□文/陳燕凌 王穎旺 江科 黃利娟 周凡 吳玉疆 金仕強

禽流感（AvianInfluenza）是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的以禽類為主的烈性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報告的動物傳染病，我國將其列為一類動物疫病。目前，禽流感病毒已廣泛分布于世界各地，每一次嚴重的爆發(fā)不僅可造成嚴重的經濟損失，而且對人類的生命健康也構成了威脅。部分禽流感也能感染人，人感染后的癥狀主要表現(xiàn)為高熱、咳嗽、流涕、肌痛等，多數(shù)伴有嚴重的肺炎，嚴重者心、腎等多種臟器衰竭死亡。

冬春季是高致病性禽流感等重大動物疫病的高發(fā)季節(jié)，為及時掌握高致病性禽流感病毒在家禽中的感染、帶毒、變異和流行情況，宜賓市開展“冬春季節(jié)高致病性禽流感監(jiān)測專項行動”，為禽流感防控提供科學、及時、有效的監(jiān)測預警預報，防范疫情風險。

一、材料與方法

（一）樣品采集

采集11個活禽交易市場，4個家禽屠宰場，25個家禽養(yǎng)殖場（戶）共40個監(jiān)測點的禽泄殖腔和口腔雙拭子212份；采集全市21個家禽養(yǎng)殖場，5個活禽交易市場，4個家禽屠宰場的血清樣品450份，-20℃保存在宜賓市動物疫病預防控制中心獸醫(yī)實驗室。

（二）病原學檢測

采集的標本均進行禽流感核酸檢測。檢測試劑使用洛陽萊普生物信息科技有限公司生產的禽流感病毒通用型熒光RT-PCR檢測試劑盒和病毒RNA提取試劑盒，均在有效期內。儀器為德國耶拿qTOWER3G實時熒光定量PCR儀。20微升反應體系，包括熒光定量PCR反應檢測混合液10微升，引物混合液7微升，酶混合液0.5微升，RNA模板2.5微升。參數(shù)設置：反轉錄42℃5分鐘；預變性95℃10秒；PCR95℃5秒，58℃40秒，循環(huán)40次；在58℃采集熒光信號。

有效性判定：陽性對照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長；陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無明顯指數(shù)增長期和平臺期。

樣本檢測結果判定：Ct值≤35，有明顯指數(shù)增長判為陽性；檢測結果Ct值在35～37范圍，應對樣本進行重復檢測。如重復試驗結果Ct值仍在35～37范圍，有明顯指數(shù)增長，則判為陽性，否則為陰性；樣品檢測結果Ct值＞38或無Ct值為陰性。

（三）血清學檢測

采集的標本進行禽流感H5亞型血凝及血凝抑制試驗，檢測試劑使用哈爾濱維科生物技術有限公司生產的H5Re-11/12抗原及陽性血清，均在有限期內。按照《高致病性禽流感診斷技術GB/T18936-2020》進行。

結果判定：當抗原對照孔完全凝集，且陰性對照血清抗體效價不高于1∶4（22或2log2），陽性對照血清抗體效價與已知效價誤差不超過1個滴度時，試驗方可成立。以完全抑制4HUA抗原的最高血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI抗體效價。用于檢測抗體，檢測雞血清時，HI抗體效價不高于1∶8判為陰性，不低于1∶16時判為陽性。

二、結果與分析

（一）核酸檢測結果與分析

共檢測樣品212份，陽性對照陰性對照成立，其中有13份樣品Ct值≤35，且有明顯指數(shù)增長，判為陽性，如圖1所示。

圖1 圖標本指數(shù)增長曲線圖

根據(jù)結果分析，在采集的212份樣品中，陽性樣品13份，陽性率為6.1%；在40個監(jiān)測場點中，活禽交易市場11個，禽類屠宰場點4個，養(yǎng)殖場（戶）25個，出現(xiàn)陽性的場點數(shù)為10個，其中包括7個活禽交易市場，3個活禽屠宰場，證明在活禽交易市場中禽流感病毒廣泛存在，感染禽流感的風險極高（表1）。

表1 監(jiān)測情況統(tǒng)計表

（二）血凝及血凝試驗結果

共檢測樣品450份，陽性對照陰性對照成立，其中387份樣品抗體效價不低于1∶16，判為陽性，其余樣品抗體效價不高于1∶8判為陰性。

結果分析，在450份樣品中，養(yǎng)殖場（戶）樣品數(shù)為359份，抗體陽性318份；活禽交易市場樣品數(shù)51份，抗體陽性樣品數(shù)37份；禽類屠宰場樣品數(shù)40份，抗體陽性樣品數(shù)32份。由此可見，養(yǎng)殖場（戶）的禽流感抗體水平最好，抗體陽性率為88.57%，活禽交易市場的抗體水平最低，抗體陽性率為72.54%（表2）。

表2 血清學樣品結果統(tǒng)計

三、討論

（一）樣品場所來源

農貿市場、家禽屠宰點檢出病原學陽性樣品，可能與農貿市場和屠宰場點禽只來源渠道廣、家禽交易頻繁、環(huán)境消殺不徹底有關；與病原學陽性比較，養(yǎng)殖、交易、屠宰三個點位的血清學陽性均達到了70%以上，結合采樣過程中未發(fā)現(xiàn)明顯的高致病性禽流感癥狀，一方面說明了免疫后疫苗保護水平較高，現(xiàn)有疫苗免疫效果較好，一方面無法排除是否存在禽感染病原學陽性的情況。因此，從動物防疫角度考慮，需要進一步規(guī)范家禽屠宰環(huán)節(jié)和交易環(huán)節(jié)的檢疫監(jiān)管，認真執(zhí)行日消、日清制度，規(guī)范禽類有序流動，降低生物安全風險。

（二）陽性樣品的禽類

農貿市場、活禽交易市場檢測出的病原學陽性樣品主要是散養(yǎng)戶拿到市場上售賣的雞，禽類屠宰場的陽性樣品是省內市外的肉鴨，且根據(jù)抗體監(jiān)測結果，活禽交易市場和禽類屠宰場的抗體水平相對較低，也從側面說明了散養(yǎng)戶水禽的禽流感免疫不到位，存在了感染高致病性禽流感的風險。因此，要將高致病性禽流感的基礎免疫工作落到實處，特別是加強對散養(yǎng)戶和水禽的免疫，繼續(xù)開展抗體水平監(jiān)測，加強對水禽的抗體水平監(jiān)測，對抗體監(jiān)測不合格的要立即進行補免。

（三）禽流感流行情況

2021年宜賓市南溪區(qū)發(fā)生一起人感染禽流感H5N6亞型，2022年南充市西充縣發(fā)生一起高致病性禽流感（H5N6亞型）疫情。宜賓市地處候鳥遷徙南線，每年春秋兩季都會有候鳥路過宜賓，候鳥遷徙也可能帶來高致病性禽流感病毒，因此還應加強對野鳥糞便的病原學監(jiān)測，規(guī)范禽類飼養(yǎng)管理，切斷疫病外來傳播的風險。

（四）禽流感防控措施

一是要持續(xù)抓好春秋兩季集中免疫，落實畜禽養(yǎng)殖者動物防疫主體責任，特別是中小散戶集中免疫，保證免疫質量和數(shù)量；二是要加強禽流感免疫效果監(jiān)測評估，對禽流感抗體不達標的養(yǎng)殖戶要及時進行補免；三是加大對家禽屠宰環(huán)節(jié)和交易環(huán)節(jié)的檢疫監(jiān)管，落實日消和日清制度，同時加大對活禽交易市場、畜禽屠宰場、養(yǎng)殖場的動態(tài)監(jiān)測；四是要重視對野鳥或候鳥的監(jiān)測，規(guī)范禽類實驗管理，切斷候鳥傳播疫病的途徑。切實做到人病獸防，關口前移，科學防控。