董清，杜攀，李培

（山東省聊城市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 聊城 252000）

肉豆蔻作為藥材使用始載于唐代王燾《外臺(tái)秘要方》，具有溫中行氣、澀腸止瀉之功效，用于脾胃虛寒、久瀉不止、脘腹脹痛、食少嘔吐［1］。其炮制方法最早見于南北朝劉宋《雷公炮炙論》的面煨法［2］，后又出現(xiàn)麩煨、濕紙煨、滑石粉炒、麩炒、蛤粉炒、制霜等法。2005年及以前版本《中國(guó)藥典（一部）》中炮制方法均為面煨法，2010年版以后改為麩煨法［3］?！渡綎|省中藥飲片炮制規(guī)范》采用面煨法［4］，雖操作煩瑣，面結(jié)不易除去，但該炮制工藝沿用已久，且面煨能除去部分油脂，免于滑腸，減輕刺激，增強(qiáng)固腸止瀉功效，故有必要繼續(xù)保留。肉豆蔻主要含有揮發(fā)性成分和非揮發(fā)性成分，非揮發(fā)性成分中去氫二異丁香酚具有較強(qiáng)的抑菌、抑制肝內(nèi)脂質(zhì)氧化作用，為肉豆蔻的活性成分［5］，且在煨制過(guò)程中不易揮發(fā)。本研究中建立了測(cè)定面煨肉豆蔻中去氫二異丁香酚含量的高效液相色譜法［6?7］，以提高面煨肉豆蔻的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200sl型色譜工作站（美國(guó)安捷倫科技公司），配有G1314B型紫外檢測(cè)器；BT 125D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，精度為0.1 mg）；KQ?500GVDV型雙頻恒溫?cái)?shù)控超聲提取儀（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為80 kHz）。

1.去氫二異丁香酚A.對(duì)照品溶液B.供試品溶液C.空白溶劑圖1高效液相色譜圖1.DehydrodiisoeugenolA.Reference solution B.Test solution C.Blank solventFig.1 HPLC chromatograms

1.2 試藥

去氫二異丁香酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為111838?201804，含量為98.6%）；甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純；肉豆蔻（安徽省毫州藥材市場(chǎng)，共10批，產(chǎn)地為廣西），經(jīng)山東省聊城市檢驗(yàn)檢測(cè)中心李廣華主管中藥師鑒定為正品，均符合2020年版《中國(guó)藥典（一部）》標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 面煨肉豆蔻制備

取面粉，用清水和成面團(tuán)，壓成薄餅狀，用面餅逐個(gè)包裹肉豆蔻，皮厚1.5～3.0 mm［8］，涼至半干，投入已炒熱的滑石粉或沙中，煨炒至面皮呈焦黃色，透出芳香氣味時(shí)取出，篩去滑石粉或沙子，剝?nèi)ッ嫫?，放涼；或趁熱剝?nèi)ッ嫫?，及時(shí)切成厚片，放涼。共制備10批（分別編號(hào)為1?10號(hào)）。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇?水溶液（72∶28，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：274 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)以去氫二異丁香酚峰計(jì)不低于3 000，在此色譜條件下的色譜圖見圖1。

2.3 溶液制備

取去氫二異丁香酚對(duì)照品25 mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容至50 mL容量瓶中，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；精密量取3 mL，加甲醇定容至50 mL容量瓶中，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取樣品粉末（過(guò)2號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz，溫度為2～10℃）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，即得供試品溶液。以甲醇作為空白溶劑。

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取2.3項(xiàng)下對(duì)照品貯備液1，2，3，4，5，6 mL，分別置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以去氫二異丁香酚對(duì)照品的進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=3 675.9X?4.921 3（r=1.000 0，n=6）。結(jié)果表明，去氫二異丁香酚對(duì)照品進(jìn)樣量在0.132 0～0.792 0μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.3項(xiàng)下對(duì)照品溶液10μL，按2.2項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.71%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（編號(hào)為7號(hào)），按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行6份，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果的RSD為0.78%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：吸取2.3項(xiàng)下供試品溶液10μL，分別于0，6，12，18，24，30，36 h時(shí)按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為0.67%（n=7），表明供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（編號(hào)為7號(hào)，去氫二異丁香酚含量為0.228%）0.5 g，精密稱定，共12份，置50 mL容量瓶中，分別加入去氫二異丁香酚對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0.105 6 mg/mL）7.5，15.0 mL，各6份，加甲醇適量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz，溫度為2～10℃）30 min，加甲醇定容，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得待測(cè)溶液。按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

2.5 樣品含量測(cè)定

取10批樣品（編號(hào)為1?10），依法制備供試品溶液，分別吸取上述溶液10μL，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果10批樣品的含量分別為0.16%，0.21%，0.19%，0.40%，0.18%，0.39%，0.23%，0.24%，0.35%，0.36%，平均含量為0.27%。

3 討論

肉豆蔻是種子類藥材，含有大量脂肪類成分，且沸點(diǎn)極低，室溫放置即可析出油脂，檢測(cè)時(shí)易堵塞液相色譜儀。曾采用正己烷提取油脂，再用甲醇超聲提取的方法處理樣品，后改用直接超聲提取、冰箱冷藏再過(guò)濾的方法及低溫超聲提取過(guò)濾的方法，測(cè)得含量差異不大，故最終選擇低溫超聲提取方法。

本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性和穩(wěn)定性均良好，可用于測(cè)定面煨肉豆蔻中去氫二異丁香酚的含量。