楊 雪，許亞麗，張 蕾，古愛虎

在我國，肺癌發(fā)病率和病死率逐年上升，占癌癥死亡比例達(dá)20%以上[1]。非小細(xì)胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)發(fā)生早期無特異性臨床癥狀，當(dāng)確診時(shí)大多處于中晚期，且容易發(fā)生侵襲或轉(zhuǎn)移，患者5 年生存率較低[2]。胸苷激酶1(thymidine kinase 1,TK1)是一種DNA 修復(fù)酶，最初是在胎兒組織中被發(fā)現(xiàn)[3]。TK1 參與DNA 合成與修復(fù)，與細(xì)胞增殖有關(guān)，其可反映腫瘤治療療效和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，在多種實(shí)體腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，這可能與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化存在關(guān)聯(lián)[4]。TK1作為常見的腫瘤標(biāo)志物，其在血清或胸腔積液中的變化在早期肺癌篩查中具有重要意義。血清鐵蛋白(serum ferritin,SF)一種以無機(jī)鐵化合物為輔基的大分子糖蛋白，通常在腫瘤患者體內(nèi)合成活躍，使得濃度急劇增加，常作為腫瘤的血清標(biāo)志物[5]；越來越多的研究提示SF 對肺癌的診斷靈敏度較高[6]。糖類抗原199(carbohydrate antigen 199,CA199)以唾液黏蛋白的形式存在于血清中，在正常情況下，外周血中含量極低，但當(dāng)發(fā)生腫瘤細(xì)胞異常分化時(shí)，血清CA199水平會(huì)明顯上升[7]。CA199 在NSCLC 患者癌組織中的表達(dá)明顯多于癌旁組織[8]，這對早期診斷肺癌有重要價(jià)值。NSCLC 患者早發(fā)現(xiàn)、早診斷及早治療，已成為提高疾病療效、降低病死率和提高生存質(zhì)量的關(guān)鍵。血清腫瘤標(biāo)志物檢測作為非侵襲性檢查，為早診斷早治療提供了可能，單一指標(biāo)檢測難滿足臨床精準(zhǔn)診斷，且三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測的研究尚缺乏。因此本研究旨在探討血清TK1、SF、CA199聯(lián)合檢測對于NSCLC診斷的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月-2021 年12 月蕪湖市第一人民醫(yī)院收治的90例NSCLC 患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)過胸部CT 檢查及病理學(xué)檢查確診；②在獲取血清實(shí)驗(yàn)檢測前患者無放化療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重心肝腎疾?。虎诤喜⑵渌麗盒阅[瘤；③感染性疾?。虎苊庖呦到y(tǒng)疾病。NSCLC組有男性49 例，女性41 例；年齡40～82 歲，平均(61.34±8.70)歲；病理分型：鱗癌45 例，腺癌40 例，其他5 例；TNM 分期：I 期12 例，II 期34 例，III 期25例，IV 期19 例；分化程度：42 例低分化，29 例中分化，19 例高分化。選取同期收治的肺部良性疾病患者患者90例作為良性疾病組，有男性48例，女性42 例；年齡39～82 歲，平均(62.27±6.33)歲。選取同期到我院進(jìn)行健康體檢的人群90 例作為對照組，有男性49 例，女性41 例；年齡38～82 歲，平均(61.53±5.16)歲。3 組研究對象的一般資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)：20160108），所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法 抽取所有患者清晨空腹靜脈血5 mL，室溫靜置1 h，離心儀（貝克庫曼爾特，Microfuge 20R）以3 800 r/min，離心半徑8 cm，離心10 min 后分離獲得血清。采用TK-1 檢測試劑盒（上海臻科生物科技有限公司）對TK-1 進(jìn)行檢測，檢測方法為化學(xué)發(fā)光法。使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀（安圖公司，Auto-mo A2000）檢測CA199及SF水平。聯(lián)合檢測的陽性標(biāo)準(zhǔn)為三項(xiàng)指標(biāo)有一項(xiàng)或一項(xiàng)以上檢測結(jié)果為陽性即為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 23.0 軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；三組比較采用方差分析(F檢驗(yàn))，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用多因素Logistic回歸分析篩選NSCLC疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。診斷效能評價(jià)以靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度表示，以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)來分析，計(jì)算各診斷效能指標(biāo)，同時(shí)制作受試者工作特征(ROC)曲線，并計(jì)算曲線下面積。當(dāng)P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組間一般資料比較 三組研究對象的年齡、性別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。在病理分型、TNM 分期、分化程度方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.551、4.541、4.530，P＜0.05)。見表1。

表1 三組研究對象一般資料比較[n(%)]

2.2 三組間血清TK1、SF、CA199水平的比較 NSCLC組患者血清TK1、SF、CA199 水平均顯著高于良性疾病組和對照組(F=32.274、27.783、20.135，均P＜0.05)。與對照組比較，良性疾病組患者血清SF 水平高于對照組（P＜0.05），TK1、CA199 水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見表2。2.3 Logistic 多因素回歸分析 以是否患有NSCLC疾病作為因變量（否=0、是=1），以TK1、SF、CA199等單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)指標(biāo)為自變量，采用逐步回歸法進(jìn)行二元多因素Logistic 回歸分析，結(jié)果顯示，TK1、SF、CA199 是影響患者患有NSCLC疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=1.589、1.384、1.493，P＜0.05)，得到的Logistic 回歸方程為Pre=1/[1+e-(0.463*TK1+0.325*SF+0.401*CA)]。見表3。

表2 三組間血清TK1、SF、CA199水平的比較

表3 影響NSCLC的多因素Logistic回歸分析

2.4 三者聯(lián)合對NSCLC 診斷價(jià)值的比較 應(yīng)用ROC 曲線分別對TK1、SF、CA199 以及Logistic 回歸方程得到的聯(lián)合指標(biāo)Pre 進(jìn)行ROC 曲線分析，其中聯(lián)合指標(biāo)Pre 的ROC 曲線下面積最大，表明該聯(lián)合指標(biāo)的區(qū)分度較其他三個(gè)診斷模型更好。

此外，表4 為這4 個(gè)指標(biāo)診斷NSCLC 的靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度。其中，聯(lián)合指標(biāo)Pre 的診斷靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度最高，分別為82.8%、77.8%、88.5%，顯著高于利用TK1、SF 及CA199 單獨(dú)診斷的結(jié)果(P＜0.05)。

表4 4個(gè)指標(biāo)對NSCLC診斷價(jià)值的比較(%)

圖1 4個(gè)指標(biāo)對NSCLC的ROC的曲線分析

3 討論

NSCLC是最常見的一種肺癌類型，約占肺癌患者的80%以上。NSCLC 具有早期隱匿、缺乏典型性的特點(diǎn)，因此其早期診斷率很低，導(dǎo)致疾病的預(yù)后差、病死率高[9]。目前臨床上組織病理學(xué)檢測的特異性較高，但是該方法是一種侵入性操作，取材難度較大，患者的耐受性差，導(dǎo)致靈敏度不高。近年來，隨著分子生物學(xué)的快速發(fā)展，通過對腫瘤標(biāo)志物的檢測，能有效對腫瘤疾病進(jìn)行篩查、診斷、效果評估及預(yù)后監(jiān)測，該方法操作簡單，且患者創(chuàng)傷小，對臨床有重要應(yīng)用價(jià)值[10]。

TK 是嘧啶代謝循環(huán)中的一類關(guān)鍵酶，可催化脫氧胸苷形成脫氧胸苷酸，屬于DNA 修復(fù)酶，與細(xì)胞增殖有關(guān)，當(dāng)TK1 含量和活性增加時(shí)，細(xì)胞DNA合成速度加快，在多種實(shí)體腫瘤中均可檢測到高表達(dá)[11]。王總飛等[12]研究表明，NSCLC 患者血清SF、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、STK1水平明顯上升，三者之間呈正相關(guān)，協(xié)同參與NSCLC 的發(fā)生、進(jìn)展。SF 是人體內(nèi)鐵代謝的重要蛋白質(zhì)，血清鐵主要存在于肝、脾、骨髓中，在健康人體內(nèi)，血清SF 含量很少，當(dāng)發(fā)生炎癥、慢性疾病、惡性腫瘤時(shí)，SF 表達(dá)會(huì)上升[13]。NSCLC 患者血清SF 水平高表達(dá)直接影響了腫瘤增殖和侵襲[14]。莫飛等[15]研究表明，肺癌患者的SF 水平顯著升高，聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物可顯著提高診斷特異度和準(zhǔn)確度。CA199 是一種黏蛋白型糖類抗原，無器官特異性、也無腫瘤特異性，起血清含量在多種惡性腫瘤中均顯著升高。在正常情況下，血清中CA199 含量極低，但是出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的異常分化情況時(shí)，CA199會(huì)大量合成進(jìn)入外周血[16]。王莉等[17]研究表明，NSCLC 組患者CA199 水平顯著高于肺良性病變組與健康對照組；Ⅲ～Ⅳ期NSCLC 患者CA199 水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期；生存時(shí)間≥1 年患者CA199 水平顯著低于生存時(shí)間＜1 年患者，CA199 聯(lián)合其他指標(biāo)的檢測對NSCLC 的早期診斷、分期及預(yù)后判斷具有一定臨床價(jià)值。

本文研究結(jié)果表明，NSCLC 組患者血清TK1、SF、CA199 水平均顯著高于良性疾病組和對照組，提示TK1、SF、CA199與NSCLC疾病有密切關(guān)系，同時(shí)血清腫瘤標(biāo)志物的檢測對NSCLC 的輔助診斷具有一定鑒別意義?；貧w分析發(fā)現(xiàn)TK1、SF、CA199是影響患者患有NSCLC 疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這可能原因是TK1參與細(xì)胞周期調(diào)控，與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化有關(guān)，其能導(dǎo)致S 期調(diào)控異常，G/S 期時(shí)，TK1水平持續(xù)上升，到M 期時(shí)水平達(dá)到最高值[18]；致癌因子能影響機(jī)體的鐵代謝過程，導(dǎo)致鐵排出量減少，鐵儲(chǔ)備量增多，因此血清SF 升高；腫瘤細(xì)胞會(huì)合成大量CA199，并隨著癌細(xì)胞的凋亡進(jìn)入外周血，導(dǎo)致其血清水平上升。以上三項(xiàng)指標(biāo)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展均有密切聯(lián)系，但是通過不同的途徑，后續(xù)有待進(jìn)一步研究。本研究探討了TK1、SF 及CA199 三者聯(lián)合檢測對于NSCLC 診斷的臨床價(jià)值，結(jié)果顯示，3 項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測的AUC 最大，為0.845，三指標(biāo)聯(lián)合靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度分別為82.8%、77.8%、88.5%，這均顯著高于TK1、SF 及CA199 單獨(dú)診斷結(jié)果。說明三者聯(lián)合檢測對NSCLC 的診斷價(jià)值及臨床效能評價(jià)均優(yōu)于三指標(biāo)單獨(dú)檢測，本研究認(rèn)為，聯(lián)合檢測能夠起到互補(bǔ)作用，提高診斷敏感度和準(zhǔn)確度，三者聯(lián)合檢測時(shí)對NSCLC的診斷更具有價(jià)值，這可能作為臨床篩查和治療NSCLC提供新的參考指標(biāo)和方案。

綜上所述，血清TK1、SF 及CA199 聯(lián)合檢測對NSCLC早期診斷具有重要的臨床意義；聯(lián)合檢測對于早期發(fā)現(xiàn)、早期干預(yù)以及提高NSCIC患者的生存期具有一定的臨床指導(dǎo)性價(jià)值。