李慕白，王婷婷，張多加，吳效科，張明明

(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150000；2. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150000)

多囊卵巢綜合征(PCOS)是育齡婦女常見的內(nèi)分泌疾病，高胰島素血癥和胰島素抵抗(IR)是PCOS患者的重要特征，臨床中50%～75%的PCOS患者伴有不同程度的IR[1]。高胰島素血癥是促進(jìn)高雄激素血癥的原因之一，胰島素可以協(xié)同促黃體生成素(LH)促進(jìn)卵巢膜細(xì)胞雄激素的生成[2]。PCOS患者IR常伴隨著血脂代謝異常，同時(shí)還增加患肥胖癥、心血管疾病、2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)[3]。有研究表明，PCOS患者子宮內(nèi)膜局部IR可以降低子宮內(nèi)膜容受性，影響妊娠率[4]，甚至可能參與女性不孕癥的發(fā)展[5]，同時(shí)也增加了子宮內(nèi)膜異常增生的風(fēng)險(xiǎn)[6]，因此，PCOS患者子宮內(nèi)膜局部IR對生殖功能障礙和子宮內(nèi)膜異常增生有重要影響。小檗堿是從中藥黃連的根、莖、皮中提取的一種季銨鹽，其具有良好的降血糖和降血脂作用，是一種有效的胰島素增敏劑[7]，在改善糖脂代謝和增強(qiáng)胰島素敏感性方面與二甲雙胍作用相似，但其降低LH、總睪酮(T)和LH/卵泡刺激素(FSH)的作用優(yōu)于二甲雙胍[1]。目前研究認(rèn)為小檗堿可通過調(diào)節(jié)胰島素信號通路改善PCOS患者IR[8]，但其具體機(jī)制仍有待研究。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用胰島素聯(lián)合人絨毛膜促性腺激素(HCG)建立PCOS伴IR大鼠模型，通過觀察小檗堿對大鼠糖脂代謝、甾體激素水平及子宮組織胰島素信號通路相關(guān)靶基因和GLUT4基因表達(dá)的影響，探討了小檗堿改善PCOS全身IR及子宮組織局部IR的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只，鼠齡44～50 d，體重160～170 g，購自哈爾濱光大動(dòng)物養(yǎng)殖技術(shù)中心,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK(黑)2018-003。所有大鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由飲水，光照/暗時(shí)間為12 h/12 h循環(huán)，室溫20～24 ℃，相對濕度50%。

1.2主要試劑 精蛋白生物合成人胰島素注射液(丹麥諾和諾德公司，批號：J20171005)；注射用絨促性素(麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠，批號：200309)；鹽酸小檗堿片(東北制藥集團(tuán)沈陽第一制藥有限公司，批號：2190612)；鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20023370)。大鼠INS、T、LH、FSH、雄烯二酮(ASD)、17-羥孕酮(17-OHP)、性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)、雌激素(E2)ELISA試劑盒均購自上海舜冉生物科技有限公司。兔抗大鼠多克隆磷酸化IRS1-Ser307抗體和兔抗大鼠單克隆GSK3β抗體購自Cell Signaling Technology公司；兔抗大鼠單克隆磷酸化AKT1-S473抗體購自Abcam公司。qPCR試劑盒(KK4601)購自KAPA Biosystems公司。

1.3主要儀器 離心機(jī)(賽默飛Sorvall ST 40、SCILOGEX)，生化分析儀(邁瑞B(yǎng)S200)，正置光學(xué)顯微鏡(日本尼康NIKON ECLIPSE CI)，包埋機(jī)(武漢俊杰電子有限公司JB-P5)，酶標(biāo)分析儀(Infinite F50)，電泳儀(美國BioRad POWERPAC HC POWER SUPPLY、北京君意東方電泳設(shè)備有限公司)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(ABI公司 ABI7500)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法 隨機(jī)將大鼠分為空白組、PCOS組、小檗堿組、二甲雙胍組，每組15只。PCOS組、小檗堿組、二甲雙胍組參考文獻(xiàn)[9]采用胰島素+HCG頸背部皮下注射方法建立PCOS伴IR模型：造模第1天，每只大鼠頸背部皮下注射胰島素0.5IU/次，1次/d，每日增加0.5 IU，逐漸遞增至6.0 IU/d，第12天后維持6.0 IU/d劑量直至造模第22天；從造模第14天開始，每只大鼠皮下注射HCG 6.0 IU/d，分2次注射，直至造模第22天?？瞻捉M給予等劑量生理鹽水頸背部皮下注射。造模結(jié)束后，二甲雙胍組給予二甲雙胍溶液200 mg/kg灌胃，小檗堿組給予鹽酸小檗堿混懸液170 mg/kg灌胃，空白組和PCOS組大鼠每日給予等容量生理鹽水灌胃，均1次/d，連續(xù)31 d。

1.5.1動(dòng)情周期 造模結(jié)束后，對PCOS組、小檗堿組、二甲雙胍組大鼠進(jìn)行陰道涂片觀察陰道上皮角化程度，4 d為1個(gè)周期，連續(xù)觀察3個(gè)周期；灌胃第19天開始，再次對PCOS組、小檗堿組、二甲雙胍組大鼠進(jìn)行陰道涂片觀察陰道上皮角化程度，4 d為1個(gè)周期，連續(xù)觀察3個(gè)周期。

1.5觀察指標(biāo)及方法

(2)試驗(yàn)梁跨中撓度和支座處結(jié)合面滑移：均采用位移計(jì)。在梁端支座處布置一個(gè)位移計(jì)，用來測量支座處結(jié)合面滑移，試驗(yàn)梁跨中處布置一個(gè)位移計(jì)用來測量跨中撓度。

1.5.2口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT) 灌胃干預(yù)結(jié)束后第2天，各組大鼠禁食12 h后先空腹采血，再給予50%葡萄糖溶液3 g/kg灌胃，分別于灌胃后第60 min、120 min、180 min尾靜脈取血，檢測各時(shí)間段血糖水平。

1.5.3激素及血脂水平 灌胃干預(yù)結(jié)束后，禁食，次日對處于動(dòng)情間期的大鼠眼眶靜脈取血，全血離心后取血清置于-80 ℃冰箱，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清空腹胰島素(FINS)、LH、SHBG、FSH、E2、T、ASD、17-OHP水平，采用生化法檢測三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平。

1.5.4子宮病理形態(tài)觀察 各組大鼠采血后斷頸處死，取出子宮，每只大鼠取一半子宮用10%福爾馬林固定液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，行蘇木素-伊紅染色(HE)，并應(yīng)用3D HISTECH軟件，運(yùn)用腸絨毛高度和隱窩深度測量方法測量子宮各檢測位點(diǎn)(肌層厚度、腔上皮細(xì)胞高度、腺腔大小)。

1.5.5子宮組織中pIRS1-Ser307、pAKT-S473、GSK3β蛋白表達(dá)情況 采用Western blot法進(jìn)行檢測：從-80 ℃冰箱中取出各組大鼠液氮凍存的另一半子宮，按10%勻漿后取組織40 mg加入400 μL RIPA裂解液(磷酸化蛋白需同時(shí)加入磷酸酶抑制劑)，30000r/min勻漿10min，13000r/min離心20 min，取上清；用BCA法蛋白定量，上樣后電泳、轉(zhuǎn)膜，加入相應(yīng)一抗，4 ℃孵育過夜，洗膜后室溫孵育二抗40 min，化學(xué)發(fā)光法ECL顯影；圖片掃描，使用軟件Gel Image ststem ver.4.00(tanon,china)對圖像進(jìn)行灰度分析。

1.5.6大鼠子宮組織中GLUT4 mRNA表達(dá)情況 使用ncbi-primer合成引物，提取樣本總RNA，將1 mL TRIzol懸液劇烈振蕩20 s，按比例加入氯仿，劇烈振蕩15 s后室溫放置2 min，12 000 r/min離心10 min，將上層水相移到新管中，并加入1倍體積的70%乙醇混勻，將得到的溶液轉(zhuǎn)到Spin Column RM中，12 000 r/min離心20 s，丟棄廢液，進(jìn)行DNase 1消化后，將放回的Spin Column RM以12 000 r/min離心1 min，Spin Column RM轉(zhuǎn)管，加30 μL RNase-free Water，室溫放置1 min，12 000 r/min離心1 min；用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳質(zhì)檢；使用HiFiScript cDNA第一鏈合成試劑盒(康為世紀(jì)，CW2569)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；并使用ABI7500熒光定量PCR儀進(jìn)行Real-time PCR；采用2-△△ct方法進(jìn)行數(shù)據(jù)的相對定量分析。具體引物序列：GLUT4前向引物為5’-GGCCGGGACACTATACCCTAT-3’，反向引物為5’-GACCAGTGTCCCAGTCACTC-3’，長度138 bp；ACTb前向引物為5’-GCACCATGAAGATCAAGATCATT-3’，反向引物為5’-TAACAGTCCGCCTAGAAGCATT-3’，長度172 bp。

2 結(jié) 果

2.8各組大鼠子宮組織中GLUT4 mRNA表達(dá)情況PCOS組大鼠子宮組織中GLUT4 mRNA相對表達(dá)量明顯低于空白組(P<0.05)；小檗堿組和二甲雙胍組大鼠子宮組織中GLUT4 mRNA相對表達(dá)量均明顯高于PCOS組(P均<0.05)，小檗堿組和二甲雙胍組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖5。

從表1可以得出，由于主輔隔離帶沿線存在空間不連續(xù)、噴灑方向與路拱橫坡相反以及工程量大等缺點(diǎn)，對于安裝噴灑裝置難度更大、成本更高，安裝后噴灑的預(yù)期效果也不理想。相比較而言，噴灑裝置安裝在空間連續(xù)、施工作業(yè)面較少的中央隔離帶，不但工程量合理、施工較為方便，而且由于噴灑方向與路拱橫坡一致，噴灑的效果也會(huì)更好。因此，噴灑裝置安裝位置應(yīng)選在中央隔離帶。

2.2各組大鼠OGTT各時(shí)間段血糖水平比較 PCOS組大鼠OGTT各時(shí)間段血糖均明顯高于空白組(P均<0.05)；小檗堿組和二甲雙胍組大鼠OGTT各時(shí)間段血糖均明顯低于PCOS組(P均<0.05)，小檗堿組和二甲雙胍組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠OGTT各時(shí)間段血糖水平比較

2.7各組大鼠子宮組織中pIRS1-Ser307、pAKT-S473、GSK3β蛋白表達(dá)情況 與空白組比較，PCOS組大鼠子宮組織中pIRS1-Ser307、GSK3β蛋白相對表達(dá)量均明顯升高(P均<0.05)，pAKT-S473蛋白相對表達(dá)量明顯降低(P<0.05)；與PCOS組比較，小檗堿組和二甲雙胍組大鼠子宮組織中pIRS1-Ser307、GSK3β蛋白相對表達(dá)量均明顯降低(P均<0.05)，pAKT-S473蛋白相對表達(dá)量明顯升高(P<0.05)，小檗堿組和二甲雙胍組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見圖4。

表2 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠血清甾體激素水平比較

組別只數(shù)17-OHP/( x±s,ng/mL)SHBG/( x±s,nmol/L)T/( x±s,ng/dL)ASD/[M(P25,P75),nmol/L]空白組152.28±0.5358.27±3.7934.08±2.9611.25(10.58,11.46)PCOS組153.56±0.74①33.14±4.82①50.20±12.29①20.44(19.55,20.73)①小檗堿組152.80±0.36②47.72±2.55②③39.05±1.72②14.29(14.16,14.79)②③二甲雙胍組152.82±0.33②42.62±3.16②43.11±4.16②16.65(16.48,17.25)②

2.4各組大鼠血清FINS、HOMA-IR及血脂指標(biāo)比較 PCOS組大鼠血清FINS、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C水平均明顯高于空白組(P均<0.05)，HDL-C水平明顯低于空白組(P<0.05)。小檗堿組和二甲雙胍組大鼠血清FINS、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C水平均明顯低于PCOS組(P均<0.05)，HDL-C水平與PCOS組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；小檗堿組大鼠血清FINS水平明顯低于二甲雙胍組(P<0.05)，HOMA-IR、TG、TC、LDL-C、HDL-C水平與二甲雙胍組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表3。

根據(jù)本條規(guī)定，一是公布評估師名單的主體是有關(guān)全國性評估行業(yè)協(xié)會(huì)。二是公布的評估師名單應(yīng)當(dāng)包括所有通過有關(guān)專業(yè)類別評估師資格的評估專業(yè)人員。三是評估師名單應(yīng)當(dāng)實(shí)時(shí)更新，例如應(yīng)當(dāng)及時(shí)補(bǔ)充新通過資格考試的評估師，對已經(jīng)死亡或者喪失民事行為能力的評估師，應(yīng)當(dāng)及時(shí)從名單中去除。四是有關(guān)全國性評估行業(yè)協(xié)會(huì)應(yīng)當(dāng)在其網(wǎng)站上公布評估師名單，便于委托人和社會(huì)公眾查詢。

表3 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠血清FINS、HOMA-IR及血脂指標(biāo)比較

2.5各組大鼠子宮形態(tài)學(xué)表現(xiàn) 空白組大鼠子宮腔上皮細(xì)胞呈單層柱狀，未見空泡；子宮腺腔未見擴(kuò)張，腺腔內(nèi)無分泌液；子宮肌層厚度正常。PCOS組大鼠子宮腔上皮細(xì)胞高度增加，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核比例增高，可見假復(fù)層，少量上皮細(xì)胞胞質(zhì)空泡化；可見少量子宮腺擴(kuò)張；子宮肌層厚度增加。與PCOS組相比，小檗堿組和二甲雙胍組子宮腔局部上皮細(xì)胞高度降低，未見假復(fù)層，上皮細(xì)胞胞質(zhì)未見空泡；子宮腺腔未見擴(kuò)張；子宮肌層厚度變薄。見圖1～3。

推薦理由:本書為原中國殘疾人聯(lián)合會(huì)副主席王新憲回憶錄。文稿敘述平實(shí)感人，按時(shí)間順序記述了作者從1968年至2000年之間的生活和工作經(jīng)歷，即從中學(xué)時(shí)代到進(jìn)入社會(huì)，從工廠勞動(dòng)至殘聯(lián)工作的一段人生歷程。作者雖然從小就身體不便，但行文中卻沒有一絲怨天尤人和對人生及社會(huì)的不滿，整篇文稿都充滿了積極向上的正能量和對親人朋友的感激之情。

圖1 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠子宮腔上皮細(xì)胞HE染色表現(xiàn)(×400)

圖2 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠子宮腺腔HE染色表現(xiàn)(×400)

圖3 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠肌層厚度HE染色表現(xiàn)(×100)

2.6各組大鼠子宮肌層厚度、腔上皮細(xì)胞高度和腺腔大小比較 PCOS組大鼠子宮肌層厚度、腔上皮細(xì)胞高度和腺腔大小均明顯高于空白組(P均<0.05)；小檗堿組和二甲雙胍組大鼠子宮肌層厚度、腔上皮細(xì)胞高度和腺腔大小均明顯低于PCOS組(P均<0.05)，小檗堿組和二甲雙胍組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表4。

表4 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠子宮肌層厚度、腔上皮細(xì)胞高度和腺腔大小比較[M(P25，P75)]

2.3各組大鼠血清甾體激素水平比較 與空白組比較，PCOS組大鼠血清LH、17-OHP、T、ASD水平和LH/FSH均明顯升高(P均<0.05)，SHBG水平明顯降低(P<0.05)。與PCOS組比較，小檗堿組和二甲雙胍組大鼠血清LH、17-OHP、T、ASD水平和LH/FSH均明顯降低(P均<0.05)，SHBG水平均明顯升高(P<0.05)；與二甲雙胍組比較，小檗堿組大鼠血清LH、ASD水平更低(P均<0.05)，SHBG水平更高(P<0.05)；各組大鼠血清FSH、E2水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

圖4 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠子宮組織胰島素信號通路相關(guān)靶基因蛋白表達(dá)情況

2.1各組大鼠動(dòng)情周期 造模結(jié)束后，光鏡下觀察可見大鼠陰道上皮細(xì)胞持續(xù)處于以大量白細(xì)胞為主的動(dòng)情間期，提示造模后大鼠動(dòng)情周期紊亂，造模成功。小檗堿組和二甲雙胍組大鼠灌胃19 d后陰道涂片可見以角化上皮細(xì)胞為主的動(dòng)情期，逐漸恢復(fù)4～5 d的正常動(dòng)情周期。

下丘腦-垂體功能障礙是PCOS的病因之一[18]，下丘腦Kisspeptin是內(nèi)分泌和代謝信號的靶標(biāo)[19]。Esparza等[20]報(bào)道，PCOS小鼠Kisspeptin信號水平升高，血清LH增加。張多加等[21]研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者血清中Kisspeptin濃度和脈沖頻率明顯升高，而Kisspeptin對葡萄糖刺激的胰島素分泌有促進(jìn)作用，小檗堿可能通過下丘腦-垂體軸降低血清LH水平，進(jìn)而改善PCOS生殖內(nèi)分泌紊亂。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小檗堿組和二甲雙胍組大鼠血清LH、17-OHP、T、ASD水平和LH/FSH均明顯低于PCOS組，SHBG水平均明顯高于PCOS組；且小檗堿組大鼠血清LH、ASD水平明顯低于二甲雙胍組，SHBG水平明顯高于PCOS組。提示小檗堿可明顯改善PCOS伴IR大鼠的生殖內(nèi)分泌紊亂。

圖5 空白組和多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗各組大鼠子宮組織中GLUT4 mRNA相對表達(dá)量

3 討 論

IR作為PCOS患者的特征之一，可導(dǎo)致PCOS患者出現(xiàn)肥胖、多毛、痤瘡、黑棘皮、不孕等臨床特征，增加PCOS患者患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)[10]。有研究發(fā)現(xiàn)，在胰島素聯(lián)合HCG的干預(yù)下，成年大鼠出現(xiàn)卵泡囊性擴(kuò)張[11]、卵巢局部組織IR[12]、糖代謝障礙和高胰島素血癥等PCOS特征，且還能導(dǎo)致大鼠卵巢和子宮出現(xiàn)形態(tài)改變和功能障礙[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，造模后大鼠動(dòng)情周期和糖脂代謝紊亂，LH/FSH和HOMA-IR均明顯增高，大鼠出現(xiàn)高雄激素血癥，子宮出現(xiàn)形態(tài)學(xué)改變，pIRS1-Ser307高表達(dá)，證實(shí)胰島素聯(lián)合HCG法造模的大鼠呈現(xiàn)PCOS伴IR狀態(tài)。

小檗堿對PCOS患者生殖功能具有改善作用，可調(diào)節(jié)月經(jīng)周期，其誘導(dǎo)排卵的效果達(dá)到一線促排卵藥克羅米芬的水平[14-15]。小檗堿還可通過調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-卵巢軸(HPOA)減少類固醇激素的合成和卵巢芳香化酶的表達(dá)[16]，改善PCOS患者的IR狀態(tài)，減輕體重[17]。臨床觀察發(fā)現(xiàn)小檗堿不良反應(yīng)短暫且溫和，在PCOS患者的長期治療中具有安全性，具有廣闊的應(yīng)用前景[14]。

由于室內(nèi)外會(huì)有較大溫差的存在，所以導(dǎo)致建筑在使用過程中，由于外圍護(hù)結(jié)構(gòu)是直接和外界接觸的，彼此之間會(huì)存在熱傳導(dǎo)的情況。在這種情況下，圍護(hù)結(jié)構(gòu)中的一些部位如果對應(yīng)的傳導(dǎo)系數(shù)存在差異，則很容易發(fā)生外部溫度較高，材料內(nèi)部溫度較低的情況。在這種情況下，熱傳導(dǎo)很難快速完成，所以在熱傳導(dǎo)的過程中就會(huì)有能量損失的情況發(fā)生。也正是因?yàn)槿绱?，所以有一些建筑在使用過程中會(huì)有較大的能耗出現(xiàn)。

小說的創(chuàng)作離不開“時(shí)空”，也離不開小說故事情節(jié)的授予者，即小說中的人物?？臻g敘事的手法雖然學(xué)界沒有明確界定，但從《山本》的創(chuàng)作可以發(fā)現(xiàn)三類空間敘事創(chuàng)作手法的痕跡，即空間并置敘事、人物塑造的空間表征法以及空間敘事的另類表達(dá)——圖像敘事三種手法。通過結(jié)合文本對三種空間敘事的手法分析，利于進(jìn)一步研究空間敘事在《山本》中呈現(xiàn)的狀況。

PCOS患者多存在糖脂代謝紊亂及高胰島素血癥。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PCOS組大鼠血清FINS、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C水平均明顯高于空白組，HDL-C水平明顯低于空白組，證實(shí)PCOS伴IR大鼠存在明顯高胰島素血癥和糖脂代謝紊亂；小檗堿組大鼠血清FINS、HOMA-IR、TG、TC、LDL-C水平均明顯低于PCOS組，說明小檗堿可明顯改善PCOS伴IR大鼠高胰島素血癥和糖脂代謝紊亂。

（2）凍融損害。凍融損害主要發(fā)生在寒冷地區(qū)的春融季節(jié)，路面結(jié)構(gòu)中滯留的水在冬季環(huán)境溫度作用下凝固成冰，體積膨脹，影響瀝青路面的骨架結(jié)構(gòu)以及瀝青與石料的黏附性，導(dǎo)致瀝青面層粒料的脫落，形成松散、麻面等病害。而當(dāng)環(huán)境溫度升高時(shí)，結(jié)構(gòu)層中的冰融化成水，在交通荷載的重復(fù)作用下，原有的病害擴(kuò)展速度加劇，最終形成坑槽。

IR作為PCOS的代謝特征，可影響PCOS患者子宮內(nèi)膜容受性[3]。IR可導(dǎo)致葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)水平降低，致使子宮內(nèi)膜細(xì)胞葡萄糖供應(yīng)不足，從而引起子宮內(nèi)膜發(fā)育障礙[22]，而且IR引起的雄激素過多可以通過干擾葡萄糖代謝來抑制子宮內(nèi)膜細(xì)胞的生長和活性，從而抑制蛻膜的分化[3]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，POCS組大鼠子宮腔上皮細(xì)胞高度增加、肌層增厚和腺體擴(kuò)張，提示胰島素聯(lián)合HCG造模的PCOS伴IR大鼠子宮組織具有增生趨勢；小檗堿組大鼠子宮腔上皮細(xì)胞高度降低，肌層變薄，未見腺體擴(kuò)張，證明小檗堿可以改善PCOS伴IR大鼠子宮異常增生狀態(tài)。哺乳動(dòng)物雷帕霉素(mTOR)是AMPK的下游靶標(biāo)之一，參與細(xì)胞增殖，mTOR活性增加可導(dǎo)致子宮內(nèi)膜增生[23]，AMPK的激活可以抑制mTOR通路，抑制子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖[24]。IRS是mTOR的下游成分，mTOR能夠磷酸化IRS蛋白在胰島素信號傳導(dǎo)途徑中的幾個(gè)殘基，從而影響胰島素信號傳導(dǎo)，mTOR被抑制后可以誘導(dǎo)IRS1表達(dá)，并消除PI3K/AKT/mTOR途徑的反饋抑制作用，激活A(yù)KT，降低細(xì)胞增殖活性[25]。故本研究認(rèn)為小檗堿是通過AMPK途徑，抑制胰島素信號通路上的增殖基因mTOR，并激活上游胰島素信號通路，從而逆轉(zhuǎn)子宮形態(tài)異常增生。

研究發(fā)現(xiàn)PCOS患者的PI3K/AKT胰島素信號通路出現(xiàn)傳導(dǎo)障礙，GSK3β活性升高，AKT活性降低，糖原合成異常，胰島素對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)作用下降，導(dǎo)致糖代謝障礙，出現(xiàn)IR[26]；而AKT的活性與GLUT4的表達(dá)有關(guān)，GLUT4低表達(dá)可影響子宮內(nèi)膜營養(yǎng)供應(yīng)[27]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PCOS組大鼠子宮組織中pIRS1-Ser307、GSK3β蛋白相對表達(dá)量均明顯升高，pAKT-S473蛋白和GLUT4 mRNA相對表達(dá)量明顯降低，提示子宮細(xì)胞糖代謝能力受損；與PCOS組比較，小檗堿組和二甲雙胍組大鼠子宮組織中pIRS1-Ser307、GSK3β蛋白相對表達(dá)量均明顯降低，pAKT-S473蛋白和GLUT4 mRNA相對表達(dá)量明顯升高，提示小檗堿可以調(diào)節(jié)IRS1/PI3K/AKT/GLUT4途徑，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，改善PCOS高胰島素血癥、IR及子宮內(nèi)膜容受性。

綜上所述，小檗堿不僅能改善PCOS伴IR大鼠高胰島素血癥和糖脂代謝及生殖代謝紊亂，還可調(diào)節(jié)大鼠子宮胰島素信號通路IRS1、AKT、GSK3β和GLUT4的表達(dá)，改善子宮局部IR，從而改善子宮內(nèi)膜容受性和子宮異常增生狀態(tài)。

3.朗讀課文。在課前，學(xué)生一般都不太明白該怎么學(xué)習(xí)語文，因此，可以通過預(yù)習(xí)，讓學(xué)生把課文讀熟，甚至能夠朗誦，從而使學(xué)生在進(jìn)行課文朗誦時(shí)了解課文的內(nèi)容，并對課文內(nèi)容有所體會(huì)。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。