亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        環(huán)境中毒死蜱的酶聯(lián)免疫分析方法研究

        2022-02-07 02:08:24魏茂瓊蘭珊珊張玉玲劉宏程
        廣東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年12期
        關(guān)鍵詞:包被毒死抗原

        魏茂瓊,蘭珊珊,王 麗,林 昕,張玉玲,劉宏程

        (1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所,云南 昆明 650222;2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估實(shí)驗(yàn)室(昆明),云南 昆明 650223;3.大理州煙草公司祥云縣分公司芮家煙站,云南 大理 672100)

        【研究意義】環(huán)境中殘留的農(nóng)藥直接影響人體健康[1]。有機(jī)磷農(nóng)藥使用量大[2-3],且毒性強(qiáng),是環(huán)境中殘留農(nóng)藥檢出較高的農(nóng)藥之一[4]。毒死蜱,即O,O-二乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸酯,又名氯吡硫磷,是一種中等毒性的有機(jī)磷農(nóng)藥。由于毒死蜱廣泛使用及具有較好的穩(wěn)定性,因此在很多國家和地區(qū)的環(huán)境介質(zhì)中均已檢測到其殘留[3],可見,快速檢測毒死蜱對保障人類身體健康非常重要?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】土壤是毒死蜱的主要環(huán)境介質(zhì)[5],在土壤中毒死蜱可以發(fā)生吸附作用及光降解、微生物降解等作用。土壤中毒死蜱的半衰期為6.3 h 至100 d,半衰期期間帶來了毒死蜱在環(huán)境中的積累。農(nóng)藥在田間施用后約10%作用于作物,80%~90%將進(jìn)入土壤。曾阿瑩等[6]研究了我國福州某蔬菜基地43 個土壤樣品中有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留,檢測結(jié)果顯示,毒死蜱的最大殘留量為9.77 mg/kg,檢出率高達(dá)97.7%。在美洲附近的海洋沉積物,甚至在北極圈土壤樣品中均檢出毒死蜱[7-8]。毒死蜱可通過地表徑流或田面主動排水進(jìn)入河流湖泊,從而造成水體污染。調(diào)查發(fā)現(xiàn),太湖水體的毒死蜱質(zhì)量濃度區(qū)間為nd(未檢出)~13.6 μg/L,平均值達(dá)4.8 μg/L[9]。我國《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB5749-2006)規(guī)定毒死蜱的限值是0.03 mg/L。目前,毒死蜱農(nóng)藥的檢測方法主要有色譜法[10-11]、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[12]、光譜分析法[13]、電化學(xué)法[14-15]、免疫分析法[16-17]和酶抑制法[18]等。這些檢測方法存在一些缺點(diǎn),如色譜法儀器成本高、操作復(fù)雜、對專業(yè)人員要求高、檢測周期長、前處理復(fù)雜等[19],不能應(yīng)對田間地頭等檢測場景;光譜分析法雖然操作簡單,但儀器設(shè)備昂貴;電化學(xué)法檢測靈敏快速,但檢測物中的氨基酸、蛋白質(zhì)等成分會干擾農(nóng)藥檢測效果[20]?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)以血清和抗原的特異性結(jié)合為基礎(chǔ),方法靈敏度高、反應(yīng)時間短、專一性強(qiáng),對檢測人員專業(yè)性和環(huán)境的要求不高,檢測裝置價格低,更加適合現(xiàn)場大量樣品的篩查。【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究采用ELISA 方法快速檢測環(huán)境中的毒死蜱,從靈敏度、交叉反應(yīng)及有機(jī)溶劑對抗體的影響等方面研究建立間接競爭ELISA 酶聯(lián)免疫檢測法。通過快速檢測方法實(shí)現(xiàn)對土壤、水體等基質(zhì)中毒死蜱殘留的現(xiàn)場監(jiān)測,保障環(huán)境質(zhì)量安全,為環(huán)保部門提供一種低成本、快速簡便的分析方法。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)材料

        甲醇(色譜純,德國Merck 公司),96 孔板(Costar 公司),TMB 雙組份顯色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司),活性炭(DIKMA 公司),毒死蜱抗原、毒死蜱抗體(深圳市科捷實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司),羊抗鼠IgG-HRP(Biosharp 公司),毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所,100 μg/mL),無水醋酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、無水硫酸鈉、氯化鈉、硫酸、吐溫-20、乙酸乙酯、二氯甲烷、二甲基亞砜、乙酸(分析純,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:用無水甲醇溶解毒死蜱原藥,配制成1 000 mg/L 儲備液,用PBS 緩沖液稀釋成1 000、500、100、10、5、1 μg/L 的梯度工作溶液。

        主要儀器設(shè)備:PL-9602G 酶標(biāo)儀(北京普朗新技術(shù)有限公司),QY-300 電動勻漿機(jī)(江蘇江陰周莊科研器械廠),N-EVAP 氮吹儀(Organomation 公司),DNP-9162 型恒溫箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

        土壤樣品采集布點(diǎn)、采樣要求依據(jù)《土壤環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范》(HJ/T166),采集樣品后密封、避光,可于冷凍條件下保存40 d。除去樣品中的異物(枝棒、葉片、石子等)后完全混勻,過孔徑250 μm 篩備用。地下水的采集及保存參考《地下水質(zhì)分析方法 第2 部分:水樣的采集和保存》(DZ/T0064.2-2021),飲用水的采集及保存參考《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 水樣的采集和保存》(GB/T5750.2 -2006)。采集的水樣保存于4℃冰箱中,存儲時間在3 d 以內(nèi)。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 樣品中毒死蜱的提?。?)土樣中毒死蜱的提?。和翗訛槲次廴镜氖卟颂锿寥?。樣品前處理與檢測供試土壤為潮土,供試土壤中毒死蜱未檢出。稱取土壤樣品15 g,置于250 mL 錐形瓶中,加入50 mL 乙酸乙酯-乙酸混合液(體積比99 ∶1),振蕩1 h,收集上清液于250 mL 錐形瓶中,加入20% NaCl 溶液20 mL,振蕩10 min,靜置30 min 后取上層有機(jī)相,使用無水硫酸鈉脫水并濃縮至10 mL,濃縮液置于50 mL 離心管中并加入40 mg 活性炭。振蕩一定時間,用濾紙過濾、濃縮至近干,用含有5%甲醇的PBS溶液定容至2.0 mL,備用。

        (2)水樣中毒死蜱的提?。喝∷畼?00 mL于500 mL 分液漏斗中,加入二氯甲烷30 mL,振蕩提取3 min。靜置分層,取下層提取液用無水硫酸鈉玻璃漏斗過濾,收集。重復(fù)上述提取步驟,合并兩次萃取液。將二氯甲烷萃取液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中40 ℃水浴蒸發(fā)至近干,用含有5%甲醇的PBS 溶液定容至2.0 mL,備用。

        1.2.2 ELISA 操作 采用間接競爭酶聯(lián)免疫方法檢測。將包被抗原稀釋,加100 μL/孔,4 ℃冷藏過 夜;洗 滌3 次,250 μL/ 孔(下 同),加入封閉液200 μL/ 孔,37 ℃恒溫放置2 h;洗滌,加稀釋好的不同梯度毒死蜱工 作溶液(待測樣本液)50 μL/ 孔,加一定稀釋倍數(shù)的抗血清50 μL/ 孔,37 ℃反應(yīng)1 h;洗滌,加入稀釋的酶標(biāo)二抗100 μL/孔,37 ℃放置30 min;洗滌,加入顯色液100 μL/孔,室溫避光顯色10 min;加50 μL/孔終止液,測定OD450nm吸光值。加樣孔(加有競爭物)測得的OD450nm值(B)與空白孔(不加競爭物)測得的OD450nm值(B0)之間的比值即為結(jié)合率。

        1.3 試驗(yàn)條件優(yōu)化

        1.3.1 抗原、抗體最適工作濃度 用方陣試驗(yàn)法優(yōu)化抗原、抗體最適工作濃度。包被抗原用pH9.6 的碳酸鹽緩沖液稀釋成不同質(zhì)量濃度,包被于酶標(biāo)板,同一個包被質(zhì)量濃度對應(yīng)不同的一抗質(zhì)量濃度,每個處理3 次重復(fù)。

        1.3.2 最佳包被條件 包被抗原吸附于酶標(biāo)板的穩(wěn)定程度與時間、溫度有關(guān),時間增加和溫度升高在一定區(qū)間內(nèi)能增加固定效果。但若過長時間的高溫孵育會造成蛋白變性,可能降低包被抗原的固定效果。雖然低溫不利于包被原與酶標(biāo)板之間的固定效果,但低溫下延長包被時間,既不影響蛋白活性,又可以增加固定效果。本試驗(yàn)選擇了4、25(室溫)、37、43 ℃共4 個溫度條件,其中4 ℃包被時間要長,設(shè)12、24 h;室溫下包被1、2、4 h;37℃包被 l、2、3 h;43 ℃包被 l、2、3 h。用ELISA 法檢測后測定 OD450nm值,以最高OD450nm值的包被條件作為最佳包被溫度和時間。

        1.3.3 最佳封閉時間及競爭反應(yīng)時間 為了減少非特異性,封閉中的蛋白會非特異性將ELISA 板中沒有結(jié)合包被物的位點(diǎn)封閉,這樣后續(xù)加入的抗原或抗體就不會再與ELISA 板發(fā)生非特異性結(jié)合,使ELISA 結(jié)果更加準(zhǔn)確。因此選擇37℃下加入BSA 溶液,封閉30 min、1 h、2 h,經(jīng)過間接競爭ELISA 法操作,確定最佳封閉時間。競爭反應(yīng)時間控制為5、15、30、45、60 min 等5 個梯度,測定OD450nm值。

        1.3.4 有機(jī)溶劑最佳濃度 一抗加入前,添加含有不同體積分?jǐn)?shù)甲醇的PBS 溶液于已包被的酶標(biāo)板中,對照添加純的PBS 溶液,計算抑制率,通過抑制率分析不同甲醇體積分?jǐn)?shù)對結(jié)合反應(yīng)的影響程度。

        式中,ODmax為無甲醇時的吸光度值,ODx為加入甲醇時的吸光度值,ODmin為空白對照孔的吸光度值。

        1.3.5 酶標(biāo)二抗最佳濃度 將抗原、抗體按照最佳稀釋度進(jìn)行ELISA 操作,酶標(biāo)二抗用PBS 緩沖液稀釋成不同比例(1∶4 000、1 ∶8 000、1 ∶16 000、1 ∶32 000、1 ∶64 000、1 ∶128 000)。反應(yīng)結(jié)束后通過多功能酶標(biāo)儀讀取OD450nm,選取吸光度值在1.0 左右的稀釋度為最佳濃度。

        1.4 方法的準(zhǔn)確性與精密度試驗(yàn)

        1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立、靈敏度及線性范圍確定 在上述優(yōu)化工作條件的基礎(chǔ)上,按照ELISA方法進(jìn)行操作,建立該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)過線性擬合得出該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢測限(靈敏度)和線性范圍。

        1.4.2 添加回收試驗(yàn) 將毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品分別添加到3 種土壤、3 種水樣中,使毒死蜱最終質(zhì)量濃度在土壤中為10、100、1 000 μg/kg。用建立的方法和LC-MS/MS 測定樣品中的毒死蜱質(zhì)量濃度,計算回收率和變異系數(shù)。

        1.4.3 精密度測定 由兩個試驗(yàn)人員使用相同的儀器設(shè)備,在1 d 內(nèi)向土壤、水、蔬菜中添加100 μg/L 標(biāo)樣并測定3 次。由相同試驗(yàn)人員使用相同的試劑盒,在添加農(nóng)藥的當(dāng)天及第1、3、5、7 天,通過向3 種土壤、3 種水樣中添加100 μg/L標(biāo)樣并測定3 次。

        1.4.4 特異性測定 對5 種毒死蜱的類似結(jié)構(gòu)化合物(甲基毒死蜱、2-羥基-3,4,6-三氯-吡啶、殺螟硫磷、對硫磷、馬拉硫磷)進(jìn)行試驗(yàn),以明確本試驗(yàn)方法的特異性。

        1.5 方法的穩(wěn)定性試驗(yàn)

        將同一次配制的抗體及包被了抗原的板分別保存于4 ℃和-20 ℃,于保存0、1、l0、20、30、60、90、120、150、180 d 進(jìn)行間 接競爭ELISA檢測,OD450nm變化值<0.05,則檢測結(jié)果有效。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 試驗(yàn)條件優(yōu)化結(jié)果

        2.1.1 抗原、抗體最適工作濃度 以O(shè)D450nm值在1.0 附近的數(shù)值作為選擇,同時參考抗原、抗體用量相對較少的質(zhì)量濃度組合,作為抗原、抗體的最優(yōu)工作質(zhì)量濃度。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果(表1),確定包被抗原質(zhì)量濃度為3.56 mg/L,抗血清(抗體)的稀釋倍數(shù)為3 200 倍。在進(jìn)行實(shí)際樣本測定時,樣品前處理的提取液可能會影響ELISA 測定結(jié)果。

        表1 抗原、抗體最適工作濃度優(yōu)化結(jié)果(OD450mm)Table 1 Optimized working concentrations of antigen and antibody (OD450mm)

        2.1.2 最佳包被條件 采用ELISA 法測定 OD450nm值,選擇最高OD450nm值的包被條件作為最佳包被溫度和時間。其中,4 ℃下包被12 h 的OD450nm值為1.132,室溫下包被4 h 的OD450nm值為0.936,37 ℃下包被3 h 的OD450nm值為0.985,可見,抗原包被效果最好的是4 ℃下包被12 h。

        2.1.3 最佳封閉時間及競爭反應(yīng)時間 進(jìn)行封閉處理時,OD450nm值隨著封閉時間的延長先增加后急速降低,這可能因?yàn)榈鞍自陂L時間的孵育溫度下發(fā)生變性。吸光度值在封閉1 h 和1.5 h 的吸光度值較高,分別為1.208、1.214,考慮到時間因素,以封閉1 h 較合適??刂聘偁幏磻?yīng)時間,測定各孔OD450nm值。由圖1 可知,當(dāng)反應(yīng)時間超過60 min,OD450nm值基本趨于穩(wěn)定,因此選擇60 min為最佳反應(yīng)時間。

        圖1 競爭反應(yīng)時間的選擇Fig.1 Selection of competitive reaction times

        2.1.4 有機(jī)溶劑最佳濃度 結(jié)果(表2)顯示,甲醇濃度超過5%時,抗原抗體結(jié)合反應(yīng)發(fā)生明顯的抑制作用,說明過量的甲醇會抑制抗體抗原結(jié)合。因此,選擇5%為最佳甲醇濃度。

        表2 甲醇濃度對抗原抗體結(jié)合反應(yīng)抑制作用的影響Table 2 Effect of methanol concentration on inhibition of on antigen-antibody binding reaction

        2.1.5 酶標(biāo)二抗最佳濃度 根據(jù)抗原最佳包被質(zhì)量濃度與血清最佳稀釋度的確定結(jié)果,反應(yīng)結(jié)束后通過多功能酶標(biāo)儀讀取OD450nm,選取吸光度值在1.0 左右的稀釋度為最佳質(zhì)量濃度。當(dāng)酶標(biāo)二抗稀釋度為64 000 時,吸光度值為1.089,以該稀釋度為二抗工作質(zhì)量濃度。

        2.2 方法的準(zhǔn)確性及精密度

        2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及靈敏度 在上述優(yōu)化的體系條件下,將一系列毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行間接競爭抑制試驗(yàn)。本方法毒死蜱的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線在質(zhì)量濃度范圍5.0~1 000 μg/L 間均呈良好的線性關(guān)系。以結(jié)合率B/B0為縱坐標(biāo),以不同標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)并進(jìn)行回歸分析,回歸方程為B/B0=-24.87 logC +97.55,相關(guān)系數(shù)R2>0.99,毒死蜱的IC50=81.65 μg/L,檢出限IC20為5.1 μg/L。

        圖2 競爭反應(yīng)時間的選擇Fig.2 Selection of competitive reaction times

        2.2.2 樣品添加回收試驗(yàn) 選擇不含毒死蜱的土壤和水,添加10、100、1 000 μg/L 毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品,經(jīng)過簡單前處理后進(jìn)行回收試驗(yàn)。結(jié)果(表3)顯示,采用ELISA 方法測定土壤空白與PBST 空白得到的OD 值無顯著差異,說明基質(zhì)空白對抗原抗體結(jié)合反應(yīng)不產(chǎn)生干擾,回收率在70%~110%之間,相對偏差在11%以內(nèi),符合檢測方法的需求。同樣的樣品經(jīng)過前處理后,用常規(guī)氣相色譜法進(jìn)行測定,結(jié)果回收率在70%~115%之間,相對偏差在11%以內(nèi)??梢?,ELISA 方法結(jié)果準(zhǔn)確,操作簡單,適用于土壤、水中毒死蜱的檢測。

        表3 樣品添加回收試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Recovery test results of samples

        2.2.3 精密度分析 由兩個試驗(yàn)人員使用相同的測定方法,在1 d 內(nèi)通過向土壤和純凈水中添加100 μg/kg 的標(biāo)樣,測定3 次。不同人員重復(fù)測定土壤和水基質(zhì)中的毒死蜱,相對偏差為4.04%和2.82%(表4)。從表5 可以看出,不同時間重復(fù)性測定不同土壤中毒死蜱的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.37%~8.23%之間;不同時間重復(fù)性測定不同水質(zhì)毒死蜱的相對偏差在3.01%~6.59%之間。測試結(jié)果均符合檢測方法中對相對偏差的規(guī)定。

        表4 兩人測定毒死蜱的重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n=3)Table 4 Replicated test results of chlorpyrifos determination by two detectors (n=3)

        表5 連續(xù)7 d 測定毒死蜱的重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n=3)Table 5 Repeated test results of chlorpyrifos determination in consecutive 7 days (n=3)

        2.2.4 特異性分析 在最佳條件下測定5 種毒死蜱的類似結(jié)構(gòu)物,結(jié)果顯示,抗體與甲基毒死蜱的交叉反應(yīng)率為62.58%,與2-羥基-3,4,6-三氯-吡啶的交叉反應(yīng)率為11.1%,與殺螟硫磷、對硫磷、馬拉硫磷的交叉反應(yīng)率分別為0.09%、0.14%、0.05%。可見,甲基毒死蜱與毒死蜱的抗原決定簇結(jié)構(gòu)相近,而其他農(nóng)藥不會對該抗體造成太明顯干擾。

        2.3 方法的穩(wěn)定性

        將同一次配制的抗體及包被了抗原的板分別保存于4 ℃和-20 ℃下,隨著保存時間的增加,間接ELISA 法測定結(jié)果(表6)顯示,OD450nm的變化值均小于0.05,因此,在180 d 內(nèi)試劑盒儲存在4 ℃或-20 ℃下都不影響使用。

        表6 方法的穩(wěn)定性結(jié)果(OD450mm)Table 6 Stability result of the method (OD450mm)

        3 討論

        酶聯(lián)免疫法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單等優(yōu)點(diǎn),但影響因素也很多,因此需要優(yōu)化反應(yīng)體系中的各種條件。本研究通過優(yōu)化抗原、抗體及酶標(biāo)二抗的最適濃度,在用量最少的前提下,選擇OD450nm值在1.0 左右的質(zhì)量濃度組合,抗體濃度過高會造成浪費(fèi)及結(jié)果不穩(wěn)定,濃度過低則反應(yīng)結(jié)果不準(zhǔn)確。由于反應(yīng)體系涉及到蛋白,因此體系反應(yīng)時間很關(guān)鍵,本試驗(yàn)研究了封閉時間及競爭時間,吸光度值隨著時間的延長先增加后急速降低,這可能是因?yàn)榈鞍自陂L時間的孵育溫度下發(fā)生變性,因此選取封閉時間和反應(yīng)時間均為1 h。樣品提取液中的有機(jī)溶劑會影響抗原抗體的結(jié)合率,試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)樣品提取液中甲醇體積分?jǐn)?shù)增加,抗原抗體結(jié)合反應(yīng)沒有明顯被抑制,但甲醇體積分?jǐn)?shù)超過5%,抗原抗體結(jié)合反應(yīng)發(fā)生了明顯的抑制作用,這與魏松紅等[21]的研究結(jié)果一致。OD450nm在5%體積分?jǐn)?shù)時取得最大值,說明過量的甲醇會降低抗體和包被抗原的結(jié)合率,使吸光度降低。TMB 與辣根過氧化物酶的濃度及反應(yīng)時間對檢測也有影響,后續(xù)試驗(yàn)將對顯色方面的試劑濃度及反應(yīng)時間進(jìn)行研究。

        土壤及水等不同基質(zhì)存在的干擾物質(zhì)有所差異,需要根據(jù)基質(zhì)間的差異選擇不同的提取方法進(jìn)行毒死蜱的提取,才能更準(zhǔn)確地檢測樣品中的實(shí)際農(nóng)藥含量[22-23]。張超等[24]研究水、土壤中毒死蜱的提取方法,認(rèn)為水樣采用石油醚提取、土壤采用乙酸乙酯-石油醚提取并凈化為佳。本試驗(yàn)前期對土壤及水中毒死蜱農(nóng)藥的提取進(jìn)行了方法摸索,選擇相對簡單快捷的前處理方法與酶聯(lián)免疫法結(jié)合,本試驗(yàn)方法的建立適合黃壤、棕壤、黃棕壤,純凈水、自來水、河水等環(huán)境樣品的毒死蜱檢測。毒死蜱的結(jié)構(gòu)類似物不會干擾檢測體系,保障了方法的特異性;通過保存條件的研究明確了方法的穩(wěn)定性;通過回收試驗(yàn)、不同人員操作及靈敏度試驗(yàn)確定方法的精密度。

        4 結(jié)論

        本試驗(yàn)酶優(yōu)化了可快速檢測環(huán)境中毒死蜱的間接競爭ELISA 試驗(yàn)條件,選擇甲醇含量5%的PBS 提取液提取環(huán)境樣品,在最佳反應(yīng)條件(包被抗原質(zhì)量濃度為3.56 mg/L,抗血清(抗體)的稀釋倍數(shù)為3 200 倍,抗原包被效果最好的是4 ℃下包被12 h、封閉1 h,酶標(biāo)二抗稀釋度為64 000)基礎(chǔ)上,建立了毒死蜱的標(biāo)準(zhǔn)曲線,毒死蜱質(zhì)量濃度對數(shù)與吸光度值成線性關(guān)系,回歸方程為B/B0=-24.87 logC+97.55,相關(guān)系數(shù)R2>0.99,毒死蜱的IC50=81.65 μg/L,檢出限IC20為5.1 μg/L。本試驗(yàn)建立的間接競爭ELISA 法具有一定的特異性、穩(wěn)定性和精確性,可應(yīng)用于檢測不同類型的土壤及水樣中的毒死蜱,能夠?qū)崿F(xiàn)快速、靈敏的毒死蜱農(nóng)藥殘留檢測。

        猜你喜歡
        包被毒死抗原
        多糖包被在急性呼吸窘迫綜合征發(fā)生、診斷及治療中的作用研究進(jìn)展
        ELISA兩種包被方法在牛乳氯霉素測定中的比較
        夾竹桃:酷愛“模仿秀”的毒死人
        綠色中國(2017年19期)2017-05-25 13:25:14
        農(nóng)藥毒死牲畜 為何諸多說法
        坐公交
        上海故事(2015年13期)2016-01-22 13:25:09
        跟一天了
        伴侶(2015年5期)2015-09-10 07:22:44
        梅毒螺旋體TpN17抗原的表達(dá)及純化
        結(jié)核分枝桿菌抗原Lppx和MT0322人T細(xì)胞抗原表位的多態(tài)性研究
        APOBEC-3F和APOBEC-3G與乙肝核心抗原的相互作用研究
        鹽酸克倫特羅人工抗原的制備與鑒定
        国产成人精品av| 亚洲一区二区三区国产| 中国杭州少妇xxxx做受| 国产精品自在线拍国产手机版| 欧美理论在线| 日本福利视频免费久久久| 久久伊人精品中文字幕有尤物| 免费高清av一区二区三区| 性夜影院爽黄a爽在线看香蕉 | 无码国产精品一区二区免费式直播| 亚洲中文字幕久久精品无码喷水| 亚洲自拍另类制服在线| 国产亚洲青春草在线视频| 亚洲国产精品成人av在线不卡 | 久久精品人妻中文av| 亚洲精品无码永久在线观看| 久久精品视频在线看99| 国产丝袜免费精品一区二区| 免费看av网站在线亚洲| 天堂а在线中文在线新版| 亚洲爆乳无码专区| 日本少妇爽的大叫高潮了| 亚洲av成人av三上悠亚| 亚洲自偷精品视频自拍| 国精产品一区一区三区有限公司杨 | 国精产品一区一区二区三区mba| 久久久无码中文字幕久...| 2021国产精品一区二区在线| 国产91九色免费视频| 亚洲一区二区三区四区精品在线| 亚洲av午夜福利精品一区二区| 亚洲天堂资源网| 国产成人亚洲精品一区二区三区| 大陆国产乱人伦| 后入内射欧美99二区视频| 久九九久视频精品网站| 东北熟妇露脸25分钟| 4hu四虎永久在线观看| 亚洲日韩精品久久久久久| 暴露的熟女好爽好爽好爽| 97色偷偷色噜噜狠狠爱网站|