劉冰瀅，穆矛，鄧鋒，梁蔚陽，薛巧如

廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510663

20 世紀(jì)初，有研究者在研究糖代謝機(jī)理時(shí)完成了1,6-二磷酸果糖（fructose-1,6-diphosphate,FDP）的分離和鑒定［1］。1942 年，美國Neuberg 等利用新鮮酵母細(xì)胞使葡萄糖磷酸化制備了果糖二磷酸鈉［2］。國內(nèi)上海新亞藥業(yè)有限公司首家仿制并獲得批準(zhǔn)文號，之后陸續(xù)有多家企業(yè)研究開發(fā)了此品種，臨床應(yīng)用進(jìn)一步穩(wěn)固并擴(kuò)大。多項(xiàng)研究表明，果糖二磷酸鈉對人體代謝調(diào)節(jié)具有多種功能，靜脈注射果糖二磷酸鈉鹽可用于心肌缺血疾病的輔助治療［3-6］。果糖二磷酸鈉劑型有無菌分裝粉針、大輸液、口服液、片劑，膠囊等。

果糖二磷酸鈉系列產(chǎn)品為非基本藥物品種，是醫(yī)保目錄的乙類目錄品種。截至2016 年11 月，國內(nèi)共40 家企業(yè)生產(chǎn)果糖二磷酸鈉注射制劑，批準(zhǔn)文號80 個(gè)；其中，注射液17 家，批準(zhǔn)文號26 個(gè)，2 個(gè)規(guī)格；注射用粉針23 家，批準(zhǔn)文號54 個(gè)，4個(gè)規(guī)格。本次抽取的果糖二磷酸鈉注射液樣品共計(jì)55 批，涉及5 家生產(chǎn)企業(yè)，8 個(gè)批準(zhǔn)文號，2 種規(guī)格（50 mL∶5 g；100 mL∶10 g）；注射用果糖二磷酸鈉63 批，涉及10 家生產(chǎn)企業(yè)，22 個(gè)批準(zhǔn)文號，4 種規(guī)格（2.5 g；5 g；7.5 g；10 g）。抽樣分布于全國21 個(gè)省份，其中生產(chǎn)單位抽樣21 批，醫(yī)療機(jī)構(gòu)抽取 41 批，在經(jīng)營單位抽取56 批，樣品確認(rèn)率為100%，均為標(biāo)示企業(yè)產(chǎn)品。

1 儀器與關(guān)鍵試劑

儀器：UV-2550 紫外可見分光光度計(jì)（日本島津儀器有限公司）；E2695 型高效液相色譜儀，包括紫外檢測器、Empower 3 數(shù)據(jù)處理軟件等（Waters 公司）；SOLAAR M6 型原子吸收分光光度計(jì)（Thermo，GF95 型石墨爐，F(xiàn)S95 自動(dòng)進(jìn)樣裝置）；石墨管（Thermo Coated Graphite）；KY-Ⅱ型AL 空心陰極燈（北京曙光明電子光源儀器有限公司，燈號：3931）；離子色譜儀（Thermo Dionex ICS-5000）；電子天平（Sartorius CPA225D）；pH 計(jì)（Sartorius PB-10）；水分測定儀（Metrohm 756）。

關(guān)鍵藥品和試劑：固體復(fù)合酶（北京眾宜隆潤科技有限公司，批號LRY2016110102）；磷酸二氫鉀對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100745-201503，含量100%）。

2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-063）-2001Z-2011和WS1-（X-064）-2001Z-2011 分別測定果糖二磷酸鈉注射液和注射用果糖二磷酸鈉。

3 結(jié)果與分析

3.1 現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)

果糖二磷酸鈉注射液按現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)共發(fā)現(xiàn)10 批不合格，占注射液抽樣總數(shù)的18.2%，涉及的生產(chǎn)企業(yè)2 家，不合格項(xiàng)目均為游離磷酸鹽。注射用果糖二磷酸鈉有1 批不合格，占注射用粉針抽樣總數(shù)的1.6%，涉及生產(chǎn)企業(yè)1 家，不合格項(xiàng)目為熱原。

3.1.1 游離磷酸鹽55 批次果糖二磷酸鈉注射液共有10 批次游離磷酸鹽測定結(jié)果不符合規(guī)定，涉及2家生產(chǎn)企業(yè)；注射用粉針該項(xiàng)目均符合規(guī)定，具體結(jié)果見圖1。目前法定標(biāo)準(zhǔn)采用比色法檢測游離磷酸鹽，在酸性介質(zhì)中，正磷酸鹽與鉬酸銨反應(yīng)，生成磷鉬雜多酸，經(jīng)亞硫酸鈉等還原劑將其還原生成藍(lán)色絡(luò)合物。此方法簡單、方便，重復(fù)性較好。檢驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)不合格的產(chǎn)品均來自醫(yī)療單位和流通領(lǐng)域。不合格批次中標(biāo)示批號為1505242101 和1506120562 兩批流通領(lǐng)域抽樣產(chǎn)品，在生產(chǎn)企業(yè)也抽檢到該2 批次樣品，其游離磷酸鹽檢查卻符合規(guī)定。不合格批次的樣品集中在2 家生產(chǎn)企業(yè)，其余企業(yè)的所有樣品均符合規(guī)定。經(jīng)調(diào)研了解到不合格企業(yè)采用熱處理輔助滅菌加除菌過濾的生產(chǎn)工藝，而其他3 家生產(chǎn)企業(yè)則均采用無菌生產(chǎn)工藝，提示熱處理可能是游離磷酸鹽含量超限的原因之一。

圖1 游離磷酸鹽測定結(jié)果

3.1.2 熱原63 批次注射用果糖二磷酸鈉中有1 批次熱原不符合規(guī)定，不合格率為1.58%。這可能與原料和制劑生產(chǎn)過程中微生物污染有關(guān)，提示企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格控制生產(chǎn)環(huán)境。

3.1.3 其他項(xiàng)（1）果糖二磷酸鈉注射液其他項(xiàng)目包括性狀、鑒別、pH 值、顏色、異常毒性與熱原、無菌、含量測定等，均符合規(guī)定。五家企業(yè)產(chǎn)品的pH 值分布較為分散，有2 家企業(yè)的產(chǎn)品pH 值分布在3.08～3.84，另外3 家企業(yè)產(chǎn)品的pH 值分布在4.21～4.59，可能是輔料和生產(chǎn)工藝導(dǎo)致這種差異。采用酶法測得果糖二磷酸鈉的含量，限度為90.0%～110.0%，均符合規(guī)定。大部分產(chǎn)品含量分布在93.1%～102.7%，顯示基本控制在一個(gè)合理的水平范圍。（2）注射用果糖二磷酸鈉其他項(xiàng)目主要包括性狀、酸度、溶液的澄清度與顏色、水分、異常毒性、無菌、含量測定等，均符合規(guī)定。所有樣品的pH 值均在5.5～6.5，大部分產(chǎn)品pH 值主要分布在6.01～6.09，分布集中，標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置合理。按無水物計(jì)算樣品含量，大多數(shù)樣品結(jié)果在99%～100%的范圍，各廠家差異較小，質(zhì)量穩(wěn)定。

3.2 探索性研究結(jié)果與分析

根據(jù)產(chǎn)品的特點(diǎn)及其標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)中存在的問題開展了9 項(xiàng)探索性研究，包括薄層色譜鑒別、溶液吸光度、有關(guān)物質(zhì)分析、滲透壓、5-羥甲基糠醛、鋁含量、輔料分析、加速穩(wěn)定性考察及模擬滅菌試驗(yàn)。

3.2.1 薄層色譜鑒別現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)下薄層色譜主斑點(diǎn)拖尾嚴(yán)重，影響展開效果。參照果糖二磷酸鈉原料薄層色譜鑒別方法，同時(shí)針對主斑點(diǎn)過大，拖尾較為嚴(yán)重的情況，將點(diǎn)樣量由5 μL 減少為1 μL，效果良好。

3.2.2 溶液吸光度吸光度作為注射劑的一項(xiàng)重要理化指標(biāo)，主要考察產(chǎn)品外在性狀是否發(fā)生了改變，從而可以了解產(chǎn)品質(zhì)量的波動(dòng)。果糖二磷酸易降解，生成醛類物質(zhì)，可聚合形成聚合物，從而導(dǎo)致溶液顏色發(fā)生改變，因此有必要對其吸光度進(jìn)行檢查以控制產(chǎn)品的質(zhì)量。在380 nm 的波長處測定吸光度，其中注射液全部小于0.15，注射用粉針全部小于0.10，說明該項(xiàng)目風(fēng)險(xiǎn)較小。

3.2.3 有關(guān)物質(zhì)分析針對注射用粉針劑現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)采用微晶纖維素板進(jìn)行薄層色譜檢查，除果糖有顯色斑點(diǎn)外，其他3 種成分1,6-二磷酸果糖、6-磷酸果糖、6-磷酸葡萄糖均無明顯顯色斑點(diǎn)的問題進(jìn)行方法研究和探索，調(diào)整方法，采用硅膠G 板，以正丁醇-冰醋酸-水-丙酮-10%氨溶液為展開劑，顯色劑改為苯胺-二苯胺丙酮溶液。經(jīng)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該方法顯色效果比原標(biāo)準(zhǔn)好，4 種成分都能顯色?；旌蠈φ掌啡芤褐?，果糖和 6-磷酸葡萄糖能顯示2個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)，但6-磷酸果糖和果糖二磷酸鈉2 個(gè)點(diǎn)不能明顯分離。但由于該方法本身靈敏度和分離度局限，不能很好地考察產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)。

果糖二磷酸鈉系列品種中，根據(jù)其合成工藝，葡萄糖、果糖、6-磷酸葡萄糖為工藝雜質(zhì)，6-磷酸果糖為降解雜質(zhì)。針對果糖和葡萄糖，采用HPLC 法示差檢測器進(jìn)行分析，所有抽取樣品均未檢出。采用酶法對6-磷酸葡萄糖、6-磷酸果糖2種雜質(zhì)進(jìn)行測定，注射液2 種雜質(zhì)之和均低于2.0%，注射用粉針均低于0.5%，提示該項(xiàng)目風(fēng)險(xiǎn)較小。

3.2.4 滲透壓溶液的滲透壓依賴于溶液中溶質(zhì)粒子的數(shù)量，制劑過程中添加的各種輔料會(huì)導(dǎo)致滲透壓的增高，是重要的安全性指標(biāo)。有1 家企業(yè)所有注射液產(chǎn)品滲透壓均大于1 000 mOsm/kg，其余企業(yè)產(chǎn)品的結(jié)果均小于700 mOsmol/kg；63 批次注射用粉針產(chǎn)品中有8 批大于700 mOsmol/kg。

3.2.5 5-羥甲基糠醛5-羥甲基糠醛是1 種呋喃類化合物，有研究表明，5-羥甲基糠醛對眼睛、上呼吸道、皮膚和黏膜等有刺激性；對人體橫紋肌及內(nèi)臟有損害，且具有神經(jīng)毒性，能與人體蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生蓄積中毒［7］。采用HPLC 法測定5-羥甲基糠醛，注射用粉針均未檢出，注射液中5-羥甲基糠醛含量不同廠家產(chǎn)品之間差異較大。有1 家生產(chǎn)企業(yè)的2 批產(chǎn)品5-羥甲基糠醛含量超過2 μg/g，其中1 批達(dá)到4.8 μg/g，其余生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品5-羥甲基糠醛含量均低于1 μg/g［8］。

3.2.6 鋁含量從2004 年7 月起，F(xiàn)DA 要求生產(chǎn)廠家對大多數(shù)腸外營養(yǎng)液中的鋁進(jìn)行定量。大容積的注射用溶液,如葡萄糖、氨基酸、脂肪乳和注射用蒸餾水，要求其鋁含量低于25 μg/L。采用原子吸收分光光度法對所有抽取樣品進(jìn)行測定，本次抽取注射液中鋁含量覆蓋范圍從4～500 ng/mL，55 批次樣品中有18 批次鋁含量超過200 ng/mL，存在風(fēng)險(xiǎn)。不同企業(yè)控制情況不同，其中有1 家企業(yè)所有批次樣品均控制在20 ng/mL 以下，遠(yuǎn)低于其他4 家企業(yè)。注射用粉針63 批次樣品有2 批次大于2 μg/g，為同一公司產(chǎn)品，最高達(dá)到3.5 μg/g，其余企業(yè)產(chǎn)品大部分小于1 μg/g。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)原料供應(yīng)商產(chǎn)品鋁含量與注射液終產(chǎn)品有直接關(guān)聯(lián)［9］。

3.2.7 輔料分析研究采用離子色譜法分別對樣品中Cl-和SO42-進(jìn)行測定。分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有1 家企業(yè)產(chǎn)品Cl-含量遠(yuǎn)高于其他企業(yè)，該企業(yè)產(chǎn)品滲透壓也均超過1 000 mOsm/kg，添加了過多的輔料可能是該企業(yè)產(chǎn)品滲透壓高的原因。各企業(yè)樣品中均檢出硫酸根離子，可能是原料及工藝中帶入的，對比果糖二磷酸鈉原料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中檢查項(xiàng)下硫酸根的限度0.05%，有1 家企業(yè)抽檢的21 批樣品中，17 批超過限度。其余4 家企業(yè)的27 批樣品，硫酸根含量結(jié)果均遠(yuǎn)小于0.05%。提示生產(chǎn)工藝中可能帶入一定量的硫酸根。

3.2.8 加速穩(wěn)定性考察本研究選取了5 家生產(chǎn)企業(yè)7 批注射液分別放置在30 ℃、40 ℃及50 ℃進(jìn)行了連續(xù)8 周的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，考察項(xiàng)目為游離磷酸鹽與含量測定。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)該產(chǎn)品對熱不穩(wěn)定，如圖2、圖3 所示，隨著溫度的升高，其降解的速度越快。30 ℃條件下，放置4 周內(nèi)比較穩(wěn)定，8 周內(nèi)游離磷酸鹽逐漸增加，果糖二磷酸鈉含量緩慢下降；40 ℃條件下，放置到第4 周游離磷酸鹽明顯增加，部分批次超限，果糖二磷酸鈉含量出現(xiàn)較為明顯的下降；50 ℃條件下，放置1 周游離磷酸鹽全部超限，放置2 周，果糖二磷酸鈉含量明顯下降。

圖2 游離磷酸鹽含量和時(shí)間的關(guān)系

圖3 果糖二磷酸鈉含量和時(shí)間的關(guān)系

使用Prism 6 統(tǒng)計(jì)計(jì)算分析結(jié)果，游離磷酸鹽在30 ℃、40 ℃、50 ℃時(shí)均與時(shí)間存在顯著相關(guān)（P<0.01）。含量與時(shí)間在30 ℃時(shí)無顯著相關(guān)，在40 ℃、50 ℃時(shí)存在顯著性相關(guān)（P<0.01）。提示溫度是產(chǎn)品質(zhì)量的主要影響因素。

3.2.9 模擬滅菌工藝質(zhì)量考察根據(jù)調(diào)研了解到保證果糖二磷酸鈉注射液無菌的主要方式有無菌生產(chǎn)工藝和熱處理輔助加過濾除菌。取果糖二磷酸鈉原料和輔料，按配比制成果糖二磷酸鈉溶液，密封，分別在121 ℃和100 ℃高溫滅菌15 min，60 ℃加熱1 h。監(jiān)測滅菌前后該批次樣品中果糖二磷酸鈉含量和游離磷酸鹽變化。原料含量99.30%，游離磷酸鹽為0.15%。121 ℃滅菌15 min，游離磷酸鹽均上升至9.9%以上，含量降至65%；100 ℃滅菌15 min后游離磷酸鹽迅速增加2.2%，含量降至83%；在60 ℃加熱1 h，游離磷酸鹽含量上升至0.89%，含量降低到97%。要保證F0 值不低于8 min，又要確保滅菌后SAL≤10-6，采用加熱滅菌工藝難度很大。

4 討論

4.1 通過質(zhì)量分析發(fā)現(xiàn)的問題

4.1.1 標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的主要問題（1）現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)可行性和有效性方面存在一定問題，如薄層色譜鑒別時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)Rf 值小，樣品展開不完全，且有點(diǎn)樣量過高，拖尾嚴(yán)重的情況，方法條件需要進(jìn)一步優(yōu)化；注射用粉針有關(guān)物質(zhì)薄層色譜檢查項(xiàng)下，按標(biāo)準(zhǔn)要求的點(diǎn)樣量，斑點(diǎn)不明顯，方法可行性較差，需要進(jìn)一步改進(jìn)。（2）現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中安全性指標(biāo)部分缺失，如未對有關(guān)物質(zhì)、滲透壓摩爾濃度、鋁離子和抗氧劑等進(jìn)行控制。有關(guān)物質(zhì)是反映產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，是生產(chǎn)工藝和儲(chǔ)存條件是否合理的重要依據(jù)；滲透壓摩爾濃度可以反映產(chǎn)品的質(zhì)量情況，滲透壓摩爾濃度過高會(huì)引起注射疼痛甚至溶血；金屬鋁作為一種對人體有害的元素，在體內(nèi)可造成蓄積，大容量注射液中的鋁離子直接進(jìn)入體內(nèi)，風(fēng)險(xiǎn)較大；抗氧劑作為重要輔料，在注射液中的添加可能引起副作用。建議增加以上安全性指標(biāo)，對現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行完善。

4.1.2 生產(chǎn)工藝對產(chǎn)品質(zhì)量影響較大滅菌工藝的選擇對產(chǎn)品質(zhì)量至關(guān)重要；檢驗(yàn)結(jié)果表明果糖二磷酸鈉對熱不穩(wěn)定，故生產(chǎn)工藝不宜采用終端滅菌或是熱處理等輔助滅菌工藝；采用無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品其產(chǎn)品質(zhì)量相對較好，采用熱處理輔助滅菌方式的2 家企業(yè)按標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)均出現(xiàn)了不合格的產(chǎn)品。

4.1.3 原輔料的選擇對終端產(chǎn)品質(zhì)量影響大果糖二磷酸鈉產(chǎn)品質(zhì)量與原料的質(zhì)量好壞密切相關(guān)，注射用粉針采用原料直接分裝，原料的質(zhì)量控制很大程度上影響終產(chǎn)品的質(zhì)量。探索性研究中發(fā)現(xiàn)質(zhì)控水平高的原料生產(chǎn)出來的制劑相應(yīng)產(chǎn)品質(zhì)量較好，如采用鋁含量低的原料生產(chǎn)的終產(chǎn)品鋁含量也相對較低；制劑生產(chǎn)過程中應(yīng)嚴(yán)格把控輔料的添加，如添加過多的Cl-可能導(dǎo)致滲透壓的增高；注射液中添加焦亞硫酸鹽作為抗氧劑易引起過敏等副反應(yīng)［10］。

4.1.4 貯存條件對產(chǎn)品質(zhì)量影響較大該產(chǎn)品要求在密封，在陰涼處（不超過20 ℃）貯藏，但是在實(shí)際使用過程很難保證。此次評價(jià)性抽驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)不合格的產(chǎn)品均在流通領(lǐng)域及醫(yī)療單位，果糖二磷酸鈉注射液同一批次不同地點(diǎn)抽樣產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果存在顯著差異。不合格的原因不排除是由于貯存或運(yùn)輸條件不當(dāng)造成的。

4.2 評價(jià)與建議

4.2.1 質(zhì)量總體評價(jià)通過標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)和探索性研究結(jié)果分析，注射用果糖二磷酸鈉產(chǎn)品質(zhì)量總體一般；注射液由于劑型和生產(chǎn)工藝等問題，不合格率較高，整體質(zhì)量較差。標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)中果糖二磷酸鈉注射液55批次產(chǎn)品共10 批次不合格，不合格率為18.2%；注射用果糖二磷酸鈉63 批次產(chǎn)品有1 批次不合格，不合格率為1.6%。進(jìn)一步探索性研究中果糖二磷酸鈉注射液55 批次產(chǎn)品共36 批次不合格，不合格率達(dá)到65.5%；注射用果糖二磷酸鈉63 批次產(chǎn)品共10 批次不合格，不合格率為15.9%。

4.2.2 建議（1）建議加快標(biāo)準(zhǔn)提高的進(jìn)度，提高相關(guān)質(zhì)量控制水平；在現(xiàn)有注射用果糖二磷酸鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，改進(jìn)鑒別、有關(guān)物質(zhì)檢查的方法，增加滲透壓摩爾濃度及鋁含量等項(xiàng)目；在現(xiàn)有果糖二磷酸鈉注射液標(biāo)準(zhǔn)上增加滲透壓摩爾濃度、有關(guān)物質(zhì)及鋁含量等項(xiàng)目。（2）建議監(jiān)管部門對果糖二磷酸鈉注射液原輔材料及處方工藝進(jìn)行專項(xiàng)核查；建議企業(yè)加強(qiáng)原輔料的質(zhì)量控制，考察處方的合理性。加強(qiáng)關(guān)鍵工藝指標(biāo)（滅菌工藝）的質(zhì)量控制，規(guī)范生產(chǎn)工藝及相關(guān)驗(yàn)證，確保藥品按合法的工藝進(jìn)行生產(chǎn)。（3）建議針對此類對儲(chǔ)存溫度有特殊要求的樣品，應(yīng)加強(qiáng)使用終端貯存條件的控制，強(qiáng)調(diào)抽樣及運(yùn)輸時(shí)保存條件，進(jìn)一步加強(qiáng)對此類熱不穩(wěn)定樣品在流通環(huán)節(jié)的監(jiān)控。

綜上所述，果糖二磷酸鈉注射劑質(zhì)量狀況存在不足，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)已不能滿足現(xiàn)階段對產(chǎn)品質(zhì)量有效控制的基本要求，在項(xiàng)目制定、方法選取等方面需提高。此外，建議生產(chǎn)企業(yè)嚴(yán)格控制生產(chǎn)環(huán)境，改進(jìn)生產(chǎn)工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量，以降低使用風(fēng)險(xiǎn)，保障人民用藥安全。