張 鵬 史 磊 王金賀 劉姿彤 盛春鴿 于海洋 趙 靜 王延鋒

（黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院，黑龍江 牡丹江 157000）

猴頭菌（Hericium erinaceus）又名猴頭菇、刺猬菌和對(duì)臉蘑，隸屬于擔(dān)子菌門(mén)、多孔菌目、齒菌科、猴頭菌屬[1]，是一種著名的藥食同源大型真菌。其子實(shí)體營(yíng)養(yǎng)豐富，具有養(yǎng)胃、助消化、提高免疫等多種藥用保健功效[2]，受消費(fèi)者歡迎。黑龍江省一直是我國(guó)猴頭菌主產(chǎn)區(qū)，產(chǎn)量和品質(zhì)位居全國(guó)前列[3]。然而近幾年，黑龍江省猴頭菌生產(chǎn)中出現(xiàn)主栽品種單一、菌種抗逆性降低等問(wèn)題，給產(chǎn)量和品質(zhì)的穩(wěn)定性造成一定不利影響。因此，發(fā)掘利用優(yōu)異猴頭菌種質(zhì)資源對(duì)產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。筆者對(duì)采集自黑龍江省不同地區(qū)的2個(gè)野生猴頭菌菌株進(jìn)行馴化栽培研究，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

2個(gè)野生猴頭菌菌株分別采自黑龍江省伊春市五營(yíng)國(guó)家森林公園（E：129°16'56″，N：48°14'6″）和雙鴨山市寶清縣龍頭鎮(zhèn)（E：129°46'30″，N：44°28'36″），采用組織分離方法獲得純種，分別編號(hào)為RT27和RT28，子實(shí)體形態(tài)如圖1所示。對(duì)照菌株‘黑威9910’引自黑龍江省科學(xué)院微生物研究所，編號(hào)為RT10。

圖1 2個(gè)野生猴頭菌子實(shí)體

1.2 培養(yǎng)配方

母種培養(yǎng)基采用PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉20 g。原種培養(yǎng)基：闊葉樹(shù)木屑78%，麩皮20%，石膏1%，蔗糖1%。栽培種培養(yǎng)料配方：闊葉樹(shù)木屑83%，麩皮15%，石膏1%，過(guò)磷酸鈣1%。

1.3 母種菌絲生長(zhǎng)特性

從母種斜面上切取5×5（mm）大小的菌絲塊轉(zhuǎn)接到直徑90 mm的PDA平板培養(yǎng)基上，置25 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，每48 h測(cè)量記錄菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度，并觀察菌絲形態(tài)特征，待菌絲長(zhǎng)滿后計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速率。每個(gè)菌株重復(fù)3次，試驗(yàn)結(jié)果取平均值。

1.4 菌絲拮抗試驗(yàn)

將3個(gè)菌株接種在同一PDA平板培養(yǎng)基上，25 ℃下恒溫培養(yǎng)10～15天，觀察不同菌株的菌絲交接處有無(wú)拮抗現(xiàn)象。試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，具體方法參考文獻(xiàn)[4]。

1.5 原種和栽培種的制備

（1）原種制備。按前述原種配方備料、拌料，調(diào)節(jié)培養(yǎng)料含水量至60%，拌勻后裝入規(guī)格15×28（cm）的聚丙烯袋，121 ℃高壓滅菌2.5 h，出鍋放涼后接入母種，于25 ℃下恒溫培養(yǎng)。

（2）栽培種制作。按栽培種培養(yǎng)料配方備料、拌料，含水量控制在58%左右，選用規(guī)格17×33（cm）的耐高溫聚乙烯袋裝料，每袋裝干料480 g。料袋裝筐后于121 ℃高壓滅菌3 h，待袋內(nèi)料溫降至30 ℃以下時(shí)接入原種，進(jìn)行發(fā)菌培養(yǎng)，控制溫度在23～25 ℃，空氣相對(duì)濕度在70%以下。每個(gè)菌株制備栽培種200袋。發(fā)菌期觀察記錄菌絲萌發(fā)時(shí)間、滿袋時(shí)間、菌絲長(zhǎng)勢(shì)[5]及污染率。

1.6 出菇管理

野生猴頭菌出菇試驗(yàn)在黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院食用菌科研基地進(jìn)行。將長(zhǎng)滿菌絲的菌袋放置7～10天后轉(zhuǎn)移至出菇棚，側(cè)面開(kāi)一字形口，開(kāi)口長(zhǎng)度約1.5 cm。棚內(nèi)控制溫度在15～22 ℃，空氣相對(duì)濕度在80%～90%。每天向地面和四周草簾澆水保濕，保持空氣暢通、通風(fēng)良好，二氧化碳濃度不超過(guò)1000 mg/L；同時(shí)給予100～200 lx散射光，待子實(shí)體生長(zhǎng)至孢子彈射前采收。

出菇階段調(diào)查子實(shí)體現(xiàn)蕾時(shí)間、采收時(shí)間、子實(shí)體大小、鮮重等主要農(nóng)藝性狀，統(tǒng)計(jì)前兩潮菇總產(chǎn)量，計(jì)算生物學(xué)效率。每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)隨機(jī)抽取10袋調(diào)查。

1.7 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS20.0對(duì)子實(shí)體大小、產(chǎn)量等指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 母種菌絲生長(zhǎng)情況

由試驗(yàn)結(jié)果可知，在PDA培養(yǎng)基上不同菌株的菌絲顏色、形態(tài)和生長(zhǎng)速度等均存在一定差異（圖2和表1）。RT27的菌絲生長(zhǎng)速度與對(duì)照相比無(wú)顯著性差異，菌絲呈灰白色，培養(yǎng)時(shí)間超過(guò)15天，會(huì)產(chǎn)生較多的褐色色素。RT28的菌絲潔白、粗壯，但菌絲生長(zhǎng)速度慢，菌落邊緣不規(guī)則。

圖2 3個(gè)菌株母種在PDA平板上的菌絲生長(zhǎng)情況

表1 3個(gè)猴頭菌菌株的母種菌絲生長(zhǎng)情況比較

2.2 拮抗試驗(yàn)結(jié)果

從圖3可以看出，野生菌株RT27、RT28與對(duì)照間均有明顯的拮抗線，RT27與RT28之間也存在拮抗反應(yīng)。說(shuō)明，3個(gè)猴頭菌菌株相互間存在遺傳特異性，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

圖3 3個(gè)猴頭菌菌株間的菌絲拮抗現(xiàn)象

2.3 栽培種菌絲生長(zhǎng)情況

由表2可知，在木屑培養(yǎng)基中，接種后2～3天，幾個(gè)菌種相繼萌發(fā)；菌絲滿袋時(shí)間RT27和RT28分別比對(duì)照提前2天和3天。RT28菌絲長(zhǎng)勢(shì)較好，表現(xiàn)潔白、濃密、粗壯，培養(yǎng)后期吃料速度快，滿袋時(shí)間不到30天。RT27與RT28的雜菌污染率與對(duì)照差異不顯著。

表2 3個(gè)猴頭菌菌株的栽培種菌絲生長(zhǎng)比較

2.4 不同菌株的農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量

幾個(gè)猴頭菌菌株的主要農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量表現(xiàn)如表3和圖4。菌株RT28從菌袋開(kāi)口到現(xiàn)蕾需要10天，從現(xiàn)蕾到第一次采收需要13天；菌株RT27從菌袋開(kāi)口到現(xiàn)蕾所需時(shí)間較長(zhǎng)，比對(duì)照多11天，從現(xiàn)蕾到采收的時(shí)間則多達(dá)18天。從農(nóng)藝性狀看，各菌株子實(shí)體顏色潔白、菇形圓整，其中RT28菌刺短、菇體緊實(shí)，明顯大于對(duì)照，平均單菇鮮重達(dá)227.5 g；RT27的子實(shí)體大小和單菇鮮重均小于對(duì)照，商品性狀欠佳。產(chǎn)量方面，菌株RT28前兩潮的平均每袋產(chǎn)量合計(jì)達(dá)到402.8 g，顯著高于對(duì)照，生物學(xué)效率在80%以上；而RT27子實(shí)體產(chǎn)量低，生物學(xué)效率僅為74.7%。

圖4 3個(gè)猴頭菌菌株子實(shí)體形態(tài)

表3 3個(gè)猴頭菌菌株的主要農(nóng)藝性狀和子實(shí)體產(chǎn)量

3 小結(jié)與討論

本團(tuán)隊(duì)于2019年9月分別從黑龍江省伊春市五營(yíng)國(guó)家森林公園和雙鴨山市寶清縣龍頭鎮(zhèn)采集到2個(gè)野生猴頭菌菌株，編號(hào)RT27和RT28。通過(guò)比較不同菌株的菌絲生長(zhǎng)特性、子實(shí)體農(nóng)藝性狀和產(chǎn)量等的試驗(yàn)，結(jié)果表明，3個(gè)菌株相互間均存在遺傳特異性；在木屑基質(zhì)中，菌株RT28菌絲長(zhǎng)勢(shì)較好，表現(xiàn)濃密、粗壯，子實(shí)體較大、刺短、肉質(zhì)比較緊實(shí)，產(chǎn)量和生物學(xué)效率顯著高于對(duì)照（P＜0.05）。綜上，RT28具有成為高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌株的潛力，適合作為良種選育的親本材料。

菌株RT27無(wú)論是在PDA還是木屑培養(yǎng)基中，菌絲生長(zhǎng)表現(xiàn)均良好，但與對(duì)照比，其出菇時(shí)間明顯延遲，且子實(shí)體產(chǎn)量和生物學(xué)效率較低。說(shuō)明菌株的菌絲長(zhǎng)勢(shì)與子實(shí)體農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量沒(méi)有直接關(guān)系。這與王燦琴等的研究報(bào)道基本相符[6]。

此外，野生猴頭菌的栽培性狀表現(xiàn)可能與本身的抗逆性有關(guān)。本試驗(yàn)根據(jù)牡丹江地區(qū)的自然氣候特點(diǎn)和當(dāng)?shù)睾镱^菌生產(chǎn)習(xí)慣，安排于5月初對(duì)菌袋進(jìn)行開(kāi)口處理，但在出菇管理前期遇到異常天氣，菇棚溫度忽高忽低。可能由于RT28菌株適應(yīng)性較好，其菇蕾形成受不良環(huán)境的影響較?。欢鳵T27菌株抗逆性差，受環(huán)境因素的影響較大，導(dǎo)致出菇時(shí)間明顯延遲。這還有待進(jìn)一步研究。