梅 靜，馬 琳，徐桂萍

（新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院麻醉科，新疆 烏魯木齊 830001）

孕中期是胎兒中樞神經(jīng)等功能組織形成的關(guān)鍵階段，孕期手術(shù)會(huì)導(dǎo)致處于孕中期胎兒的中樞神經(jīng)發(fā)育遭受不利影響的可能性增加［1］。更多的臨床研究和動(dòng)物研究均關(guān)注了孕中期手術(shù)中麻醉劑暴露對(duì)新生兒認(rèn)知功能的影響及其內(nèi)在作用機(jī)制［2?3］。孕中期使用麻醉劑對(duì)動(dòng)物胎兒腦部發(fā)育及空間學(xué)習(xí)能力和記憶能力的影響至今尚無(wú)統(tǒng)一結(jié)論［4?5］。丙泊酚是外科手術(shù)中使用頻率較高的靜脈麻醉劑，可能對(duì)子代的長(zhǎng)期行為產(chǎn)生影響，但結(jié)果仍存在不確定性［6］。研究表明，妊娠期暴露中高劑量的丙泊酚對(duì)子代空間學(xué)習(xí)與記憶能力的影響明顯高于低劑量［7］。增強(qiáng)海馬突觸可塑性可通過(guò)增加神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子的水平介導(dǎo)神經(jīng)發(fā)生，從而改善空間學(xué)習(xí)和記憶能力［8］。突觸后密度蛋白95（PSD95）和生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43（GAP43）是突觸形成和神經(jīng)發(fā)育過(guò)程中必不可少的支架蛋白和促生長(zhǎng)蛋白。組蛋白去乙?；?（HDAC2）?環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）介導(dǎo)天冬氨酸受體亞型（NR2B）信號(hào)在學(xué)習(xí)和記憶缺陷、抑郁、癲癇和阿爾茨海默病中起著關(guān)鍵作用［9］，且NR2B的C末端可與PSD95蛋白PDZ域特異性結(jié)合。目前，丙泊酚暴露引發(fā)的子代學(xué)習(xí)和記憶缺失中HDAC2?CREB?NR2B信號(hào)通路扮演的角色仍不清楚。本研究中探討了孕中期大鼠母體丙泊酚暴露對(duì)子代海馬區(qū)HDAC2?CREB?NR2B信號(hào)通路的影響，以及該信號(hào)通路對(duì)子代空間學(xué)習(xí)和記憶能力的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動(dòng)物

儀器：XR?XM101型視頻跟蹤系統(tǒng)（上海移動(dòng)數(shù)據(jù)有限公司）；ECGenieTM型無(wú)創(chuàng)電遙測(cè)系統(tǒng)（美國(guó)Mouse Specifics公司）。

試藥：GAP43（批號(hào)為20200102X），PSD95（批號(hào)為20180982B），HDAC2（批號(hào)為20190709X），磷酸化HDAC2（p?HDAC2，批號(hào)為20190904A），CREB（批號(hào)為20190315Y），磷 酸 化CREB（p?CREB，批 號(hào) 為20200992X），NR2B（批號(hào)為20190903B），內(nèi)參蛋白磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）的第一抗體（批號(hào)為20200476Y）和對(duì)應(yīng)第二抗體羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）H＆L（HRP，批號(hào)為A2021030X1），均購(gòu)于美國(guó)Abcam公司；中性紅染色試劑盒（批號(hào)為19?3X?09?03），丙泊酚（批號(hào)為2012?02?12X），均購(gòu)于美國(guó)Sigma Aldrich公司；羅米地辛（美國(guó)Selleck化學(xué)公司，批號(hào)為12R?C?03）。

動(dòng)物：36只SPF級(jí)SD雌性大鼠，6周齡，體質(zhì)量（150±10）g；12只雄性大鼠，6周齡，體質(zhì)量（170±10）g，均購(gòu)于新疆維吾爾自治區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，生產(chǎn)許可證號(hào)為SYXK（新）2016?0001，動(dòng)物合格證號(hào)為NO.65000200000364。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)于（24±1）℃的環(huán)境中，光照/黑暗周期為12 h/12 h，動(dòng)物自由獲得食物和水。所有實(shí)驗(yàn)程序和實(shí)驗(yàn)方案均獲得我院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并按美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用指南》原則，使所用動(dòng)物的總數(shù)及動(dòng)物的痛苦最小化。

1.2 方法

1.2.1 孕鼠的麻醉劑暴露、剖腹探查術(shù)

前1 d的18：00，將3只雌鼠與1只隨機(jī)選擇的雄鼠關(guān)于一籠中［2］，共12籠，自由交配，24 h后通過(guò)陰道涂片檢測(cè)到雌鼠的陰道栓子或精子，認(rèn)為雌鼠在孕0 d，以此推算并選擇孕期為14 d的孕鼠36只。于自制透明塑料瓶中固定孕期為14 d的孕鼠，行頸靜脈穿刺，放置靜脈導(dǎo)管，并將孕鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和丙泊酚組，各18只。對(duì)照組經(jīng)頸靜脈注射生理鹽水（2 mL/kg），丙泊酚組經(jīng)頸靜脈注射1.5%丙泊酚（2 mL/kg）行麻醉誘導(dǎo)，以20 mg/（kg·h）的速率持續(xù)靜脈泵注丙泊酚，并行剖腹探查術(shù)，麻醉時(shí)間為4 h。

剖腹探查術(shù)：丙泊酚組大鼠麻醉誘導(dǎo)后剪去腹毛，暴露皮膚，使用75%乙醇消毒3遍，以0.125%布比卡因0.2 mL局部麻醉，行腹部3 cm縱切。無(wú)菌探查腹腔范圍，包括膈肌（肝臟）、盆腔、膀胱、兩側(cè)腹中線水平（脾臟或腎臟）。用2 mL 37℃無(wú)菌生理鹽水沖洗腹腔，吸凈液體，用75%乙醇消毒切口，用4?0縫線間斷縫合腹膜和肌層，用3?0縫線間斷縫合皮膚并消毒，擦干切口血漬，于25 min內(nèi)完成手術(shù)。大鼠蘇醒后放回原籠，繼續(xù)妊娠。

監(jiān)測(cè)：丙泊酚組動(dòng)物麻醉后用ECGenieTM心電圖分析系統(tǒng)監(jiān)測(cè)心電圖、血壓、血氧飽和度，麻醉結(jié)束后立即取母鼠髂外靜脈行血?dú)夥治?。質(zhì)控：以翻正反射消失作為動(dòng)物麻醉誘導(dǎo)成功的標(biāo)準(zhǔn)。孕鼠麻醉期間監(jiān)測(cè)血氧飽和度、血壓、心率，剔除血氧飽和度低于95%或平均動(dòng)脈壓超出或低于基礎(chǔ)值20%的動(dòng)物。最終從對(duì)照組和丙泊酚組中隨機(jī)選擇12只血氧飽和度、血壓、心率均正常的孕中期大鼠，繼續(xù)妊娠。

生殖發(fā)育參數(shù)：從孕0 d開始到子代出生后，統(tǒng)計(jì)兩組大鼠的妊娠期，以及子代大鼠（簡(jiǎn)稱子鼠）的性別比例、數(shù)量和體質(zhì)量。

1.2.2 子鼠學(xué)習(xí)和記憶功能試驗(yàn)

子鼠出生后30 d，各組母鼠所產(chǎn)雄性子鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)和空間記憶檢測(cè)（為排除發(fā)情周期對(duì)嚙齒動(dòng)物行為的影響，僅對(duì)雄性子鼠進(jìn)行行為測(cè)試）。采用Morris水迷宮（MWM）系統(tǒng)檢測(cè)子鼠的學(xué)習(xí)和記憶功能。MWM系統(tǒng)直徑為1.6 m，深度為0.6 m，第Ⅱ象限中有可移動(dòng)的圓柱形平臺(tái)（直徑為0.15 m），置固定的測(cè)試間內(nèi)，每日8：00開始測(cè)試，水溫（23±1）℃，第Ⅱ象限的平臺(tái)在水下1 cm，每日訓(xùn)練1次。第1～5天（出生后30～34 d）觀察子鼠的定位航行能力，從離平臺(tái)最遠(yuǎn)的第Ⅲ象限選擇一固定入水點(diǎn)將子鼠背對(duì)平臺(tái)放入水中；若90 s內(nèi)子鼠找到平臺(tái)，則將其留在平臺(tái)上20 s；若90 s內(nèi)未能找到平臺(tái)，將其引上平臺(tái)同樣停留20 s。記錄子鼠尋找到平臺(tái)的時(shí)間，即為逃避潛伏期；若90 s內(nèi)未找到平臺(tái)，按90 s計(jì)算。第6天（出生后35 d）行空間探索實(shí)驗(yàn)，撤去水中平臺(tái)，于固定的進(jìn)入點(diǎn)將子鼠放入水中，記錄90 s內(nèi)在第Ⅱ象限的停留時(shí)間及穿越原平臺(tái)的次數(shù)，即為記憶潛伏期。以視頻跟蹤系統(tǒng)（上海移動(dòng)數(shù)據(jù)有限公司）記錄游泳速度和逃生潛伏期，每次實(shí)驗(yàn)后，大鼠毛發(fā)干燥后用熱燈溫暖5 min，放回常規(guī)籠。取同一母鼠所產(chǎn)所有子鼠成績(jī)的平均值作為最終測(cè)定結(jié)果。

1.2.3 注射抑制劑子鼠學(xué)習(xí)和空間記憶測(cè)試

取丙泊酚組子鼠（出生后第36天，測(cè)試完成后1 d）6只，腹膜內(nèi)注射2.5 mL HDAC2的特異性抑制劑Romidepsin 2.5 mg/kg，每日1次，持續(xù)7 d（出生后36～42 d），作為丙泊酚+Romidepsin組。取6只出生后36 d的丙泊酚組子鼠腹腔注射2.5 mL生理鹽水，每日1次，持續(xù)7 d，作為丙泊酚+Saline組。出生后第43～48天，以MWM法檢測(cè)子鼠的學(xué)習(xí)與記憶能力。

1.2.4 蛋白免疫印跡（Werstern blot）法分析

取對(duì)照組、丙泊酚組、丙泊酚+Romidepsin組及丙泊酚+Saline組子鼠，測(cè)試完成后用斷頭法處死，分離腦海馬組織，勻漿，采用Werstern Blot法測(cè)定GAP43，PSD95，HDAC2，p?HDAC2，CREB，p?CREB，NR2B，GAPDH的表達(dá)水平。經(jīng)過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS?PAGE）分離，轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上。將膜與GAP43（1∶600），PSD95（1∶500），HDAC2（1∶900），p?HDAC2（1∶500），CREB（1∶600），p?CREB（1∶800），NR2B（1∶1 000），GAPDH（1∶1 000）的一抗和對(duì)應(yīng)的二抗孵育后。通過(guò)增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法使蛋白條帶顯色，并通過(guò)ImageJ軟件進(jìn)行定量，每組3只，重復(fù)3次。

1.2.5 中性紅染色評(píng)估海馬神經(jīng)元丟失程度

隨機(jī)選取丙泊酚+Romidepsin組及丙泊酚+Saline組子鼠，各3只，先后用鹽水和4%多聚甲醛經(jīng)心血灌流，取出腦組織，于4℃下以4%多聚甲醛固定，過(guò)夜。使用?20℃冷凍切片機(jī)將冷凍的腦組織切成30μm厚的冠狀切片，于載玻片上風(fēng)干，切片在1%中性紅溶液中孵育1 min，檢測(cè)細(xì)胞活力，評(píng)估海馬神經(jīng)元丟失程度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。計(jì)量資料（平臺(tái)穿越次數(shù)、原平臺(tái)所在象限停留時(shí)間、體質(zhì)量、均出生總子鼠數(shù)、細(xì)胞丟失程度以及p?HDAC2，p?CREB，NR2B）兩組間的差異以±s表示，采用單因素方差分析（one?way ANOVA），當(dāng)one?way ANOVA分析有差異時(shí)，采用LSD?t進(jìn)行多重比較；水迷宮逃避潛伏期數(shù)據(jù)采用重復(fù)測(cè)量?jī)梢蛩胤讲罘治觯≧Mtwo?way ANOVA），以種鼠或子鼠處理為主體間因素，MWM實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練天數(shù)（時(shí)間）為主體內(nèi)因素，當(dāng)RMtwo?way ANOVA分析有差異時(shí)，采用PostHoctests（LSD?t）行多重比較。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)生殖和子代發(fā)育的影響

與對(duì)照組比較，丙泊酚組大鼠的妊娠期天數(shù)、產(chǎn)仔數(shù)量、雄/雌比、雄性子鼠的體質(zhì)量差異均不顯著（P>0.05），表明孕中期接觸丙泊酚未對(duì)大鼠生殖及子代發(fā)育造成影響。詳見表1。

表1 對(duì)照組和丙泊酚組大鼠生殖和發(fā)育參數(shù)（±s，n=12）Tab.1 Reproductive and developmental parameters of the rats in the control group and the propofol group（±s，n=12）

表1 對(duì)照組和丙泊酚組大鼠生殖和發(fā)育參數(shù)（±s，n=12）Tab.1 Reproductive and developmental parameters of the rats in the control group and the propofol group（±s，n=12）

組別對(duì)照組丙泊酚組t值P值妊娠期（d）21.60±0.04 20.20±0.91 0.031 0.822產(chǎn)仔數(shù)（只）11.36±1.78 11.31±1.82 0.447 0.681雄/雌比1.03±0.17 1.15±0.42 0.955 0.322雄性子鼠1～30 d體質(zhì)量（g）1 d 7.08±0.04 7.01±0.06 1.314 0.189 7 d 14.82±0.05 14.73±0.06 1.020 0.366 14 d 34.45±0.19 35.71±0.63 0.712 0.473 21 d 50.76±0.42 50.15±0.37 0.607 0.341 30 d 121.38±0.56 125.15±0.77 1.053 0.217

2.2 對(duì)子代學(xué)習(xí)記憶的影響

與對(duì)照組比較，丙泊酚組子鼠的逃避潛伏期顯著延長(zhǎng)（P<0.05），平臺(tái)穿越次數(shù)顯著減少，第Ⅱ象限停留時(shí)間顯著縮短（P<0.05）。詳見圖1至圖3。

圖1 對(duì)照組與丙泊酚組子鼠逃避潛伏期注：與對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。圖2至圖3和表2同。Fig.1 Escape latency of the offspring rats in the control group and the propofol groupNote：Compared with those in the control group，*P<0.05，**P<0.01（for Fig.1?3 and Tab.2）.

圖3 對(duì)照組和丙泊酚組子鼠各象限停留時(shí)間Fig.3 Residence time in each quadrant of the offspring rats in the control group and the propofol group

2.3 對(duì)子代海馬組織CREB信號(hào)通路的影響

與對(duì)照組比較，丙泊酚組子鼠的海馬組織中HDAC2和p?HDAC2的蛋白表達(dá)顯著上調(diào)，p?CREB和NR2B的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（P<0.05）。詳見圖4和表2。

表2 對(duì)照組和丙泊酚組子鼠HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B蛋白表達(dá)水平比較Tab.2 Comparison of the expression levels of HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB and NR2B protein of the offspring rats in the control group and the propofol group

2.4 Romidepsin通過(guò)調(diào)節(jié)HDAC2-CREB-NR2B信號(hào)通路影響孕中期丙泊酚暴露后子代的學(xué)習(xí)與記憶能力

與丙泊酚+Saline組比較，丙泊酚+Romidepsin組子鼠的逃避潛伏期縮短，第Ⅱ象限停留時(shí)長(zhǎng)和平臺(tái)穿越次數(shù)顯著增加（P<0.05）。詳見圖5和表3。與丙泊酚+Saline組比較，丙泊酚+Romidepsin組子鼠海馬組織中的p?HDAC2的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)（P<0.05），p?CREB，NR2B，GAP43，PSD95的蛋白表達(dá)均顯著上調(diào)（P<0.05）。詳見圖6和表4。與丙泊酚+Saline組比較，丙泊酚+Romidepsin組子鼠缺失的海馬神經(jīng)元部分恢復(fù)，但未達(dá)到健康組大鼠的神經(jīng)元數(shù)量。詳見圖7。

圖7 中性紅染色觀察各組子鼠海馬組織神經(jīng)元細(xì)胞缺失程度（×200）Fig.7 Comparison of the neuronal loss extent in the hippocampus of the offspring rats in each group（Neutral red staining，×200）

表3 各組子鼠Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果（±s）Tab.3 Results of MWM test for the offspring rats in each group（±s）

表3 各組子鼠Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果（±s）Tab.3 Results of MWM test for the offspring rats in each group（±s）

組別對(duì)照組丙泊酚組丙泊酚+Saline組丙泊酚+Romidepsin組F值P值平臺(tái)穿越次數(shù)（次）3.989±0.219 2.345±0.202 2.491±0.157 3.952±0.286*127.502 0.012第Ⅱ象限停留時(shí)長(zhǎng)（s）26.448±0.107 15.925±0.059 14.878±0.083 26.354±0.084*95.952 0.016

表4 各組子鼠HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B，PSD95，GAP43蛋白表達(dá)水平比較（±s）Tab.4 Comparison of expression levels of HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B PSD95 and GAP43 protein of the offspring rats in each group（±s）

表4 各組子鼠HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B，PSD95，GAP43蛋白表達(dá)水平比較（±s）Tab.4 Comparison of expression levels of HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B PSD95 and GAP43 protein of the offspring rats in each group（±s）

組別對(duì)照組丙泊酚組丙泊酚+Saline組丙泊酚+Romidepsin組F值P值HDAC2 1.000±0.100 0.981±0.075 0.969±0.086 0.971±0.062 13.525 0.106 p?HDAC2 1.000±0.121 2.185±0.115 2.036±0.221 1.089±0.318*185.415 0.028 CREB 1.000±0.045 0.974±0.033 1.104±0.028 0.987±0.092 10.362 0.587 p?CREB 1.000±0.012 0.515±0.025 0.502±0.032 0.869±0.022*102.621 0.009 NR2B 1.001±0.080 0.312±0.041 0.364±0.058 0.855±0.023*197.203 0.005 PSD95 1.001±0.021 0.151±0.021 0.166±0.074 0.677±0.029*235.851 0.0003 GAP43 1.001±0.029 0.233±0.052 0.241±0.071 0.662±0.036*321.369 0.0002

圖5 各組子鼠逃避潛伏期測(cè)試結(jié)果注：與丙泊酚+Saline組比較，*P<0.05。表3和表4同。Fig.5 Results of escape latency test for the offspring rats in each groupNote：Compared with those in the propofol+Saline group，*P<0.05（for Fig.5 and Tab.3?4）.

1.對(duì)照組2.丙泊酚組圖4對(duì)照組和丙泊酚組子鼠HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B蛋白表達(dá)水平1.The control group 2.The propofol groupFig.4 Comparison of the expression levels of HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB and NR2B protein of the offspring rats in the control group and the propofol group

圖2 對(duì)照組和丙泊酚組子鼠平臺(tái)穿越次數(shù)Fig.2 The times of crossing platform of the offspring rats in the control group and the propofol group

3 討論

孕中期為胎兒腦發(fā)育的關(guān)鍵時(shí)期，全身麻醉藥物對(duì)腦發(fā)育期中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有潛在神經(jīng)毒性作用。本研究結(jié)果顯示，HDAC2抑制劑Romidepsin可抑制HDAC2蛋白的表達(dá)水平，改善孕中期丙泊酚麻醉后對(duì)子鼠學(xué)習(xí)與記憶功能的負(fù)面影響。孕中期大鼠頸內(nèi)注射1.5%丙泊酚暴露，并以20 mg/（kg·h）的速率持續(xù)靜脈泵注丙泊酚4 h，對(duì)大鼠的生殖和子代的發(fā)育均無(wú)影響，但海馬組織的突觸可塑性標(biāo)記物表達(dá)減少，且子鼠的學(xué)習(xí)與記憶能力明顯變差。其中，使用Romidepsin激活CREB?NR2B信號(hào)，改善了子鼠的學(xué)習(xí)與記憶缺失。

1.對(duì)照組2.丙泊酚組3.丙泊酚+Saline組4.丙泊酚+Romidepsin組圖6各組子鼠HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B，PSD95，GAP43蛋白表達(dá)水平1.The control group 2.The propofol group 3.The propofol+Saline group 4.The propofol+Romidepsin groupFig.6 Comparison of the expression levels of HDAC2，p-HDAC2，CREB，p-CREB，NR2B PSD95 and GAP43 protein of offspring rats in each group

丙泊酚是臨床實(shí)踐中廣泛應(yīng)用的鎮(zhèn)靜劑，是一種抑制GABA能神經(jīng)元的藥物。研究表明，患者在接受丙泊酚鎮(zhèn)靜的麻醉下進(jìn)行手術(shù)時(shí)，輕度鎮(zhèn)靜與深度鎮(zhèn)靜均能導(dǎo)致其記憶缺失甚至譫妄，但輕度麻醉的發(fā)生率較深度麻醉降低50%，提示丙泊酚可能是誘導(dǎo)患者神經(jīng)退行性疾病的重要危險(xiǎn)因素［10］。麻醉劑對(duì)未成熟的神經(jīng)元細(xì)胞有毒性作用，懷孕小鼠中、高劑量丙泊酚單次暴露2 h可損害子代的學(xué)習(xí)和記憶功能［11?12］。然而，丙泊酚應(yīng)用于孕中期大鼠的手術(shù)中是否會(huì)對(duì)子鼠的認(rèn)知能力造成影響仍不明確。本研究結(jié)果顯示，孕中期大鼠暴露于丙泊酚，會(huì)導(dǎo)致子代的學(xué)習(xí)和記憶功能障礙。學(xué)習(xí)和記憶障礙是中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害非常重要的癥狀，也是阿爾茨海默病和帕金森病的主要特征［9，13］。目前，尚無(wú)可靠的藥物來(lái)治療此類具有學(xué)習(xí)和記憶缺陷的神經(jīng)退行性疾病。本研究中使用HDAC2的抑制劑Romidepsin抑制HDAC2后，子鼠缺失的學(xué)習(xí)和記憶能力部分恢復(fù)。提示HDAC2可能是丙泊酚誘導(dǎo)子代認(rèn)知功能障礙的關(guān)鍵調(diào)節(jié)靶點(diǎn)，通過(guò)靶向調(diào)節(jié)此信號(hào)有助于改善丙泊酚暴露導(dǎo)致的子代學(xué)習(xí)和記憶缺失。

突觸可塑性對(duì)于記憶的形成和記憶存儲(chǔ)至關(guān)重要［14］。海馬區(qū)HDAC2?CREB?NR2B信號(hào)通路與海馬區(qū)神經(jīng)突觸可塑性調(diào)節(jié)密切相關(guān)，在HDAC家族成員中，HDAC2起調(diào)節(jié)突觸可塑性和對(duì)神經(jīng)回路產(chǎn)生持久變化的作用，對(duì)學(xué)習(xí)和記憶產(chǎn)生負(fù)面影響［15］，HDAC2作為組蛋白脫乙酰基酶，被抑制后可恢復(fù)學(xué)習(xí)功能，并促進(jìn)神經(jīng)退變動(dòng)物長(zhǎng)期記憶的恢復(fù)［16］。抑制HDAC2可為神經(jīng)退行性疾病引起的記憶障礙提供治療途徑。HDAC2的過(guò)度磷酸化可降低cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白CREB的磷酸化，導(dǎo)致CREB蛋白水平降低［12］。使用HDAC2的抑制劑SAHA后，可升高乙?；M蛋白水平，并伴隨p?CREB與NR2B亞基的啟動(dòng)子中結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合增強(qiáng)，導(dǎo)致大鼠海馬中NR2B蛋白水平升高，通過(guò)維持突觸可塑性改善機(jī)體的認(rèn)知功能障礙［15］。本研究結(jié)果顯示，使用HDAC2抑制劑Romidepsin可激活CREB?NR2B信號(hào)，明顯恢復(fù)丙泊酚麻醉孕中期大鼠導(dǎo)致的子鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶缺陷，并檢測(cè)到突觸可塑性標(biāo)志物GAP43和PSD95的表達(dá)明顯上調(diào)。提示HDAC2?CREB?NR2B信號(hào)通路通過(guò)調(diào)節(jié)海馬突觸可塑性改善子鼠的認(rèn)知障礙；母體被麻醉劑暴露后，海馬神經(jīng)元中與NR2B共定位的PSD95表達(dá)水平降低，而上調(diào)PSD95可改善子代的空間和學(xué)習(xí)記憶缺陷［17］，且PSD95和NR2B的表達(dá)水平降低可能會(huì)導(dǎo)致長(zhǎng)期自發(fā)性反復(fù)的行為缺陷［18］。可見，HDAC2?CREB?NR2B信號(hào)通路調(diào)節(jié)的突觸可塑性與空間學(xué)習(xí)和記憶功能密切相關(guān)。

研究表明，子代海馬組織的神經(jīng)元損失程度在丙泊酚暴露后明顯增加［12］。本研究中使用HDAC2抑制劑Romidepsin抑制其激活后，海馬組織的神經(jīng)元缺失程度減少，提示海馬神經(jīng)元的活性可能受到HDAC2?CREB?NR2B信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，與文獻(xiàn)［15］的報(bào)道一致。

本研究存在的局限性，首先，選擇大鼠的樣本數(shù)較少，需擴(kuò)大樣本量；其次，為避免子鼠受發(fā)情期影響，子代僅選用雄性大鼠，文獻(xiàn)［19］指出，麻醉藥物對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的毒性可能存在性別差異，故選擇雄性大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

綜上所述，丙泊酚麻醉孕中期大鼠引發(fā)子代的認(rèn)知障礙，其關(guān)鍵作用機(jī)制之一是激活HDAC2并抑制CREB?NR2B信號(hào)，抑制HDAC2導(dǎo)致CREB?NR2B信號(hào)的激活可能給治療孕中期丙泊酚暴露致子鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力的缺陷提供幫助。