袁桂英 羅潤(rùn)弟

（東莞市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 東莞 523059）

乙型肝炎是全球第十大死亡原因，和肺結(jié)核、艾滋病一樣發(fā)病率較高，是世界上最常見(jiàn)的傳染病[1]。臨床研究結(jié)果顯示，全世界大約有3.5～4 億人感染了乙型肝炎病毒，是艾滋病毒感染者人數(shù)的8 倍多。目前，臨床檢測(cè)HBV 的方法主要有化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法（CLEIA）、熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。ELISA 技術(shù)較為成熟，具有成本低、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，使用頻繁[2]。乙型肝炎病毒血清學(xué)標(biāo)志物有5 種，包括：乙型肝炎e 抗原（HBeAg）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎e 抗體（HBeAb）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）。FQ-PCR 由于具有較高的特異性、靈敏度、準(zhǔn)確性[3]；CLEIA 具有線性范圍寬、有效期長(zhǎng)、靈敏度高、自動(dòng)化程度高以及特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在HBV 感染檢測(cè)中效果顯著[4]。為進(jìn)一步研究上述措施的可行性，本文以322 例乙肝樣本為例，分析上述方法在HBV 感染檢測(cè)中的相關(guān)性，為疾病檢測(cè)工作提供參考，實(shí)現(xiàn)疾病的有效抑制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021 年10 月至2021 年11 月我院乙肝樣本322 例數(shù)據(jù)信息，其中：男238 例，女84例；年齡21 歲～87 歲，平均（30.49±0.15）歲。

1.2 方法 使用高通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀檢測(cè)血清HBV-DNA 水平（型號(hào)：LightingCycler480；羅氏公司），試劑盒購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司；使用全自動(dòng)免疫分析儀（雅培公司，型號(hào)：i2000SR）及其原裝配套試劑檢測(cè)血清乙肝五項(xiàng)。每日?qǐng)?zhí)行室內(nèi)質(zhì)量控制，相關(guān)操作需嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)內(nèi)容嚴(yán)格實(shí)施，每個(gè)監(jiān)測(cè)批次都包含HBV 陽(yáng)性定量參考品、陰性質(zhì)控品的重復(fù)檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 分析HBV－DNA 陽(yáng)性與乙肝五項(xiàng)陽(yáng)性情況；HBeAg 陽(yáng)性、HBeAg 陽(yáng)性HBV－DNA 分布（低載量：1.00E＋0.2-1.00E＋04；中載量：1.00E＋0.4-1.00E＋07；高載量：1.00E＋07-＞1.1E＋08）情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS26.0 軟件處理，分析統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果，若結(jié)果顯示P＜0.05，表示對(duì)比有意義，反之（P＞0.05）為無(wú)意義。計(jì)數(shù)資料檢驗(yàn)方式為χ2，表示形式為（n%）；計(jì)量資料檢驗(yàn)方式、表示形式分別為t、（。

2 結(jié)果

2.1 HBV－DNA 陽(yáng)性與乙肝五項(xiàng)陽(yáng)性：322 例樣本中，大三陽(yáng)標(biāo)本109 例，小三陽(yáng)標(biāo)本163 例，上述所占比例最多，分別為33.8%、50.6%。見(jiàn)表1

表1 HBV－DNA 陽(yáng)性與乙肝五項(xiàng)陽(yáng)性

2.2 HBeAg 陽(yáng)性、HBeAg 陽(yáng)性HBV－DNA 分布情況：HBeAb 陽(yáng)性、HBeAg 陽(yáng)性HBV－DNA 載量分布對(duì)比顯示，前者高于后者，差異分析結(jié)果有意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2

表2 HBeAg 陽(yáng)性、HBeAg 陽(yáng)性HBV－DNA 分布情況

3 討論

乙型肝炎也稱為慢性乙型肝炎，是指乙肝病毒檢測(cè)為陽(yáng)性，疾病的持續(xù)時(shí)間超過(guò)半年，或發(fā)病日期還不清楚。常見(jiàn)病因?yàn)楦腥疽倚透窝撞《荆℉BV）、家族性傳播、嬰幼兒期感染病毒、缺乏預(yù)防意識(shí)、漏診、免疫功能低下、既往有其他肝病史感染病毒者。乙型肝炎患者主要表現(xiàn)為腹脹、肝痛、疲乏、怕食、惡心、身體乏力、失眠、多夢(mèng)、黃疸、肝區(qū)疼痛、肝脾大、肝外表現(xiàn)、肝纖維化等癥狀[5-6]。有的患者會(huì)出現(xiàn)肝臟腫大，中等硬度，伴有輕度壓痛。病情嚴(yán)重的患者會(huì)有蜘蛛痣、慢性肝病、肝掌、脾腫大或肝功能異常，分為輕、中、重度。慢性乙型肝炎攜帶者為乙型肝炎病毒陽(yáng)性，但無(wú)慢性肝炎癥狀。每年隨訪3 次以上患者血清ALT、AST 無(wú)異常，肝組織正常者正常。

目前，乙型肝炎的檢測(cè)方法主要有ELISA、FQPCR、CLEIA 等，5 種乙型肝炎定量檢測(cè)方法主要包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和HBcAb[7-8]。臨床研究結(jié)果顯示，CLEIA 具有線性范圍寬、靈敏度高、自動(dòng)化程度高、特異性好、標(biāo)記物效度長(zhǎng)等特點(diǎn)；FQPCR 檢測(cè)具有準(zhǔn)確性、敏感性、特異性。上述檢測(cè)措施已廣泛應(yīng)用于臨床乙肝檢測(cè)。熒光定量PCR 不僅是分子生物學(xué)的一種實(shí)驗(yàn)方法，也是實(shí)驗(yàn)室中常用的方法[9]。PCR 是對(duì)事物進(jìn)行擴(kuò)增，主要檢測(cè)RNA、DNA、RNA。熒光定量PCR 很容易監(jiān)測(cè)和定量，可以顯示體內(nèi)HPV 感染的數(shù)量。放大后，觀察是陽(yáng)性還是陰性，再看內(nèi)容和拷貝數(shù)。病毒篩選就是篩選病毒的DNA。用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）可以擴(kuò)增DNA。根據(jù)底物的基本量，在擴(kuò)增過(guò)程中可同時(shí)計(jì)算出含量，對(duì)病毒感染率高低進(jìn)行定量觀察?；瘜W(xué)發(fā)光法非常實(shí)用和方便，是一種靈敏的檢測(cè)病毒抗原和抗體的方法。由于其靈敏度高、檢測(cè)時(shí)間短、分析方法簡(jiǎn)單快速、診斷范圍廣等優(yōu)勢(shì)，在臨床上的應(yīng)用較為廣泛[10]。它可以取代放射免疫分析和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)體內(nèi)的抗體和抗原。其原理是在一定條件下，樣品中抗體和抗原的濃度與化學(xué)式的發(fā)光強(qiáng)度呈線性定量關(guān)系。該儀器通過(guò)檢測(cè)系統(tǒng)的發(fā)光強(qiáng)度，直接測(cè)定抗原和抗體的含量。乙型肝炎化學(xué)發(fā)光法就是利用這一原理檢測(cè)乙型肝炎五項(xiàng)，是一種定量檢測(cè)方法。臨床研究結(jié)果顯示：建立一種線性范圍廣、靈敏度高、重現(xiàn)性好的HBV PCR 檢測(cè)方法，可用于臨床血清標(biāo)本中HBVDNA 的定量檢測(cè)。為進(jìn)一步研究該方法提高HBV 各基因型的敏感性，穩(wěn)定低濃度樣品的準(zhǔn)確性提供了可靠的依據(jù)。

乙型肝炎病毒檢測(cè)HBsAg 是檢測(cè)HBV 感染的重要指標(biāo)?？煞从郴颊咴缙贖BV 感染情況，其含量與HBV 的傳染性、復(fù)制水平無(wú)明顯相關(guān)性。但能反映HBV 感染狀態(tài)。相關(guān)研究顯示，如果濃度高，意味著急性感染，在疾病的恢復(fù)期e 抗原濃度降低。血清乙肝病毒復(fù)制具有高度傳染性，如果HBeAb 出現(xiàn)，表明乙肝病毒復(fù)制減少了，其傳染性較弱，HBV 感染及其消退均是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程。在疾病的各個(gè)階段，采用FQ-PCR 檢測(cè)HBV DNA、CLEIA 檢測(cè)乙肝五項(xiàng)肝炎，在判斷乙型肝炎病毒感染方面具有良好的相關(guān)性。這可能是因?yàn)椴煌颊叩拿庖呦到y(tǒng)對(duì)HBV 的反應(yīng)存在不同的差異，但五項(xiàng)乙肝定量檢測(cè)結(jié)果與患者HBV DNA 載量無(wú)明顯相關(guān)性。

HBsAg 能反映HBV 早期感染，是HBV 感染血清學(xué)檢測(cè)的重要指標(biāo)之一，但其內(nèi)容與HBV 復(fù)制水平和傳染性無(wú)關(guān)。研究結(jié)果顯示，322 例樣本中，大三陽(yáng)標(biāo)本109 例，小三陽(yáng)標(biāo)本163 例，上述所占比例最多，分別為33.9%、50.6%。DNA 載量較低，可能是HBV 早期感染。一般認(rèn)為，感染HBsAg 的機(jī)體會(huì)產(chǎn)生核心抗體。其原因分析結(jié)果顯示：HBV 基因變異的抗體、宿主存在免疫缺陷，不能產(chǎn)生對(duì)HBcAg 產(chǎn)生抗體、HBcAb 的假陰性檢測(cè)。有資料顯示，基因變異也是部分HBsAg 假陰性的原因。研究還發(fā)現(xiàn)，HBeAb 陽(yáng)性低于HBeAg 陽(yáng)性HBV－DNA 載量分布，分析結(jié)果有意義（P＜0.05）。HBcAb 濃度高提示乙肝急性感染，HBcAb 濃度降低，HBV DNA 負(fù)載級(jí)別相對(duì)較低，可能是乙肝疫苗注射后的正常反應(yīng)。

HBV 感染和預(yù)后是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程。在判斷乙肝病毒感染持續(xù)時(shí)間方面，F(xiàn)Q-PCR 檢測(cè)到的HBV DNA 載量水平與CLEIA 檢測(cè)到的乙肝五項(xiàng)均有良好的相關(guān)性。這可能與機(jī)體免疫系統(tǒng)及對(duì)HBV 的反應(yīng)程度不同有關(guān)。乙肝五項(xiàng)定量結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)與HBV DNA 載量直接相關(guān)。CLEIA 檢測(cè)乙型肝炎的五種敏感性遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)ELISA 方法，可有效降低乙型肝炎；FQ-PCR 技術(shù)已被應(yīng)用于乙型肝炎的早期診斷和療效判斷，但不排除藥物對(duì)HBV-DNA 檢測(cè)和病毒復(fù)制的干擾。HBV 的DNA 載量和乙肝五項(xiàng)更全面地反映HBV 的病程和預(yù)后，結(jié)合FQ-PCR 和CLEIA 對(duì)HBV 進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)具有積極意義。

綜上，CIEIA 檢測(cè)在乙型肝炎患者乙肝五項(xiàng)病毒感染水平、熒光定量PCR 檢測(cè)HBV DNA 之間具有良好的相關(guān)性，兩種方法的聯(lián)合應(yīng)用能更好地反映患者的病情及預(yù)后，對(duì)針對(duì)性治療措施的完善具有積極意義。