趙孟陽 高天慧 王怡君

化療作為肺癌的綜合性治療中的首選，雖然近年來有所進展，但由于其毒性大，當患者對化療藥物的敏感性下降時，易出現(xiàn)不良反應(yīng)，患者也易出現(xiàn)耐藥反應(yīng)[1-2]，因此，患者 5年內(nèi)的生存率極低，僅為7%～14%[3]。近年來，關(guān)于腫瘤對化療藥物的敏感性試驗已成為研究熱點。前列腺癌過度表達1(PTOV1)在多種癌癥中出現(xiàn)過度表達現(xiàn)象，包括前列腺癌，乳腺癌和肝癌[4-5]。還有研究發(fā)現(xiàn)PTOV1可通過激活乳腺癌的Wnt/β-catenin途徑來促進癌癥干細胞(CSC)的增殖，而CSC與腫瘤對化療藥物的敏感性有關(guān)[6-7]。因此本文通過研究肺癌患者外周血中PTOV1的表達情況與腫瘤對化療藥物順鉑和多西紫杉醇的敏感性的關(guān)系，進一步探討肺癌對化療藥物的敏感性機制，為化療藥物的選擇提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2019年8月至2020年8月于本院接受的56例肺癌患者作為研究對象，其中男性43例，女性13例，年齡42～73歲，平均年齡(60.34±8.14)歲。納入標準：①符合《CSCO原發(fā)性肺癌診療指南(2016)》[8]肺癌的診斷標準，經(jīng)細胞學(xué)檢查、病理診斷確診為肺癌；②患者可耐受放化療治療；③患者已行胸外科手術(shù)治療，且就診前未經(jīng)過藥物或放射性治療。排除標準：①合并其他惡性腫瘤患者，②無重要臟器的嚴重損傷；③臨床資料不全患者。研究對象及家屬均簽署研究知情同意書，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過。

1.2 化療方法

化療藥物為多西紫杉醇注射液及順鉑注射液。肺癌患者化療前1天及第1天口服地塞米松片5 mg；第1天，多西紫杉醇75 mg/m2靜脈滴注1 h；順鉑75 mg/m2，每日2次，共3天，第2～4天，給予阿扎司瓊針以及水化、利尿。

1.3 ECIA法檢測化療藥物敏感性

在患者手術(shù)后適當修剪癌組織標本，于含青霉素、鏈霉素的生理鹽水中浸泡，然后用生理鹽水沖洗；切成1 mm×1 mm的組織塊，將其放在細胞培養(yǎng)液浸泡的濾紙上，CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，分為研究組和對照組。24 h后在計算機圖像分析系統(tǒng)中測定組織塊的初始點陣數(shù)(ILN)。然后加入藥物或等量注射用水培養(yǎng)4天。加入MTT培養(yǎng)4 h后測定組織塊被藍染部分的終末點陣數(shù)(FLN)。抑制率=FLN/ILN=[(對照組存活率-實驗組存活率)/對照組存活率]×100%存活率。標準為抑制率≥30%為敏感，<30%為不敏感。

1.4 RT-PCR檢測PTOV1表達水平

使用Trizol法提取患者外周血中總RNA。使用Takara逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(大連寶生物公司)合成cDNA模板，使用BIO-RAD熒光定量PCR儀檢測PTOV1表達水平，以GAPDH為對照，通過2-ΔΔCt方法分析其相對mRNA水平。反應(yīng)條件為94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃30 s、55 ℃30 s、72 ℃60 s，共35個循環(huán)，引物送上海生工生物公司合成。引物如下：PTOV1-F：5'-CCCAGTCCAGATCGT CAACA-3'；PTOV1-R：5'-GCCACCTCTTGGACCGACT-3'。

1.5 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果

2.1 肺癌體外對不同藥物敏感情況分析

根據(jù)藥敏結(jié)果可知，肺癌對多西紫杉醇的體外敏感率為46.43%(26/56)，對順鉑的體外敏感率為25.00%(14/56)，其中肺癌對多西紫杉醇的敏感性顯著高于順鉑(χ2=5.600,P=0.018)。

2.2 肺癌患者的體外藥敏結(jié)果與臨床資料的關(guān)系

結(jié)果顯示多西紫杉醇和順鉑藥物敏感率與患者性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理類型、分化程度無關(guān)(P>0.05)，而與患者年齡、PTOV1表達水平相關(guān)(P<0.05)，<6歲組的敏感率顯著高于≤60歲組，敏感組的PTOV1表達水平顯著低于耐藥組，見表1。

表1 肺癌對化學(xué)藥物的體外敏感結(jié)果與臨床資料的關(guān)系/例

2.3 肺癌對化療藥物敏感性的多因素分析

根據(jù)Logistic多因素回歸分析結(jié)果顯示，年齡、PTOV1表達水平均是影響肺癌對化療藥物敏感性的獨立危險因素(P<0.05)，見表2。

表2 肺癌對化療藥物敏感性的多因素回歸分析

3 討論

化療是目前肺癌治療的重要手段，鉑類聯(lián)合多西紫杉醇化療可以有效改善術(shù)后患者的預(yù)后，通過與DNA結(jié)合，從而影響腫瘤細胞的DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等過程，達到殺傷腫瘤細胞的效果[9-10]，其中DNA損傷修復(fù)功能就是肺癌患者對化療藥物產(chǎn)生耐藥性的關(guān)鍵[11]。目前，臨床上由于缺少針對個體化的化療方案，患者的治療效果不佳，化療緩解率偏低[12]。因此通過研究肺癌對化療藥物的敏感性，尋求最佳的個體化方案至關(guān)重要。根據(jù)本研究藥敏結(jié)果可知，肺癌對多西紫杉醇的體外敏感率為46.43%，對順鉑的體外敏感率為25.00%，肺癌對多西紫杉醇的體外敏感率顯著高于順鉑，說明在選擇針對肺癌的化療藥物時可優(yōu)先選擇多西紫杉醇。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥物敏感性與患者性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理類型、分化程度無關(guān)，而與患者年齡表達水平相關(guān)，其中<60歲組的敏感率顯著高于≤60歲組，這與目前的研究結(jié)果不一致[13]，有研究證實藥物敏感性與病理類型相關(guān)，但本研究中鱗癌和腺癌對藥物的敏感性高于其他類型，但差異不顯著，可能與樣本量偏少有關(guān)系，可以在以后的研究中加大樣本量來進一步驗證結(jié)果。

PTOV1是一種大小為46 KDa的蛋白，由位于19號染色體(19q13)上的12外顯子基因編碼[14]。PTOV1也與多種癌癥的預(yù)后不良相關(guān)，包括前列腺癌、乳腺癌等[15]。另外有研究指出PTOV1在肺癌患者中高水平表達[16-17]。CSC作為能夠自我更新、自我繁殖的細胞，有助于腫瘤的復(fù)發(fā)以及轉(zhuǎn)移。CSC存在在多數(shù)癌癥包括肺癌中，與化療藥物的耐藥性有關(guān)，靶向CSCs可以增加肺癌對化學(xué)藥物的敏感性[18-19]。這說明PTOV1可能與患者化療敏感性相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)敏感組的PTOV1表達水平顯著低于耐藥組，以及多因素分析結(jié)果顯示PTOV1表達水平是影響肺癌對化療藥物敏感性的獨立危險因素。該研究進一步驗證了PTOV1表達水平與化療敏感性有關(guān)，可能可以通過靶向PTOV1來增加肺癌對化療藥物的敏感性。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者外周血中PTOV1的表達情況與腫瘤對化療藥物順鉑和多西紫杉醇的敏感性存在相關(guān)性，為今后針對患者選擇合適的化療藥物提供新的思路。但本研究存在一定的局限性，由于樣本量較少以及中心單一等問題導(dǎo)致結(jié)果受到影響，需要在后續(xù)的研究中進一步完善。