李玉磊 劉莉敏 熊 靜 （武漢科技大學(xué)附屬天佑醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，武漢 430064）

急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）是重癥患者經(jīng)常發(fā)生的一種急性肺損傷，以肺部廣泛炎癥反應(yīng)和氧氣吸入減少為特征，常導(dǎo)致呼吸衰竭和多器官功能障礙，病死率高達(dá)60%，目前仍缺乏有效降低ARDS病死率的方法［1］。ARDS進(jìn)展中，嚴(yán)重炎癥反應(yīng)會誘導(dǎo)肺上皮細(xì)胞凋亡、壞死和纖維化，加速肺損傷［2］。因此，如何有效抑制肺上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)和凋亡對開發(fā)有效的ARDS治療策略意義重大。長鏈非編碼RNA（lnc-RNA）和微小RNA（miRNA）是非編碼RNA的重要成員，前期研究表明lncRNA和miRNA參與細(xì)胞增殖、代謝調(diào)控、組織分化等多種過程，其表達(dá)失調(diào)可能導(dǎo)致一系列功能障礙和疾?。?-4］。長基因間非編碼RNA 00707（LINC00707）位于10p14區(qū)，其作用已在成骨分化、結(jié)直腸癌、肝癌等疾病中得到了證實［5-7］。此外，有報道稱LINC00707通過靶向miR-30a-5p緩解脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞炎癥和凋亡，是脊髓損傷的潛在治療靶點［8］。靶基因預(yù)測顯示，miR-374a-3p與LINC00707存在結(jié)合位點。miR-374a-3p在骨關(guān)節(jié)炎患者軟骨組織和LPS誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞中表達(dá)降低，上調(diào)其表達(dá)可減輕LPS誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞損傷［9］。但LINC00707在ARDS中的作用及其是否靶向miR-374a-3p調(diào)控ARDS進(jìn)展尚不清楚。本研究采用LPS刺激肺上皮細(xì)胞體外模擬ARDS炎癥發(fā)病機(jī)制［10］，探討LINC00707靶向miR-374a-3p對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡和炎癥因子釋放的影響，為LINC00707/miR-374a-3p軸在ARDS中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料 人正常肺上皮細(xì)胞BEAS-2B購自武漢普諾賽生命科技公司；高糖DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Hyclone公司；LINC00707的小干擾RNA（si-LINC00707）、miR-374a-3p mimics、miR-374a-3p抑制劑（anti-miR-374a-3p）、LINC00707過表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA-LINC00707）及各自陰性對照（si-NC、miRNC、anti-miR-NC、pcDNA）購自上海生工生物公司；第一鏈cDNA合成試劑盒購自廣州吉賽生物科技公司；miRNA第一鏈cDNA合成試劑盒購自廣州復(fù)能基因公司；SYBR green master mix試劑盒購自南京諾維贊生物公司；IL-6、IL-1β ELISA試劑盒及Annexin V-FITC-PI凋亡檢測試劑盒購自上海碧云天生物公司；兔源裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase3）多克隆抗體（ab49822）、兔源cleaved-caspase9多克隆抗體（ab2324）、山羊抗兔IgG（ab205718）、兔源GAPDH單克隆抗體購自美國Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和分組 采用含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基37 ℃、5%CO2培養(yǎng)BEAS-2B細(xì)胞，細(xì)胞融合達(dá)到80%時按1∶4傳代。取2×105個對數(shù)期BEAS-2B細(xì)胞接種至6孔板，利用Lipofectamine2000將序列片段或質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至40%融合的BEAS-2B細(xì)胞，收集轉(zhuǎn)染48 h的BEAS-2B細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實驗。采用10 μg/ml LPS處理BEAS-2B細(xì)胞48 h構(gòu)建細(xì)胞損傷模型，記為LPS組。正常培養(yǎng)的BEAS-2B細(xì)胞記為對照組；轉(zhuǎn)染pcDNA、pcDNALINC00707、si-NC、si-LINC00707的BEAS-2B細(xì)胞分別記為pcDNA組、pcDNA-LINC00707組、si-NC組、si-LINC00707組。10 μg/ml LPS處理轉(zhuǎn)染si-NC、si-LINC00707、miR-NC、miR-374a-3p mimics、si-LINC-00707+anti-miR-NC、轉(zhuǎn) 染 si-LINC00707+anti-miR-374a-3p的BEAS-2B細(xì)胞48 h，依次記為LPS+si-NC組、LPS+si-LINC00707組、LPS+miR-NC組、LPS+miR-374a-3p組、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC組、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p組。

1.2.2 RT-qPCR檢測LINC00707和miR-374a-3p表達(dá) 采用Trizol試劑分離Con組、LPS組、LPS+si-NC組、LPS+si-LINC00707組、LPS+miR-NC組、LPS+miR-374a-3p組、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC組、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p組細(xì)胞總RNA，微量分光光度計測量不同RNA樣本純度和濃度。采用第一鏈cDNA合成試劑盒、miRNA第一鏈cDNA合成試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，SYBR green master mix試劑盒進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)檢測LINC00707和miR-374a-3p 表達(dá)。2-ΔΔCt分析 LINC00707 和 miR-374a-3p表達(dá)。LINC00707 F：5′-TCACATCTGTGAAAAGAGTGCT-3′；LINC00707 R：5′-TGCACCAAGAAAGTTGAGGGT-3′；GAPDH F：5′-GGAGCCAAAAGGGTCATC-3′；GAPDH R：5′-CCAGTGAGTTTCCCGTTC-3′；miR-374a-3p F：5′-CUUAUCAGAUUGUAUUGUAAUU-3′；miR-374a-3p R：5′-AAUUACAAUACAAUCUGAUAAG-3′；U6 F：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′；U6 R：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。

1.2.3 ELISA試劑盒檢測IL-6和IL-1β釋放量BEAS-2B細(xì)胞按1.2.1分組處理完畢后，收集上清，參照ELISA試劑盒說明書分析細(xì)胞上清中IL-6和IL-1β水平，表示IL-6、IL-1β釋放量。

1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡 采用預(yù)冷的PBS洗滌各組BEAS-2B細(xì)胞2次，重懸于1×結(jié)合緩沖液（1×106個/ml），將 5 μl Annexin V-FITC、5 μl PI分別添加到100 μl細(xì)胞懸液中，避光孵育20 min，補(bǔ)加1×結(jié)合緩沖液使總體積達(dá)到500 μl混勻，流式細(xì)胞儀檢測各組BEAS-2B細(xì)胞凋亡率。

1.2.5 Wesrern blot檢測cleaved-caspase3和cleavedcaspase9蛋白表達(dá) 預(yù)冷PBS洗滌各組BEAS-2B細(xì)胞2次，加入RIPA緩沖液冰上裂解30 min，于4 ℃、12 000 r/min離心10 min，收集上清，BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量，聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白，濕法轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜，室溫下用含5%脫脂乳Tris-吐溫20-緩沖鹽水（TBST）封閉膜2 h，4 ℃添加cleavedcaspase3（1∶500 稀釋）、cleaved-caspase9（1∶1 000 稀釋）、GAPDH（1∶2 500稀釋）一抗孵育過夜，TBST洗滌3次，室溫下添加山羊抗兔二抗IgG抗體（1∶2 000稀釋）孵育30 min，TBST洗滌3次，化學(xué)發(fā)光法檢測蛋白條帶，Image J軟件分析目的蛋白和GAPDH條帶灰度值表示目的蛋白表達(dá)。

1.2.6 雙熒光素酶報告實驗 starbase數(shù)據(jù)庫預(yù)測LINC00707和miR-374a-3p的結(jié)合位點，將包含miR-374a-3p結(jié)合位點的LINC00707野生（wt）序列及不含結(jié)合位點的LINC00707突變（mut）序列分別克隆至pmirGLO基本載體，構(gòu)建wt-LINC00707、mut-LINC00707熒光素酶報告質(zhì)粒，將miR-374a-3p mimics、miR-NC分別與wt-LINC00707或mut-LINC-00707共轉(zhuǎn)染BEAS-2B細(xì)胞，48 h后裂解各組細(xì)胞，以海腎熒光素酶熒光強(qiáng)度為內(nèi)參，雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測各組BEAS-2B細(xì)胞相對熒光素酶活性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，每組設(shè)3個平行，實驗獨立重復(fù)3次，結(jié)果以±s表示。采用獨立樣本t檢驗評估兩組間數(shù)據(jù)差異，采用單因素方差分析和Tukey's多重比較檢驗分析多組間差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞損傷中LINC00707和miR-374a-3p表達(dá) 與Con組相比，LPS組BEAS-2B細(xì)胞LINC00707表達(dá)顯著升高（P＜0.05），miR-374a-3p表達(dá)顯著降低（P＜0.05，表1）。

表1 LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞損傷中LINC00707和miR-374a-3p表達(dá)（±s，n=9）Tab.1 Expressions of LINC00707 and miR-374a-3p in LPS-induced lung epithelial cell injury （±s，n=9）

表1 LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞損傷中LINC00707和miR-374a-3p表達(dá)（±s，n=9）Tab.1 Expressions of LINC00707 and miR-374a-3p in LPS-induced lung epithelial cell injury （±s，n=9）

Note：Compared with Con group， 1）P＜0.05.

Groups Con LPS t P LINC00707 1.00±0.00 3.07±0.231）27.000 0.000 miR-374a-3p 1.00±0.00 0.38±0.041）47.250 0.000

2.2 干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放的影響 與Con組比較，LPS組BEAS-2B細(xì)胞LINC00707表達(dá)顯著升高（P＜0.05），IL-6和IL-1β釋放量顯著增加（P＜0.05）；與LPS+si-NC組比較，LPS+si-LINC00707組BEAS-2B細(xì)胞LINC00707表達(dá)顯著降低（P＜0.05），IL-6和IL-1β釋放量顯著減少（P＜0.05，表2）。

表2 干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放的影響（±s，n=9）Tab.2 Effect of interfering LINC00707 expression on release of inflammatory cytokines in LPS-induced lung epithelial cells （±s，n=9）

表2 干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放的影響（±s，n=9）Tab.2 Effect of interfering LINC00707 expression on release of inflammatory cytokines in LPS-induced lung epithelial cells （±s，n=9）

Note：Compared with Con group， 1）P＜0.05； compared with LPS+si-NC group， 2）P＜0.05.

Groups Con LPS LPS+si-NC LPS+si-LINC00707 F P 1.00±0.00 3.15±0.241）3.19±0.22 1.86±0.122）338.691 0.000 81.14±7.02 268.20±17.841）277.13±19.79 150.57±14.112）338.600 0.000 32.44±3.35 170.87±11.761）179.48±13.13 57.37±5.472）590.661 0.000 LINC00707IL-6/（pg·ml-1）IL-1β/（pg·ml-1）

2.3 干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡的影響 與Con組比較，LPS組BEAS-2B細(xì)胞凋亡率、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.05）；與 LPS+si-NC組比較，LPS+si-LINC00707組BEAS-2B細(xì)胞凋亡率、cleavedcaspase3和cleaved-caspase9蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05，圖1、表3）。

表3 干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡的影響（±s，n=9）Tab.3 Influence of interference with LINC00707 expression on apoptosis of LPS-induced lung epithelial cells （±s，n=9）

表3 干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡的影響（±s，n=9）Tab.3 Influence of interference with LINC00707 expression on apoptosis of LPS-induced lung epithelial cells （±s，n=9）

Note：Compared with Con group， 1）P＜0.05； compared with LPS+si-NC group， 2）P＜0.05.

Groups Con LPS LPS+si-NC LPS+si-LINC00707 F P Apoptosis rate（%）6.15±0.57 33.91±3.021）34.49±3.11 10.96±0.842）405.228 0.000 cleaved-caspase3 protein 0.24±0.02 0.66±0.051）0.68±0.05 0.31±0.032）302.238 0.000 cleaved-caspase9 protein 0.19±0.02 0.56±0.041）0.59±0.05 0.28±0.032）266.889 0.000

圖1 干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡的影響Fig.1 Effect of interference with LINC00707 expression on apoptosis of LPS-induced lung epithelial cells

2.4 LINC00707靶向調(diào)控miR-374a-3p表達(dá) Star-Base在線軟件預(yù)測顯示，miR-374a-3p與LINC00707具有特異性互補(bǔ)的核苷酸序列（圖2）。WT-LINC-00707共轉(zhuǎn)染中，與轉(zhuǎn)染miR-NC比較，轉(zhuǎn)染miR-374a-3p后BEAS-2B細(xì)胞相對熒光素酶活性顯著降低（P＜0.05）；MUT-LINC00707共轉(zhuǎn)染中，與轉(zhuǎn)染miR-NC比較，轉(zhuǎn)染miR-374a-3p后BEAS-2B細(xì)胞相對熒光素酶活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，表4）。pcDNA-LINC00707組BEAS-2B細(xì)胞miR-374a-3p表達(dá)比pcDNA組顯著降低（P＜0.05）；si-LINC00707組BEAS-2B細(xì)胞miR-374a-3p表達(dá)比si-NC組顯著升高（P＜0.05，表5）。

表4 雙熒光素酶報告實驗（±s，n=9）Fig.2 Complementary nucleotide sequence of LINC00707 and miR-374a-3p （±s，n=9）

表4 雙熒光素酶報告實驗（±s，n=9）Fig.2 Complementary nucleotide sequence of LINC00707 and miR-374a-3p （±s，n=9）

Note：Compared with miR-NC group， 1）P＜0.05.

Groups miR-NC miR-374a-3p t P WT-LINC00707 1.02±0.08 0.41±0.041）20.460 0.000 MUT-LINC00707 1.03±0.07 1.00±0.06 0.976 0.344

表5 LINC00707靶向調(diào)控miR-374a-3p表達(dá)（±s，n=9）Tab.5 LINC00707 targeted expression of miR-374a-3p（±s，n=9）

表5 LINC00707靶向調(diào)控miR-374a-3p表達(dá)（±s，n=9）Tab.5 LINC00707 targeted expression of miR-374a-3p（±s，n=9）

Note：Compared with pcDNA group， 1）P＜0.05； compared with si-NC group， 2）P＜0.05.

Groups pcDNA pcDNA-LINC00707 si-NC si-LINC00707 F P miR-374a-3p 1.00±0.00 0.35±0.031）0.99±0.06 3.14±0.292）603.332 0.000

圖2 LINC00707與miR-374a-3p的互補(bǔ)核苷酸序列Fig.2 Complementary nucleotide sequence of LINC00707 and miR-374a-3p

2.5 miR-374a-3p過表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放和凋亡的影響 與LPS+miR-NC組比較，LPS+miR-374a-3p組BEAS-2B細(xì)胞miR-374a-3p表達(dá)顯著升高（P＜0.05），IL-6和IL-1β釋放量、凋亡率、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05，圖3、表6）。

圖3 miR-374a-3p過表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡的影響Fig.3 Effect of miR-374a-3p overexpression on apoptosis of LPS-induced lung epithelial cells

表6 miR-374a-3p過表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放和凋亡的影響（±s，n=9）Tab.6 Effect of miR-374a-3p overexpression on releases of inflammatory factors and apoptosis of lung epithelial cells induced by LPS （±s，n=9）

表6 miR-374a-3p過表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放和凋亡的影響（±s，n=9）Tab.6 Effect of miR-374a-3p overexpression on releases of inflammatory factors and apoptosis of lung epithelial cells induced by LPS （±s，n=9）

Note：Compared with LPS+miR-NC group， 1）P＜0.05.

Groups LPS+miR-NC LPS+miR-374a-3p t P miR-374a-3p 1.00±0.00 2.96±0.221）26.727 0.000 IL-6/（pg·ml-1）273.14±18.29 173.54±11.121）13.959 0.000 IL-1β/（pg·ml-1）182.08±13.06 69.17±5.911）23.630 0.000 Apoptosis rate（%）35.63±3.15 13.14±1.031）20.358 0.000 cleaved-caspase3 protein 0.67±0.05 0.39±0.031）14.406 0.000 cleaved-caspase9 protein 0.58±0.04 0.31±0.031）16.200 0.000

2.6 抑制miR-374a-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放和凋亡的作用 與LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC組比較，LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p組BEAS-2B細(xì)胞miR-374a-3p表達(dá)顯著降低（P＜0.05），IL-6和IL-1β釋放量、凋亡率、cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表達(dá)顯著升高（P＜0.05，表7、圖4）。

表7 抑制miR-374a-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放和凋亡的作用（±s，n=9）Tab.7 Inhibition of miR-374a-3p expression reversed effect of interfering with LINC00707 expression on inflammatory factor release and apoptosis of LPS-induced lung epithelial cells （±s，n=9）

表7 抑制miR-374a-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放和凋亡的作用（±s，n=9）Tab.7 Inhibition of miR-374a-3p expression reversed effect of interfering with LINC00707 expression on inflammatory factor release and apoptosis of LPS-induced lung epithelial cells （±s，n=9）

Note：Compared with LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC group， 1）P＜0.05.

Groups LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p t P miR-374a-3p 1.00±0.00 0.36±0.041）48.000 0.000 IL-6/（pg·ml-1）146.17±11.88 224.87±18.691）10.661 0.000 IL-1β/（pg·ml-1）56.16±4.68 129.74±11.951）17.200 0.000 Apoptosis rate（%）10.02±0.93 25.24±2.181）19.265 0.000 cleaved-caspase3 protein 0.30±0.02 0.57±0.051）15.041 0.000 cleaved-caspase9 protein 0.25±0.02 0.47±0.051）12.256 0.000

圖4 抑制miR-374a-3p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了干擾LINC00707表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞凋亡的作用Fig.4 Inhibition of miR-374a-3p expression reversed effect of interfering with LINC00707 expression on apoptosis of LPS-induced lung epithelial cells

3 討論

近年多項研究揭示了lncRNA在ARDS中的作用。YAO等［11］研究發(fā)現(xiàn)，ARDS患者和LPS處理的人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（human pulmonary microvascular endothelial cells，HPMEC）中l(wèi)ncRNA轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄本1（MALAT1）表達(dá)上調(diào)，敲減MALAT1可抑制HPMEC凋亡，降低HPMEC中促炎細(xì)胞因子表達(dá)，減輕ARDS患者肺損傷。WANG等［12］研究證實，lncRNA X染色體失活特異轉(zhuǎn)錄物（XIST）可誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤、肺泡炎癥和纖維化，加重LPS誘導(dǎo)的小鼠ARDS。WANG等［13］報道TNF相關(guān)和異質(zhì)核蛋白相關(guān)免疫調(diào)節(jié)lncRNA（lnc-THRIL）可預(yù)測膿毒癥患者ARDS風(fēng)險增加，且lnc-THRIL表達(dá)水平與疾病嚴(yán)重程度、炎癥和死亡率呈正相關(guān)。因此，lnc-RNA在ARDS中有望成為診斷或治療靶點，本研究在LPS誘導(dǎo)的BEAS-2B細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)LINC00707表達(dá)上調(diào)，提示LINC00707可能參與ARDS發(fā)生發(fā)展，功能分析顯示，轉(zhuǎn)染si-LINC00707干擾LINC00707表達(dá)后LPS誘導(dǎo)的BEAS-2B細(xì)胞炎癥因子IL-6和IL-1β釋放量降低，凋亡率下降，表明干擾LINC00707表達(dá)可抑制LPS的誘導(dǎo)BEAS-2B凋亡和炎癥反應(yīng)。此外，干擾LINC00707表達(dá)后促凋亡蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表達(dá)顯著下調(diào)，進(jìn)一步證實其可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。既往研究表明，LPS可抑制人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5活力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)，而干擾LINC00707表達(dá)可減輕LPS誘導(dǎo)的MRC-5細(xì)胞損傷，與本研究中干擾LINC00707表達(dá)的保護(hù)作用一致［14］。表明干擾LINC00707通過抑制細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌對LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞損傷發(fā)揮保護(hù)作用。

LINC00707富含miRNA結(jié)合位點，多項研究證實LINC00707可結(jié)合miRNA負(fù)調(diào)控其表達(dá)參與多種疾病進(jìn)展［15-16］。如LINC00707通過靶向下調(diào)miR-876促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞體外增殖、遷移和侵襲和體內(nèi)腫瘤生長［17］。本研究證實miR-374a-3p是LINC-00707的直接靶點。據(jù)報道，miR-374a-3p在氧化修飾低密度脂蛋白（ox-LDL）作用的內(nèi)皮中表達(dá)降低，過表達(dá)miR-374a-3p可抑制內(nèi)皮凋亡和炎癥因子釋放，保護(hù) ox-LDL 引起的內(nèi)皮損傷［18］。此外，miR-374a-3p介導(dǎo)敲減lncRNA小核仁RNA宿主基因5（SNHG5）還可提高LPS誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞活力，降低細(xì)胞凋亡率和炎癥細(xì)胞因子水平，進(jìn)而抑制膿毒癥誘導(dǎo)的急性腎損傷［19］。本研究表明，LPS誘導(dǎo)的BEAS-2B細(xì)胞miR-374a-3p表達(dá)降低，過表達(dá)miR-374a-3p明顯下調(diào)cleaved-caspase3、cleavedcaspase9蛋白表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌，逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)，與過表達(dá)miR-374a-3p對LPS誘導(dǎo)的BEAS-2B細(xì)胞損傷保護(hù)效果類似。由于miR-374a-3p表達(dá)受LINC00707負(fù)調(diào)控，本研究推測在BEAS-2B細(xì)胞中可能存在LINC00707/miR-374a-3p途徑，恢復(fù)實驗表明，抑制miR-374a-3p表達(dá)明顯逆轉(zhuǎn)干擾LINC00707對LPS誘導(dǎo)的BEAS-2B細(xì)胞凋亡和炎癥因子分泌的抑制作用，進(jìn)一步證實LINC00707靶向負(fù)調(diào)控miR-374a-3p參與LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞損傷。

綜上，本研究證實干擾LINC00707通過靶向上調(diào)miR-374a-3p可抑制LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞炎癥因子釋放和凋亡，減輕LPS誘導(dǎo)的肺上皮細(xì)胞損傷，表明靶向抑制LINC00707/miR-374a-3p途徑可能是一種潛在的ARDS治療策略。