馬敬雪 鞏奇明 潘秀虹 何林檁 尤燕舞 （右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，百色 533000）

目前認(rèn)為，狼瘡性腎炎（lupus nephritis，LN）的 發(fā)生是由于機(jī)體的免疫應(yīng)答系統(tǒng)出現(xiàn)異常，導(dǎo)致抗原抗體免疫復(fù)合物沉積于腎臟，隨之產(chǎn)生趨化因子、黏附因子、促炎癥因子等細(xì)胞因子的釋放，引起腎臟組織發(fā)生氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致腎臟系膜增生和內(nèi)皮細(xì)胞損傷。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（T regulatory cells，Treg）是一類調(diào)控機(jī)體免疫功能的新型T細(xì)胞亞群，能維持免疫系統(tǒng)對(duì)自身成分的耐受，使機(jī)體保持免疫穩(wěn)態(tài)。當(dāng)其功能或數(shù)量發(fā)生異常變化時(shí)，會(huì)導(dǎo)致多種自身免疫性疾病的發(fā)生。Treg免疫療法有可能成為治療自身免疫性疾病的新途徑。Fractalkine（FKN）是CX3C-類趨化因子超家族中的唯一成員［1］。近年的研究證實(shí)，MRL/lpr小鼠腎皮質(zhì)FKN的表達(dá)量較正常對(duì)照組明顯升高［2］。同樣，有學(xué)者在臨床研究中發(fā)現(xiàn)，與健康者對(duì)比，SLE患者血清中FKN的水平明顯升高，并且與疾病的活動(dòng)度呈正相關(guān)，與外周血的Treg細(xì)胞計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)［3］。另一項(xiàng)研究顯示，在發(fā)病前或LN早期，輸注了FKN拮抗劑的MRL/lpr小鼠，其腎小球細(xì)胞增生、腎小球硬化、新月體形成及血管炎等表現(xiàn)明顯減輕，表明FKN拮抗劑能延緩LN的發(fā)病并改善病情進(jìn)展［4］。p38MAPK可被趨化因子、炎癥因子和其他外部應(yīng)激激活。p38MAPK信號(hào)通路一旦被激活，就可以啟動(dòng)p53、PAX6、CREB和ATF2等轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)生，從而調(diào)控促炎癥或凋亡相關(guān)基因的產(chǎn)生［5］。p38MAPK信號(hào)通路大量存在于T細(xì)胞和B細(xì)胞中，并且參與T細(xì)胞和B細(xì)胞的許多細(xì)胞過程和反應(yīng)［6-9］。許多數(shù)據(jù)表明，p38MAPK活性在炎癥反應(yīng)、正常免疫過程中起關(guān)鍵作用［10］。此外，p38MAPK被激活并參與人類自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡［11-12］。既往的研究發(fā)現(xiàn)，小鼠系膜細(xì)胞的增殖受FKN的影響，在高濃度FKN條件下，p38MAPK信號(hào)通路被激活。另外李波［13］研究證實(shí)，在單個(gè)核細(xì)胞中FKN可激活p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而調(diào)節(jié)單個(gè)核細(xì)胞的功能。然而迄今為止，F(xiàn)KN是否可通過p38MAPK信號(hào)通路參與Treg細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)鮮有報(bào)道。本研究旨在構(gòu)建LN小鼠模型，探究FKN在LN小鼠腎組織的表達(dá)及在LN Treg細(xì)胞凋亡中的作用及其分子機(jī)制，為闡明LN的發(fā)病機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 8周齡的BALB/c雌性小鼠80只，購(gòu)自湖南長(zhǎng)沙天勤實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0014；Pristane（S44062，上海源業(yè)生物科技有限公司）；FKN中和抗體（MAB571，R&D Systems，USA）；用于動(dòng)物的SB203580（S1076，Selleck，China）；用于動(dòng)物的U-46619（16450，Cayman，China）；IL-2、TGF-β（中國(guó)新生物科學(xué)公司）；用于細(xì)胞的U-46619（Santa Cruz Biotechnology，USA）；用于細(xì)胞的SB203580（S1863-1，Beyotime Biotechnology，China）；胰蛋白酶、雙抗、PBS、BCA蛋白定量試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；Annexin V-FITC、PI凋亡試劑檢測(cè)盒（BD）；胎牛血清、RPMI1640、紅細(xì)胞裂解液、Hanks液（Gibco）；免疫磁珠分選試劑盒（CD4+CD25+Regulatory T Cell Ⅰ solation Kit，No.130-091-014，Miltenyi Biotec）；兔抗 Bax一抗、兔抗Bcl-2一抗、鼠抗Cyt-c一抗、兔抗FKN一抗、兔抗Foxp3一抗、兔抗p38一抗（Abcam）；兔抗phosphop38一抗（Affinity公司）；鼠抗GAPDH（Proteintech）；山羊抗鼠IgG/辣根酶標(biāo)記及山羊抗兔IgG/辣根酶標(biāo)記（中杉金橋）；SiRNA腺病毒株（上海吉?jiǎng)P公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型構(gòu)建及分組 雌性BALB/c小鼠一次性腹腔注射500 μl Pristane，喂養(yǎng)期間小鼠自由飲水及進(jìn)食。12周后，根據(jù)課題組前期的驗(yàn)證方法檢測(cè)24 h尿蛋白含量、血清抗核抗體表達(dá)及PASM染色觀察腎組織病理改變以鑒定LN小鼠模型成功建立［14］。將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為正常組、Anti-FKN組、SB203580組、U-46619組、模型組、模型+Anti-FKN組、模型+SB203580組、模型+U-46619組、模型+Anti-FKN+SB203580組及模型+Anti-FKN+U-46619組，每組5只小鼠。各組小鼠腹腔注射給藥：①正常組：給予正常小鼠腹腔注射生理鹽水500 μl/（只·d），連續(xù)2周；②Anti-FKN組：給予正常小鼠腹腔注射Anti-FKN 5.0 μg/（只·d），連續(xù)2周；③SB203580組：給予正常小鼠腹腔注射SB203580 2 mg/（kg·d），連續(xù)2周；④U-46619組：給予正常小鼠腹腔注射U-46619 2 mg/（kg·d），連續(xù)2周；⑤模型組：給予模型組小鼠腹腔注射生理鹽水500 μl/（只·d），連續(xù)12周；⑥模型+Anti-FKN組：給予模型小鼠腹腔注射Anti-FKN 5.0 μg/（只·d），連續(xù)2周；⑦模型+SB203580組：給予模型小鼠腹腔注射SB203580 2 mg/（kg·d），連續(xù)2周；⑧模型+U-46619組：給予模型小鼠腹腔注射U-46619 2 mg/（kg·d），連續(xù)2周；⑨模型+Anti-FKN+SB203580組：給予模型小鼠腹腔注射Anti-FKN 5.0 μg/（只·d）及SB203580 2 mg/（kg·d），連續(xù)2周；⑩模型+Anti-FKN+U-46619組：給予模型小鼠腹腔注射Anti-FKN 5.0 μg/（只·d）及U-46619 2 mg/（kg·d），連續(xù)2周。干預(yù)2周后，采用頸椎脫臼法處死小鼠，摘取腎臟。

1.2.2 免疫組化方法 腎組織石蠟切片進(jìn)行程序性脫蠟，滴加一抗工作液4 ℃過夜，PBS緩沖液清洗后滴加二抗37 ℃孵育30 min，用二氨基聯(lián)苯胺顯色，然后用蘇木素復(fù)染。顯微鏡下觀察腎組織中的FKN、p-p38、Foxp3的蛋白表達(dá)情況。

1.2.3 細(xì)胞分選及培養(yǎng) 處死LN模型小鼠后浸泡在75%無(wú)水乙醇10 min，取出脾臟剪碎后置于200目的篩網(wǎng)過濾網(wǎng)中，用注射器的活塞進(jìn)行研磨（研磨過程中不斷加入Hank's液，保持脾臟的濕度）濾出單個(gè)細(xì)胞懸液；離心后加入等量紅細(xì)胞裂解液，放入37 ℃搖床5 min，制備RPMI1640培養(yǎng)基脾細(xì)胞懸液后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～4 h，使貼壁細(xì)胞貼壁；用巴氏滴管輕輕吸出懸浮細(xì)胞（即總淋巴細(xì)胞），并計(jì)數(shù)；加入終濃度為10 ng/ml的TGF-β和IL-2促進(jìn)細(xì)胞增殖及分化，培養(yǎng)42 h后開始分選；收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，每1×107個(gè)細(xì)胞用40 μl 分選Buffer重懸；每1×107個(gè)細(xì)胞加入10 μl CD4+CD25+Regulatory T cell BIoTin-Antibody Cocktail，2～8 ℃孵育10 min；每1×107個(gè)細(xì)胞體系中，加入38 μl 分選Buffer，20 μl Anti-Biotin Microbeads，2 μl CD25-PE Antibody，混勻后 2～8 ℃孵育 15 min；過柱收集不吸附的液體（即CD4+Treg細(xì)胞）；液體離心（300 g，5 min），用90 μl分選Buffer重懸，加入10 μl Anti-PE Microbeads，混 勻 后 2～8 ℃ 孵 育 15 min；過柱收集吸附于磁柱上的磁珠細(xì)胞（即CD4+CD25+Treg細(xì)胞）。收集分選出來(lái)的CD4+CD25+Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)移到RPMI1640完全培養(yǎng)基中，在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組 按每孔2×105個(gè)/ml在6孔板接種Treg細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)至70%融合時(shí)更換無(wú)血清培養(yǎng)液，將陽(yáng)性及陰性載體腺病毒加入無(wú)血清無(wú)抗生素的培養(yǎng)基中并充分混勻，使病毒終濃度為6×107pfu/ml，于室溫下孵育5 min后轉(zhuǎn)移至37 ℃、5%CO2條件下培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染48 h后于熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染情況。轉(zhuǎn)染成功后24～48 h觀察細(xì)胞狀態(tài)，生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，加入8 μg/ml的嘌呤霉素（Puromycin）選擇轉(zhuǎn)染細(xì)胞，直至正常細(xì)胞完全死亡，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。并采用Western blot法鑒定轉(zhuǎn)染結(jié)果。將LN Treg細(xì)胞分為7組：對(duì)照組、空載體組、FKN-KD組、U-46619組、SB203580組、FKN-KD+U-46619組及FKN-KD+SB203580組。在37 ℃、5%CO2飽和濕度條件下繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后收集各組細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 Western blot法 收集各組細(xì)胞至離心管離心，棄上清后用預(yù)冷的PBS液洗2次，加入150 μl預(yù)冷PI裂解液，冰浴30 min，4 ℃、12 000 r/min離心10 min，取上清，以二喹啉甲酸（BCA）法測(cè)定提取蛋白質(zhì)量濃度。每個(gè)樣本取30～50 μg蛋白加入5×SDS上樣緩沖液煮沸變性后，SDS-PAGE電泳，濕式電印跡法300 mA恒流轉(zhuǎn)至PVDF膜，3%BSA室溫封閉1 h，加TBST洗膜緩沖液洗3次，每次10 min加入一抗孵育4 ℃過夜，加TBST洗膜緩沖液洗3次，每次10 min，加入HRP標(biāo)記的羊抗兔或羊抗小鼠IgG（H+L），常溫振蕩孵育1 h，洗滌后采用Chemi-DocXRS 凝膠成像系統(tǒng)Qunatity One軟件采集圖像，灰度值采用NIH Image軟件（National Institute of-Health，Bethesda，Md，USA）測(cè)定。以目的蛋白條帶與GAPDH蛋白條帶灰度值的比值表示其相對(duì)含量。重復(fù)試驗(yàn)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)。服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間采用單因素方差分析。非正態(tài)分布則以中位數(shù)和極值表示，采用秩和檢驗(yàn)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組重復(fù)3次。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FKN、 p38MAPK及Foxp3在LN小鼠腎組織中的表達(dá) 經(jīng)U-46619干預(yù)后的正常小鼠及模型小鼠均在5～7 d內(nèi)連續(xù)死亡。與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠腎組織中的FKN及磷酸化p38MAPK的表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05），F(xiàn)oxp3染色陽(yáng)性的Treg細(xì)胞數(shù)明顯減少（P＜0.05）；與模型組相比，模型+anti-FKN組和模型+SB203580組腎組織中的FKN及磷酸化p38MAPK的表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05），F(xiàn)oxp3染色陽(yáng)性的Treg細(xì)胞數(shù)明顯增加（P＜0.05）；與模型+anti-FKN組和模型+SB203580組相比，模型+anti-FKN+SB203580組腎組織中的FKN及磷酸化p38MAPK的表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)（P＜0.05），F(xiàn)oxp3染色陽(yáng)性的Treg細(xì)胞數(shù)明顯增加（P＜0.05）。然而，模型+anti-FKN組和模型+SB203580組腎組織中的FKN及磷酸化p38MAPK的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖1）。

圖1 FKN、p38MAPK及Foxp3在LN小鼠腎組織中的表達(dá)Fig.1 Expression of FKN ， p38MAPK and Foxp3 in kidney of mice with LN

2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果的鑒定 根據(jù)腺病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞的操作說明書轉(zhuǎn)染Treg細(xì)胞24 h后用熒光倒置顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞可見綠色熒光均勻分布于懸浮Treg細(xì)胞內(nèi)（圖2）。

圖2 轉(zhuǎn)染后Treg細(xì)胞綠色熒光蛋白表達(dá)情況Fig.2 Expression of green fluorescent protein in transfected Treg cells

收集細(xì)胞并提取總蛋白，采用Western blot檢測(cè)正常Treg細(xì)胞及敲低FKN的Treg細(xì)胞中FKN的表達(dá)量。結(jié)果顯示，兩組細(xì)胞中均有FKN的表達(dá)，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中的FKN表達(dá)量明顯低于對(duì)照組（P＜0.05，圖3）。

圖3 敲低FKN基因后Treg細(xì)胞中FKN蛋白表達(dá)變化Fig.3 Expression of FKN protein in Tregs cells with FKN knockdown

2.3 FKN通過激活LN Treg細(xì)胞中p38MAPK磷酸化抑制Foxp3的表達(dá) 與對(duì)照組相比，敲低FKN后p38MAPK的磷酸化水平明顯降低，而Foxp3表達(dá)明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與FKNKD組相比，F(xiàn)KN-KD+U-46619組的p38MAPK磷酸化水平明顯升高，而Foxp3表達(dá)明顯降低，F(xiàn)KN-KD+SB203580組的p38MAPK磷酸化水平進(jìn)一步降低，而Foxp3表達(dá)進(jìn)一步增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），然而，SB203580組的p38MAPK磷酸化水平和Foxp3表達(dá)無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，U-46619組的p38MAPK磷酸化水平進(jìn)一步升高，而Foxp3表達(dá)進(jìn)一步降低；SB203580組的p38MAPK磷酸化水平明顯降低，而Foxp3表達(dá)明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），F(xiàn)KN-KD+U-46619組中的p38MAPK磷酸化和Foxp3的表達(dá)水平均無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。然而，非磷酸化p38MAPK均無(wú)明顯改變，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖4）。

圖4 Western blot檢 測(cè) 各 組 Foxp3、p-p38MAPK、p38MAPK相關(guān)蛋白的表達(dá)水平Fig.4 Expression levels of Foxp3， p-p38MAPK， p38MAPK protein detected by Western blot

2.4 FKN及p38MAPK信號(hào)通路影響相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá) 與對(duì)照組相比，F(xiàn)KN-KD組、SB203580組中的Bax及Cyt-c的表達(dá)明顯減少，Bcl-2的表達(dá)明顯增加，U-46619組中的Bax及Cyt-c的表達(dá)明顯增加，Bcl-2的表達(dá)明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與FKN-KD組相比，F(xiàn)KN-KD+U-46619組中Bax及Cyt-c的表達(dá)明顯增加，Bcl-2的表達(dá)明顯減少，而FKN-KD+SB203580組中Bax及Cyt-c的表達(dá)明顯減少，Bcl-2的表達(dá)明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與 U-46619組相比，F(xiàn)KN-KD+U-46619組中Bax及Cyt-c的表達(dá)明顯減少，Bcl-2的表達(dá)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與SB203580組相比，F(xiàn)KN-KD+SB203580組中Bax及Cyt-c的表達(dá)明顯減少，Bcl-2的表達(dá)明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。然而，與對(duì)照組相比，F(xiàn)KN-KD+U-46619組的Bax、Bcl-2及Cyt-c的表達(dá)均無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與FKN-KD組相比，SB203580組的Bax、Bcl-2及Cyt-c的表達(dá)均無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，圖5）。

圖5 Western blot檢測(cè)各組Bax、Bcl-2、Cyt-c相關(guān)蛋白的表達(dá)水平Fig.5 Expression levels of Bax， Bcl-2， Cyt-c protein detected by Western blot

3 討論

LN是一種自身免疫性疾病，其特征在于T細(xì)胞功能障礙，包括Treg細(xì)胞的凋亡及損傷［15-16］。Treg細(xì)胞具有免疫抑制和維持免疫耐受的功能，它在免疫調(diào)節(jié)和發(fā)育耐受中起著關(guān)鍵性的作用［15，17-19］。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)FKN參與細(xì)胞黏附、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和炎癥免疫反應(yīng)［20］。FKN在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化和腫瘤等免疫炎癥疾病組織中高表達(dá)，并且與疾病活動(dòng)性有關(guān)［21-27］。此外，F(xiàn)KN在LN患者的血清中高表達(dá)，并且與LN患者的腎損害程度呈正相關(guān)［4，22］。研究證實(shí)，F(xiàn)KN是一種自身免疫性疾病中T細(xì)胞遷移相關(guān)的關(guān)鍵趨化因子。FKN在Treg細(xì)胞中過度表達(dá)，對(duì)Treg細(xì)胞具有較強(qiáng)的趨化作用，從而影響Treg細(xì)胞的功能，最終導(dǎo)致免疫失衡，加速免疫疾病的進(jìn)展［28］。因此，本課題組認(rèn)為趨化因子FKN調(diào)控Treg細(xì)胞的功能，從而參與LN的發(fā)生發(fā)展過程。重要的是，本課題組的前期研究已經(jīng)證實(shí)，在LN小鼠模型的血液中Treg細(xì)胞的比例顯著降低，腎組織中Foxp3表達(dá)量也顯著減少［14］。而在本研究中，采用免疫組化法、Western blot法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，抑制和（或）敲低FKN的表達(dá)后，則可增加LN腎組織及Treg細(xì)胞中Foxp3的表達(dá)，減少Treg細(xì)胞中促凋亡蛋白的表達(dá)，增加抗凋亡蛋白的表達(dá)［29］。然而，F(xiàn)KN如何調(diào)控Foxp3的表達(dá)及誘導(dǎo)Treg細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制至今仍未闡明。

p38MAPK家族的四個(gè)主要成員包括p38、MAPK11、SAPK4和SAPK3，它們被趨化因子、炎癥因子、紫外線輻射、熱休克、高滲壓和其他外部應(yīng)激激活。p38MAPK通路一旦被激活，就可以啟動(dòng)p53、PAX6、CREB和ATF2等轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)生，從而調(diào)控促炎癥或凋亡相關(guān)基因的產(chǎn)生［5］。p38MAPK介導(dǎo)重要生物學(xué)反應(yīng)的信號(hào)，包括轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化、炎癥細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生［30-31］。LIU等［32］發(fā)現(xiàn)，單核細(xì)胞中的p38MAPK信號(hào)通路在LN中起重要的致病作用。另一個(gè)研究發(fā)現(xiàn)，SLE小鼠的腎臟組織中p38MAPK mRNA水平顯著升高［12］。系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠的腎損傷和IgG的產(chǎn)生依賴于p38MAPK的激活，p38MAPK的激活上調(diào)了SLE小鼠的趨化因子和IgG的產(chǎn)生［32］。p38MAPK信號(hào)通路是LN炎癥反應(yīng)的一個(gè)關(guān)鍵途徑［33-34］。本研究結(jié)果顯示，p38MAPK的磷酸化水平在LN小鼠中的血清和腎臟組織中高表達(dá)。大量的研究已經(jīng)表明，p38MAPK信號(hào)通路在促炎細(xì)胞因子合成前的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程中起著至關(guān)重要的作用，這使得p38MAPK信號(hào)通路的不同組成部分成為炎癥性疾病和自身免疫性疾病潛在的治療靶點(diǎn)［10，35］。自1993年發(fā)現(xiàn)以來(lái)，p38MAPK因其在廣泛的細(xì)胞過程中的作用而備受關(guān)注，尤其是適應(yīng)性免疫過程［2，6，36-39］。p38MAPK豐富地存在于T細(xì)胞和B細(xì)胞中［7-9，40］；因此，p38MAPK信號(hào)通路必須在T細(xì)胞和B細(xì)胞的許多細(xì)胞過程和反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。有證據(jù)表明激活p38MAPK信號(hào)通路可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡［41］。另外，還有研究發(fā)現(xiàn)，LN患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中磷酸化p38MAPK表達(dá)水平明顯上調(diào)［32］。在本研究中，抑制和（或）敲低FKN的表達(dá)，則減少LN模型小鼠腎組織及Treg細(xì)胞中磷酸化p38MAPK的表達(dá)；此外，p38MAPK的激活劑可減少Foxp3及抗凋亡蛋白的表達(dá)；然而，p38MAPK的抑制劑則可逆轉(zhuǎn)上述因子的表達(dá)。這說明，F(xiàn)KN可通過激活p38MAPK信號(hào)通路誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的凋亡，減少Foxp3的表達(dá)。

綜上所述，F(xiàn)KN可能通過激活p38MAPK信號(hào)通路參與Treg細(xì)胞的凋亡過程，從而參與LN的發(fā)生和發(fā)展。