骨轉(zhuǎn)移、Ⅰ+Ⅱ期更高。由于Gleason評(píng)分、有骨轉(zhuǎn)移、TNM臨床分期都代表了PCa的臨床病理特征，這說(shuō)明了miR-223-3p和miR-223-5p與PCa的臨床病理特征存在相關(guān)性，與目前的研究結(jié)果類(lèi)似。

已有研究稱(chēng)PCa與miR-223-3p的致癌功能有關(guān)，miR-223可能通過(guò)miR-223-3p和miR-223-5p之間的合作在PCa發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用[25]。結(jié)合本研究發(fā)現(xiàn)，死亡組的血清miR-223-3p、miR-223-5p水平顯著高于存活組，且血清miR-223-3p、miR-223-5p水平上升為影響腦膜瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，說(shuō)明了血清miR-223-3p、miR-223-5p水平有作為PCa生物標(biāo)志物的潛力，為未來(lái)尋找PCa的生物性標(biāo)志物提供了理論依據(jù)。

綜上所述，本研究結(jié)果表明了外周血miR-223-3p和miR-223-5p水平與前列腺癌患者密切相關(guān)，對(duì)未來(lái)關(guān)于前列腺癌患者的研究提供了一定的數(shù)據(jù)支持。但是本研究由于單一中心、病例少等缺點(diǎn)可能存在不足，對(duì)研究結(jié)果存在一定的影響，需要進(jìn)一步對(duì)本研究結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。