白璐,陳志強(qiáng)
(1.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院腎內(nèi)科,石家莊 050051;2.河北中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)二科,石家莊 050011)
蛋白尿是糖尿病腎?。―N)主要的臨床表現(xiàn),亦是腎小球?yàn)V過(guò)屏障受損的重要標(biāo)志。腎小球?yàn)V過(guò)屏障由內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球基底膜(GBM)及足細(xì)胞組成,其結(jié)構(gòu)和功能的改變是蛋白尿產(chǎn)生的病理生理基礎(chǔ)[1-3]。足細(xì)胞貼附于GBM表面,是一種終末分化的多突狀細(xì)胞,是維持整個(gè)腎小球?yàn)V過(guò)膜正常通透性的主要成份,其損傷及脫落對(duì)于蛋白尿的形成具有重要作用[4]。有研究表明DN患者從尿中丟失的足細(xì)胞數(shù)與患者的尿蛋白量呈正相關(guān)關(guān)系[5-6],說(shuō)明足細(xì)胞對(duì)GBM的黏附失常造成其脫落,是DN蛋白尿發(fā)生的主要原因之一。α3β1整合素是介導(dǎo)足細(xì)胞與基底膜連接的膜蛋白,主要對(duì)足細(xì)胞的黏附功能起作用,使足細(xì)胞黏附于GBM的Ⅳ型膠原、層黏連蛋白和纖維連接蛋白上,其表達(dá)量的改變會(huì)使足細(xì)胞與GBM的黏附性下降,出現(xiàn)足細(xì)胞脫落,表明其與足細(xì)胞數(shù)量的丟失及蛋白尿的多少密切相關(guān)[7]。腎母細(xì)胞瘤抑制基因(WT1)是足細(xì)胞特異性標(biāo)志基因,可以標(biāo)記足細(xì)胞核數(shù)量,有研究報(bào)道DN足細(xì)胞損傷與WT1在腎臟的表達(dá)量下降有緊密關(guān)系[8],隨著DN足細(xì)胞損傷脫落的發(fā)展,WT1在腎臟的表達(dá)量也明顯下降。
隨著瘀血阻絡(luò)理論在DN發(fā)病中的重要作用進(jìn)一步被認(rèn)可,化瘀通絡(luò)中藥在治療DN時(shí)成為組方中必要的組成部分,前期研究證實(shí)該類(lèi)中藥治療DN蛋白尿療效確切,能減輕DN大鼠腎臟纖維化、保護(hù)足細(xì)胞、抑制腎臟氧化應(yīng)激、減輕炎癥反應(yīng)[9-12]。此本研究意在探討化瘀通絡(luò)中藥能否通過(guò)干預(yù)α3β1整合素的表達(dá)減少足細(xì)胞脫落從而減少蛋白尿,以期為化瘀通絡(luò)中藥在臨床上的推廣應(yīng)用提供依據(jù)。
1.1 動(dòng)物 健康雄性SD大鼠40只,清潔級(jí),體質(zhì)量(120±20)g,購(gòu)買(mǎi)于河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,許可證號(hào):SCXK(冀)2018-1-004。
1.2 藥物 化瘀通絡(luò)中藥顆粒劑:丹參(1.8 g/袋,相當(dāng)于飲片 10 g,批號(hào) 501306T)、川芎(1.3 g/袋,相當(dāng)于飲片 6 g,批號(hào) 412272T)、水蛭(1.5g/袋,相當(dāng)于飲片 3 g,批號(hào) 408245T)、地龍(1.0 g/袋,相當(dāng)于飲片 10 g,批號(hào) 501153T)、全蝎(1.0 g/袋,相當(dāng)于飲片3 g,批號(hào)412299T),廣東一方制藥有限公司惠贈(zèng)。厄貝沙坦片(0.15g/片,批號(hào) 4A293),由賽諾菲(杭州)制藥有限公司生產(chǎn)。
1.3 試劑儀器 鏈脲佐菌素(STZ,Enzo公司,貨號(hào)04081408),TRIquick Reagent(北京Solarbio公司,貨號(hào):R1100),F(xiàn)astQuant cDNA第一鏈合成試劑盒(北京天根生化科技有限公司,貨號(hào):KR202)、Platinum SYBR Green qPCR SuperMix-UDG(美國(guó) invitrogen公司,貨號(hào):11733046),引物(上海生工生物工程公司),腦脊液與尿蛋白測(cè)定試劑盒(終點(diǎn)法,北京利德曼生化股份有限公司,貨號(hào):2400134),兔多克隆抗體Integrin α3(ITGA3,武漢博士德生物工程有限公司,貨號(hào):BA0955),兔多克隆抗體 Integrin β1(ITGB1,北京博奧森生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):bs-0486P),兔多克隆抗體WT1(美國(guó)ABclone公司,貨號(hào):A2446)。穩(wěn)豪型血糖儀(強(qiáng)生有限公司),NanoDrop2000C紫外分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo Scientific公司),Eco實(shí)時(shí)定量PCR儀(美國(guó)illumina公司),BX63+DP72正置研究級(jí)顯微鏡(日本OLYMPUS株式會(huì)社),MICROM-340E石蠟切片機(jī)(德國(guó)Zeiss公司)。
1.4 造模、分組和給藥 健康雄性SD大鼠40只,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。隨機(jī)選取8只大鼠為正常組(C組),給予普通飼料飼養(yǎng),剩余32只大鼠給予高糖高脂飼料飼養(yǎng)(由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心加工制作),飼養(yǎng)6周后所有大鼠禁食不禁水12 h,按35 mg/kg腹腔注射1%STZ溶液,72 h后尾靜脈取血檢測(cè)血糖,血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病大鼠(DM)模型復(fù)制成功。共3只大鼠檢測(cè)血糖不達(dá)標(biāo)剔除,將成模大鼠隨機(jī)分為模型組(M組)10只,厄貝沙坦組(I組)10只,中藥組(Z組)9只。大鼠成模后給藥干預(yù),按照人用藥的配伍比例及大鼠與人的體表面積計(jì)算,化瘀通絡(luò)中藥成人口服劑量:丹參15 g,川芎 12 g,地龍 10 g,水蛭 6 g,全蝎 6 g,大鼠每日灌胃給藥劑量為丹參1.41 g/kg,川芎1.12 g/kg,地龍 0.94 g/kg,水蛭 0.56 g/kg,全蝎 0.56 g/kg,厄貝沙坦組以14.12 mg/kg灌胃,連續(xù)給予20周。
1.5 標(biāo)本的收集 大鼠灌胃20周末,代謝籠收集24h尿液并測(cè)量尿量,尿液離心半徑8 cm,3 000 r/min離心15 min后取上清液,終點(diǎn)法行24 h尿蛋白定量檢測(cè)。所有大鼠禁食8 h以10%水合氯醛0.35 mL/100 g腹腔注射麻醉,腹主動(dòng)脈取血,離心后取血清用于血液指標(biāo)檢測(cè),快速分離腎臟,留取腎皮質(zhì)用于腎臟病理、實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、免疫組化(IHC)檢測(cè)。
1.6 觀察指標(biāo)及方法
1.6.1 生化指標(biāo)檢測(cè) 尿蛋白濃度采用終點(diǎn)法檢測(cè),尿蛋白濃度×24 h尿量得出24 h尿蛋白總量(24 h UTP)。所有大鼠禁食8 h尾靜脈采血檢測(cè)空腹血糖(FBG)。采用BECKMAN CX7全自動(dòng)生化分析儀按試劑盒操作檢測(cè)血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。
1.6.2 光鏡觀察腎臟病理 預(yù)冷的FAA固定液固定腎皮質(zhì),常規(guī)乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片(厚度2 μm)、二甲苯脫蠟、乙醇梯度水化后,蘇木精-伊紅染色(HE)、過(guò)典酸雪夫氏染色(PAS),封片,顯微鏡下放大400倍采集圖像。
1.6.3 RT-PCR 檢測(cè) ITGA3、ITGB1、WT1 mRNA 的表達(dá) 采用TRIquick提取腎組織總RNA,檢測(cè)其濃度及純度,將OD260/OD280比值在1.8~2.0之間的RNA樣品,反轉(zhuǎn)錄成cDNA,將cDNA放于熒光定量PCR儀擴(kuò)增。采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物(引物序列見(jiàn)表1),反應(yīng)條件為UDG Incubation 50℃2 min、Polymerase Activation 95 ℃ 10 min、95 ℃ 10 s、60 ℃40 s共40個(gè)循環(huán)。融解曲線條件:95℃15 s、55℃15 s、95℃15 s,建立融解曲線檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。數(shù)據(jù)分析采用ΔΔCq法進(jìn)行相對(duì)定量,以βactin作為內(nèi)參,正常組設(shè)置為對(duì)照組,相對(duì)表達(dá)量(Relative Quantification)=2-ΔΔCq;ΔCq=目的基因 Cq平均值-內(nèi)參Cq平均值;ΔΔCq=實(shí)驗(yàn)組ΔCq-對(duì)照組ΔCq,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。
表1 大鼠基因引物序列Tab.1 Primers for rat genes
1.6.4 IHC 檢測(cè) ITGA3、ITGB1、WT1 蛋白的表達(dá)切取腎組織標(biāo)本用4%中性甲醛固定液固定,經(jīng)梯度脫水后,石蠟包埋,制作4 μm厚石蠟切片,采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法(SP)法檢測(cè),常規(guī)石蠟切片脫蠟,微波修復(fù),切片置于3%H2O2溶液中,PBS沖洗,滴加A液(10%正常山羊血清封閉液),室溫孵育30 min,滴加一抗(ITGA3稀釋比例 1∶100;ITGB1 稀釋比例 1∶200;WT1 稀釋比例1∶200),4℃孵育過(guò)夜,沖洗后滴加二抗(B液)37℃孵育30 min,PBS沖洗,滴加C液37℃孵育30 min,DAB顯色,蘇木素復(fù)染3 min,乙醇梯度脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。使用BX63+DP72正置研究級(jí)顯微鏡閱片觀察并拍片。
1.6.5 腎小球內(nèi)足細(xì)胞密度的檢測(cè) 采用WT1-C末端抗體標(biāo)記足細(xì)胞核,IHC檢測(cè)WT1的表達(dá),計(jì)數(shù)足細(xì)胞數(shù)量。BX63顯微成像系統(tǒng)放大400倍采集圖像,應(yīng)用Cell Sens Dimension軟件采用逐點(diǎn)描繪區(qū)域法測(cè)量腎小球面積,計(jì)數(shù)腎小球內(nèi)褐色細(xì)胞核數(shù)量即足細(xì)胞個(gè)數(shù)。以足細(xì)胞個(gè)數(shù)/腎小球面積,來(lái)表示足細(xì)胞密度。
1.6.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以(±s)表示,若方差齊,采用單因素方差分析,兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn);若方差不齊,采用秩和檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 各組大鼠一般情況 C組大鼠毛色光澤,反應(yīng)靈活,活動(dòng)自然,飲食飲水量及尿量均正常;M組大鼠毛色晦暗,精神萎靡,體重逐漸下降,并出現(xiàn)明顯多飲、多食、多尿的癥狀,造模后第7周,M組死亡1只,第15周末血糖不達(dá)標(biāo),剔除1只,第16周死亡1只;Z組大鼠于第10周、第14周各死亡1只,第13周血糖不達(dá)標(biāo),剔除1只;I組于第6、12、17周各死亡1只。
2.2 各組大鼠FBG、Scr、BUN、24 h UTP的比較 與C組比較,造模各組大鼠FBG明顯升高(P<0.05);與M組比較,I組及Z組FBG差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與C組比較,M組大鼠Scr、BUN均明顯升高,與M組比較,各干預(yù)組Scr差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),Z 組 BUN 顯著低于 M 組(P<0.05),I組BUN與M組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與I組比較,Z組BUN明顯降低(P<0.05);與C組比較,M組大鼠 24UTP明顯升高(P>0.05),與 M 組比較,Z組及 I組 24UTP 均明顯下降(P<0.05),與 I組比較,Z組24UTP明顯下降(P<0.05)。見(jiàn)表2。
表 2 各組大鼠 FBG、Scr、BUN、24 h UTP 的比較(±s)Tab.2 Comparison of FBG,Scr,BUN,and 24 h UTP in each group of rats(±s)
表 2 各組大鼠 FBG、Scr、BUN、24 h UTP 的比較(±s)Tab.2 Comparison of FBG,Scr,BUN,and 24 h UTP in each group of rats(±s)
注:與正常組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05;與厄貝沙坦組比較,△P<0.05。
24 h尿蛋白定量(mg/24 h)正常組 4.33±0.51 24.08±4.31 6.89±0.76 6.79±1.38模型組 28.42±3.82* 40.99±9.52*17.76±1.54* 53.04±5.94*厄貝沙坦組 28.78±4.31* 31.73±5.91 16.12±3.02 24.05±2.28#中藥組 29.08±4.18* 32.43±7.87 12.91±3.84#△ 20.65±4.39#△組別 空腹血糖(mmol/L)血肌酐(μmol/L)尿素氮(mmol/L)
2.3 各組大鼠腎組織病理觀察比較 C組大鼠腎組織可見(jiàn)腎小球、腎小管未見(jiàn)明顯異常;M組大鼠腎組織腎小球肥大,基底膜輕度增厚,系膜細(xì)胞和基質(zhì)增多,腎小囊腔變窄;與M組比較,Z、I組病理改變有一定程度減輕。見(jiàn)圖1。
圖1 各組大鼠腎組織光鏡(上圖HE染色、下圖PAS染色)觀察(×400倍)Fig.1 Kidney tissue observed by light microscopy(HE,PAS staining)of rats in each group(×400)
2.4 各組大鼠腎組織中ITGA 3、ITGB1、WT1 mRNA及蛋白表達(dá)的比較 與C組比較,M組ITGA3,ITGB1,WT1 mRNA的表達(dá)均明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05);與 M 組比較,I、Z 組 ITGA3,ITGB1,WT1 mRNA 的表達(dá)增加(P<0.05);與 I組比較,Z 組 ITGB1 mRNA 表達(dá)增加(P<0.05),ITGA3、WT1 mRNA 無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表 3。
表3 各組大鼠腎組織ITGA3、ITGB1、WT1 mRNA的比較(±s)Tab.3 Comparison of ITGA3,ITGB1,and WT1 mRNA in each group of rats(±s)
表3 各組大鼠腎組織ITGA3、ITGB1、WT1 mRNA的比較(±s)Tab.3 Comparison of ITGA3,ITGB1,and WT1 mRNA in each group of rats(±s)
注:與正常組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05;與厄貝沙坦組比較,△P<0.05。
組別 ITGA3 ITGB1 WT1正常組 1.00±0.14 1.00±0.12 1.00±0.08模型組 0.49±0.10* 0.56±0.07* 0.51±0.07*厄貝沙坦組 0.85±0.18# 0.73±0.10# 0.72±0.11#中藥組 0.95±0.15# 0.88±0.16#△ 0.78±0.08#
ITGA3,ITGB1主要分布于腎小球基底膜和系膜基質(zhì),少量分布于足細(xì)胞胞質(zhì)中,兩者在C組大鼠腎小球高表達(dá);與C組相比,ITGA3、ITGB1在M組大鼠腎小球表達(dá)減少;與M組比較,I、Z組兩者表達(dá)增多;WT1是足細(xì)胞的特異性蛋白,表達(dá)在腎小球中且位于足細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi);與C組相比,M組WT1表達(dá)減少;與M組比較,I、Z組WT1表達(dá)增多。見(jiàn)圖2。
圖2 各組大鼠腎組織ITGA3、ITGB1、WT1蛋白的表達(dá)(×400)Fig.2 Expression of ITGA3,ITGB1,and WT1 protein in kidney tissues of rats in each group(×400)
2.5 各組大鼠腎小球內(nèi)足細(xì)胞密度的比較 與C組比較,M組大鼠足細(xì)胞密度顯著減少(P<0.05);與M組比較,I、Z組大鼠足細(xì)胞密度明顯增加(P<0.05);與I組比較,Z組密度明顯增加(P<0.05)。見(jiàn)圖3。
圖3 各組大鼠腎小球內(nèi)足細(xì)胞密度的比較Fig.3 Comparison of podocyte density in the glomeruli of rats in each group
DN是一種慢性漸進(jìn)性疾病,其臨床表現(xiàn)及病理特征隨著病程的延長(zhǎng)而逐漸加重,蛋白尿的發(fā)生是DN最明顯的臨床特征,表現(xiàn)為早期微量蛋白尿到臨床期出現(xiàn)大量蛋白尿。腎小球?yàn)V過(guò)屏障可有效阻止白蛋白等大分子量物質(zhì)進(jìn)入尿液,其結(jié)構(gòu)和功能的改變是蛋白尿產(chǎn)生重要的病理基礎(chǔ)。足細(xì)胞作為濾過(guò)屏障重要的組成部分,覆蓋于GBM的表面,它是腎小球中唯一一種高度終末分化細(xì)胞,不能進(jìn)行正常的細(xì)胞分裂,其一但脫落將不可再生。足細(xì)胞損傷的表現(xiàn)一方面為足細(xì)胞相關(guān)蛋白的表達(dá)異常;另一方面是形態(tài)變化主要包括足細(xì)胞肥大、細(xì)胞足突融合、足細(xì)胞數(shù)量或密度減少、足細(xì)胞凋亡、足細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化等[13-14]。有針對(duì)DM患者的1項(xiàng)研究,結(jié)果顯示足細(xì)胞的脫落與DN蛋白尿及腎功能的損害有關(guān)[15]。通過(guò)腎活檢分析發(fā)現(xiàn)2型DM患者足細(xì)胞數(shù)明顯低于正常人,且足細(xì)胞密度越小,尿白蛋白的排泄率越大[16]。正常狀態(tài)下,足細(xì)胞通過(guò)整合素 α3β1、dystroglycans黏附于 GBM 表面保持其結(jié)構(gòu)和功能的完整性,而發(fā)揮濾過(guò)屏障的作用,一但足細(xì)胞損傷整合素α3β1表達(dá)降低,足細(xì)胞對(duì)GBM的黏附力降低,則會(huì)出現(xiàn)脫落。整合素是異質(zhì)二聚體的穿膜蛋白,由α和β亞基組成,本文主要研究了整合素 α3(ITGA3) 及整合素 β1(ITGB1)在腎臟的表達(dá)水平,兩者均是細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)黏附的受體。α3β1整合素是在體內(nèi)腎小球發(fā)育過(guò)程中唯一發(fā)揮重要作用的整合素,其由足細(xì)胞分泌并介導(dǎo)足細(xì)胞與GBM的黏附,足細(xì)胞主要通過(guò)ITGA3、ITGB1被覆于GBM的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白上,從而維持腎小球?yàn)V過(guò)功能的正常[17]。WT1表達(dá)于足細(xì)胞核,是成熟足細(xì)胞的特異性標(biāo)志蛋白,其對(duì)維持成熟的足細(xì)胞表型可能是必要的[18],在腎小球中,WT1只在足細(xì)胞核表達(dá),因此WT1可作為計(jì)數(shù)足細(xì)胞的標(biāo)記物。
DN可累及約40%的DM患者,一旦出現(xiàn)持續(xù)蛋白尿,發(fā)生腎損傷,則病情常不可逆轉(zhuǎn),直至發(fā)展為終末期腎病。DN發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,其防治目前尚缺乏針對(duì)性較強(qiáng)的特效手段?!督饏T要略》云:“病人如熱狀,煩滿(mǎn),口干燥而渴,其脈反無(wú)熱,此為陰伏,是瘀血也,當(dāng)下之?!庇涊d了瘀血致消渴的病理機(jī)制。DM病機(jī)在氣陰兩虛,氣虛無(wú)力助血運(yùn)行,血行艱澀致瘀;消渴日久不愈,陰津虛耗,津液虧虛,虛火內(nèi)生,內(nèi)熱煎灼陰血而至血瘀;或燥熱之邪煎熬津液,使津虧血稠、血行不暢而致瘀;或病久營(yíng)衛(wèi)之氣運(yùn)行不暢,經(jīng)絡(luò)失疏而生瘀。因此,隨著DM病程遷延,導(dǎo)致腎絡(luò)瘀阻,引起腎小球毛細(xì)血管團(tuán)結(jié)構(gòu)及功能受損,導(dǎo)致蛋白尿的漏出,由此可見(jiàn)DN病機(jī)重在瘀血阻絡(luò)。據(jù)證立法,依法采方選取了化瘀通絡(luò)中藥進(jìn)行DN干預(yù),其降低蛋白尿及腎臟保護(hù)作用也得到前期臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的證實(shí)[19-20]。通過(guò)多中心隨機(jī)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)化瘀通絡(luò)中藥可有效改善Ⅲ、Ⅳ期DN患者的臨床癥狀,降低尿蛋白,調(diào)節(jié)脂代謝,保護(hù)腎功能,提高患者生活質(zhì)量。通過(guò)對(duì)DN大鼠的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn)化瘀通絡(luò)中藥能明顯改善DN大鼠腎臟病理?yè)p傷,減少蛋白尿排泄,并且能通過(guò)多種信號(hào)通路減輕腎臟損傷,改善腎功能。方藥選取丹參、川芎、地龍、水蛭、全蝎進(jìn)行配伍,意在祛逐腎絡(luò)瘀血、改善腎臟循環(huán)、延緩腎臟纖維化、減輕腎臟損傷。現(xiàn)代藥理研究及臨床實(shí)驗(yàn)證明丹參、川芎均具有擴(kuò)血管、改善DN血液高凝高黏狀態(tài)、降低血小板黏性、抑制血小板活化、改善腎臟微循環(huán)的作用[21]。地龍、水蛭、全蝎皆屬蟲(chóng)類(lèi)之品,性善走竄,驅(qū)逐腎絡(luò)癥瘕,具有擴(kuò)張毛細(xì)血管、改善血液動(dòng)力學(xué)、抗血栓、減少腎臟Ⅳ型膠原表達(dá),減輕腎小球硬化的作用[22-24]。因此本研究就化瘀通絡(luò)中藥能否通過(guò)干預(yù)α3β1整合素表達(dá)起到減少足細(xì)胞脫落的目的,從而對(duì)DN起到腎臟保護(hù)作用展開(kāi)探討。
研究結(jié)果顯示,DN大鼠α3β1整合素表達(dá)明顯減少,足細(xì)胞密度減少,表明α3β1整合素介導(dǎo)了足細(xì)胞與GBM的黏附,其表達(dá)與足細(xì)胞密度呈正相關(guān)。通過(guò)化瘀通絡(luò)中藥的干預(yù)能一定程度上對(duì)α3β1整合素表達(dá)起到良性調(diào)節(jié)作用,上調(diào)其在腎組織的表達(dá)量,減少足細(xì)胞脫落個(gè)數(shù),從而起到足細(xì)胞保護(hù)作用,能夠明顯減少DN大鼠蛋白尿排泄和腎臟病理?yè)p傷。由此筆者推測(cè),化瘀通絡(luò)中藥也能通過(guò)改善足細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化來(lái)達(dá)到腎保護(hù)作用,該作用機(jī)制可能也是化瘀通絡(luò)中藥干預(yù)DN重要的作用靶點(diǎn)之一。