王 惟 柴婷婷 張雪松 李云強(qiáng) 劉祥君

長(zhǎng)春市中心血站成分制備科，吉林長(zhǎng)春 130033

冷沉淀是來(lái)源于新鮮冰凍血漿的再加工產(chǎn)品，因其具有容量小、不穩(wěn)定凝血因子含量高等優(yōu)點(diǎn)，在臨床廣泛應(yīng)用[1-3]，其主要功能是補(bǔ)充Ⅷ因子、ⅩⅢ因子、血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、纖維蛋白原和纖維結(jié)合蛋白。適應(yīng)癥主要為纖維蛋白原缺乏引起的出血，可用于無(wú)特異性濃縮制劑使用時(shí)的Ⅷ因子缺乏癥、ⅩⅢ因子缺乏癥、血管性血友病、纖維蛋白異常及纖維蛋白原缺乏癥，也可用于大量輸血、彌散性血管內(nèi)凝血（disseminated intravascular coagulation，DIC）以及其他治療方法無(wú)效的尿毒癥出血[4-5]。其臨床需求量逐年上升，采用傳統(tǒng)手工虹吸法制備冷沉淀凝血因子在增加制備數(shù)量方面尤顯吃力。長(zhǎng)春市中心血站于2015年采用自動(dòng)化離心法，用全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備冷沉淀凝血因子。2019年9月1日開(kāi)始實(shí)施的《血站技術(shù)操作規(guī)程》中將離心法制備冷沉淀凝血因子的終產(chǎn)品容量由20～30 ml 改為40～50 ml[6]。2019年8月對(duì)全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備冷沉淀凝血因子的運(yùn)行參數(shù)進(jìn)行調(diào)整，并制備冷沉淀凝血因子，將調(diào)整參數(shù)前后制備的冷沉淀凝血因子分組比較，通過(guò)比較兩組冷沉淀的容量、Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量，驗(yàn)證全自動(dòng)血液成分分離機(jī)更改后參數(shù)的準(zhǔn)確性、制備方法的有效性，對(duì)冷沉淀凝血因子的質(zhì)量沒(méi)有影響，其各項(xiàng)質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果均符合《全血及成分血質(zhì)量要求》[7]。

1 材料與方法

1.1 血漿來(lái)源

抽取長(zhǎng)春市中心血站2019年1月至2020年4月采集的400 ml 合格血液60 袋，按照新鮮冰凍血漿制備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備而成。

1.2 設(shè)備、耗材、試劑

設(shè)備：-50℃血漿速凍機(jī)（MBF21，盧森堡多美達(dá)公司）、-40℃醫(yī)用低溫保存冰箱（DW-40L508，青島海爾集團(tuán)）、4℃血液保存冰箱[MBR-506D（H），日本松下電器產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社]、低溫離心機(jī)（賀利氏6000i，賽默飛世爾科技公司）、微電腦配平儀（LPYⅢ，蘇州市醫(yī)用儀器廠）、全自動(dòng)血液成分分離機(jī)[CompoMat G5，費(fèi)森尤斯卡比（中國(guó)）投資有限公司]、全自動(dòng)血凝分析儀（ACL TOP300，沃芬集團(tuán)）；耗材：CPDA 抗凝劑一次性使用去白細(xì)胞塑料血袋（山東威高醫(yī)用高分子生物制品股份有限公司）；試劑：纖維蛋白原測(cè)定試劑、因子Ⅷ缺乏血漿試劑、APTT 試劑、因子稀釋液、正常值血凝試劑質(zhì)控品、低值血凝試劑質(zhì)控品、ClcanA、ClcanB、沖洗液（沃芬集團(tuán)）。

1.3 參數(shù)設(shè)定

全自動(dòng)血液成分分離機(jī)的參數(shù)設(shè)置見(jiàn)表1～2。

表1 A 組全自動(dòng)血液成分分離機(jī)設(shè)置參數(shù)

表2 B 組全自動(dòng)血液成分分離機(jī)設(shè)置參數(shù)

1.4 制備方法

1.4.1 A 組使用全自動(dòng)血液成分分離機(jī)設(shè)置參數(shù)制備將合格新鮮冰凍血漿（冷沉淀半成品）從-40℃醫(yī)用低溫保存冰箱取出，在血液低溫操作臺(tái)上放置3～5 min使?jié){袋邊緣變軟，將其放置于2～6℃冰箱中融化16 h后，待新鮮冰凍血漿幾乎全部融化，取出配平、離心，離心轉(zhuǎn)速為4000 r/min，相對(duì)離心力為5170×g，離心半徑為28.9 cm，離心時(shí)間為20 min，離心溫度為2℃。將離心后的新鮮冰凍血漿（冷沉淀半成品）袋掛在擠壓板秤的兩個(gè)懸掛軸上，其上方導(dǎo)管分別卡入1 和2號(hào)感應(yīng)閥門(mén)內(nèi)，接近空袋根部的導(dǎo)管卡入3 號(hào)感應(yīng)閥門(mén)內(nèi)，空袋放在排氣夾板外，并保證各管路通暢，用掃碼槍先掃描主袋獻(xiàn)血條碼，再掃描空袋獻(xiàn)血條碼，最后掃描工作人員工號(hào)條碼，全自動(dòng)血液成分分離機(jī)門(mén)關(guān)閉，開(kāi)始運(yùn)行分離，直至A8 探測(cè)器探測(cè)到冷沉淀剩余容量20～30 ml 時(shí)，各感應(yīng)閥門(mén)卡夾會(huì)自動(dòng)夾住管路，分離機(jī)分別對(duì)冷沉淀凝血因子和去冷沉淀凝血因子冰凍血漿進(jìn)行稱重，熱合，工作人員確認(rèn)熱合完好、斷離，速凍。

1.4.2 B 組使用全自動(dòng)血液成分分離機(jī)設(shè)置參數(shù)制備操作方法同1.4.1，直至A8 探測(cè)器探測(cè)到冷沉淀剩余容量40～50 ml 時(shí)，各感應(yīng)閥門(mén)卡夾會(huì)自動(dòng)夾住管路，分離機(jī)分別對(duì)冷沉淀凝血因子和去冷沉淀凝血因子冰凍血漿進(jìn)行稱重，熱合，工作人員確認(rèn)熱合完好、斷離，速凍。

1.5 檢測(cè)方法

將待檢測(cè)的冷沉淀凝血因子置于37℃恒溫水浴箱，待其完全融化充分混勻后將袋內(nèi)血漿擠入至塑料試管內(nèi)3 ml，開(kāi)始離心，離心轉(zhuǎn)速3000 r/min，離心時(shí)間20 min，離心后取上清約1 ml，上機(jī)檢測(cè)。

1.6 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

容量：標(biāo)示量（ml）±10%；來(lái)源于200 ml 全血的冷沉淀凝血因子（1 U）：Ⅷ因子含量≥40 U/袋，纖維蛋白原含量≥75 mg/袋；來(lái)源于300 ml 全血的冷沉淀凝血因子（1.5 U）：Ⅷ因子含量≥60 U/袋，纖維蛋白原含量≥113 mg/袋；來(lái)源于400 ml 全血制備的冷沉淀凝血因子（2 U）：Ⅷ因子含量≥80 U/袋；纖維蛋白原含量≥150 mg/袋[6]。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

A 組的容量低于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。A 組的Ⅷ因子含量、纖維蛋白原含量與B 組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。

表3 全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備不同容量冷沉淀凝血因子質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果的比較（±s）

表3 全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備不同容量冷沉淀凝血因子質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果的比較（±s）

組別 例數(shù) 容量（ml/袋）Ⅷ因子含量（U/袋）纖維蛋白原含量（mg/袋）A 組（20～30 ml）B 組（40～50 ml）t 值P 值30 30 29.73±0.74 44.57±2.80 27.886＜0.001 103.78±15.06 104.68±24.42 0.860＞0.05 289.60±58.72 296.70±55.29 0.645＞0.05

3 討論

冷沉淀是用于輸血治療的常用成分血類型[8]，在其進(jìn)入機(jī)體后可形成纖維蛋白膜并對(duì)潰瘍創(chuàng)面產(chǎn)生機(jī)械牽拉作用，從而使創(chuàng)口收縮，并補(bǔ)充大量Ⅷ、Ⅰ等凝血因子，提高患者凝血因子水平，改善凝血功能[9]。凝血因子治療急性大出血可很好地激活患者內(nèi)源凝血系統(tǒng)[10]，盡早給予患者輸注冷沉淀對(duì)于凝血功能的糾正和搶救生命起到重要作用，同時(shí)還能夠降低其他血液制劑的輸注量，大大延長(zhǎng)了患者的輸血壽命，最大程度降低患者的不良反應(yīng)發(fā)生率[11]，且目前更多用于術(shù)后出血等治療[12]，根據(jù)長(zhǎng)春市中心血站供血科的反饋，長(zhǎng)春市臨床在進(jìn)行器官移植手術(shù)中，冷沉淀的應(yīng)用率達(dá)到較高的水平，臨床效果良好，冷沉淀一度呈現(xiàn)供不應(yīng)求的局面。

隨著科技發(fā)展的日新月異，血液成分制備技術(shù)也在不斷完善，傳統(tǒng)手工操作逐步向自動(dòng)化設(shè)備發(fā)展和轉(zhuǎn)變。全自動(dòng)血液分離機(jī)是現(xiàn)代信息社會(huì)的產(chǎn)物之一[13]，是采用新一代電動(dòng)驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)，對(duì)所有擠壓板推進(jìn)的力度、時(shí)間、距離、速度進(jìn)行精準(zhǔn)控制[14]。本研究對(duì)全自動(dòng)血液成分分離機(jī)的運(yùn)行參數(shù)進(jìn)行調(diào)整，設(shè)定適合的運(yùn)行參數(shù)來(lái)制備冷沉淀凝血因子。本研究結(jié)果顯示，首先檢查血袋在指定的感應(yīng)閥門(mén)安裝是否到位，將血漿袋稱重去皮。上下擠壓板同時(shí)移動(dòng)到50 mm，移除大部分去冷沉淀冰凍血漿，下擠壓板移動(dòng)到容量定量位置A 組為56.7 mm，容量為20～30 ml；B 組為55.2 mm，容量為40～50 ml；A 組和B 組下擠壓板相差1.5 mm。上擠壓板移動(dòng)到58.1 mm 擠凈多余的去冷沉淀冰凍血漿。感應(yīng)閥門(mén)關(guān)閉，上下擠壓板復(fù)位。熱合導(dǎo)管，并對(duì)去冷沉淀冰凍血漿容量進(jìn)行稱重。表2顯示按照表1設(shè)定的參數(shù)，用全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備不同容量的冷沉淀凝血因子，質(zhì)控結(jié)果顯示A 組的容量低于B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.001）；兩組的Ⅷ因子含量和纖維蛋白原含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果均達(dá)到《全血及成分血質(zhì)量要求》[7][容量：標(biāo)示量（ml）±10%；來(lái)源于400 ml 全血制備的冷沉淀凝血因子（2 U）：Ⅷ因子含量≥80 U/袋；纖維蛋白原含量≥150 mg/袋]。其中B 組容量更接近平均含量，保證冷沉淀凝血因子的質(zhì)量，需控制好制冷沉淀的容量[15]，數(shù)據(jù)顯示容量穩(wěn)定；且B 組的Ⅷ因子含量和纖維蛋白原含量均為高出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)1.5～2倍，與侯貽莉等[16]的研究結(jié)果一致，進(jìn)一步證明全自動(dòng)血液成分分離機(jī)在冷沉淀制備中的應(yīng)用價(jià)值。但本研究樣本量較少，還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入研究。

綜上所述，血液質(zhì)量是保障臨床治療效果的前提[17-18]，冷沉淀凝血因子質(zhì)量受制備方法影響[19-20]，采用全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備不同容量冷沉淀的質(zhì)量無(wú)差別，參數(shù)設(shè)定準(zhǔn)確、制備方法穩(wěn)定。并且此制備方法實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化、信息化，值得推廣與應(yīng)用。