王偉 于水

子宮內(nèi)膜樣癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤,是女性最常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一,在我國發(fā)病率僅次于宮頸癌,發(fā)病率呈明顯上升趨勢［1］。Murray 等［2］在2003 年首次描述了一種特殊的子宮內(nèi)膜樣癌浸潤子宮肌層的模式,浸潤的腺體呈微囊性（microcystic）、拉長（elongated）及碎片狀（fragmented）,簡稱為MELF 模式。伴MELF 模式子宮內(nèi)膜樣癌常與深肌層浸潤、脈管內(nèi)癌栓及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),其浸潤潛能相關(guān)的機(jī)制尚不十分清楚?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）中的各種蛋白成分,破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障,在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用［3］。MMPs 可由腫瘤實體細(xì)胞直接分泌,但最常由反應(yīng)性間質(zhì)包括成纖維細(xì)胞和炎性細(xì)胞等合成分泌。ECM 主要是由Ⅳ型膠原蛋白、纖維連接蛋白、層粘連蛋白組成。MMPs 中的MMP-2 在多種惡性腫瘤中可觀察到其過表達(dá)現(xiàn)象。本實驗通過檢測52 例國際婦產(chǎn)科協(xié)會（FIGO）分級Ⅰ～Ⅱ級伴MELF 模式子宮內(nèi)膜樣癌間質(zhì)反應(yīng)中免疫組化MMP-2 蛋白表達(dá)情況,探討其病理意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性收集大連市婦女兒童醫(yī)療中心(集團(tuán))春柳婦產(chǎn)院區(qū)病理科診斷的52 例伴MELF 模式的子宮內(nèi)膜樣癌患者的臨床資料,術(shù)前均未接受輔助治療,除2 例患者沒有進(jìn)行淋巴結(jié)清掃術(shù)外,其余均已行全子宮+雙附件切除術(shù)及淋巴結(jié)清掃術(shù)。所有患者均由兩名具有高級職稱的病理醫(yī)生獨立進(jìn)行鏡下確認(rèn)。滿足MELF 模式診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。

1.2 方法 鼠抗人MMP-2 單克隆抗體以及相應(yīng)生物素化二抗購自基因科技(上海)股份有限公司。DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用S-P法檢測MMP-2 蛋白表達(dá),一抗均稀釋100 倍,37℃孵育45 min,二抗稀釋100 倍,37℃孵育20 min。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察MELF 模式中MMP-2 蛋白表達(dá),分析MMP-2 蛋白陽性表達(dá)灶數(shù)與腫物浸潤最深處距子宮漿膜距離、深肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn) MMP-2 蛋白：著色范圍以無細(xì)胞顯色為0 分,＜25%為1 分,25%～50%為2 分,＞50%為3 分；著色強(qiáng)度以多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色計分,無色為0 分,淡黃色為1 分,棕黃色為2 分,棕褐色為3 分；兩項評分相加作為綜合評分,0～1 分為陰性,2～3 分為“+”,4～5 分為“++”,＞5 分為“+++”,以“+”及以上表達(dá)計為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS24.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗；采用Spearman相關(guān)以及Logistic 回歸進(jìn)行相關(guān)性分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MELF 模式中MMP-2 蛋白表達(dá) MELF 區(qū)主要位于腫瘤浸潤灶前沿處,MELF 腺體周圍可見明顯的間質(zhì)反應(yīng)區(qū),反應(yīng)區(qū)細(xì)胞成分主要包括成纖維細(xì)胞及炎細(xì)胞。見圖1,圖2。MELF 區(qū)中MMP-2 蛋白的表達(dá)主要為兩種細(xì)胞成分：MELF 腺體周圍的CAFs 和MELF 腺體周圍炎細(xì)胞浸潤區(qū)的中性粒細(xì)胞。見圖3,見圖4。

圖1 MELF 腺體周圍成纖維細(xì)胞增生(↑),400×；圖2 MELF 腺體周圍大量中性粒細(xì)胞浸潤,400×；圖3 MMP-2 蛋白表達(dá)于MELF 腺體周邊成纖維細(xì)胞增生區(qū)(↑↑),與之對應(yīng)的非MELF 區(qū)腺體周圍未見MMP-2 蛋白陽性表達(dá)(↑),100×；圖4 MMP-2 蛋白表達(dá)于MELF腺體間中性粒細(xì)胞浸潤區(qū),400×

2.2 MMP-2 蛋白陽性表達(dá)灶數(shù)與腫物浸潤最深處距子宮漿膜距離的相關(guān)性分析 通過Spearman相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)MMP-2 陽性表達(dá)灶數(shù)和腫物浸潤最深處距子宮漿膜距離存在負(fù)相關(guān)（r=-0.859,P＜0.05）。見表1。

表1 MMP-2 蛋白陽性表達(dá)灶數(shù)與腫物浸潤最深處距子宮漿膜距離的相關(guān)性分析

2.3 MMP-2 蛋白陽性表達(dá)的灶數(shù)與深肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析 MMP-2 蛋白陽性表達(dá)≥4 灶與深肌層（≥1/2 肌層）浸潤具有相關(guān)性（P＜0.05）；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性（P＞0.05）。見表2。

表2 MMP-2 蛋白陽性表達(dá)的灶數(shù)與深肌層浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

3 討論

近年來,腫瘤微環(huán)境逐漸成為研究腫瘤領(lǐng)域的焦點。有報道稱,伴MELF 模式子宮內(nèi)膜樣癌與腫瘤微環(huán)境相關(guān)［5,6］。腫瘤微環(huán)境是指腫瘤細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞、趨化因子等。其中,基質(zhì)細(xì)胞是指成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等。腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞,包括腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）和腫瘤相關(guān)T 細(xì)胞（TAT）等,可促進(jìn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移［7,8］。本研究發(fā)現(xiàn),MELF 腺體周邊間質(zhì)反應(yīng)的主要細(xì)胞成分為CAFs 及淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等。MMP-2 蛋白在MELF 區(qū)的CAFs 及中性粒細(xì)胞呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài),而在非MELF 區(qū)肌層浸潤處未見到明確陽性表達(dá)。

本研究結(jié)果顯示,通過Spearman 相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)MMP-2 陽性表達(dá)灶數(shù)和腫物浸潤最深處距子宮漿膜距離存在負(fù)相關(guān)（r=-0.859,P＜0.05）。腫瘤微環(huán)境中的CAFs 及中性粒細(xì)胞分泌過多的MMP-2 蛋白,與腫瘤浸潤肌層深度相關(guān)［4,9］。同時,MMP-2 蛋白陽性表達(dá)≥4 灶與深肌層（≥1/2 肌層）浸潤具有相關(guān)性（P＜0.05）；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性（P＞0.05）。認(rèn)為,在MELF 模式中腫瘤微環(huán)境的CAFs 及中性粒細(xì)胞分泌過多的MMP-2 蛋白可能對于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響較小,而對于腫物的肌層浸潤深度意義較大。

綜上所述,伴MELF 模式子宮內(nèi)膜樣癌中,MELF腺體周圍間質(zhì)MMP-2 蛋白陽性表達(dá)灶數(shù)與腫物浸潤深度呈正相關(guān),MMP-2 蛋白陽性表達(dá)≥4 灶與深肌層（≥1/2 肌層）浸潤具有相關(guān)性,但其具體的分子機(jī)制還需要大量的樣本深入研究。