曾家家

(玉林市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，廣西玉林 537000)

小龍蝦學(xué)名克氏原螯蝦，2021年我國(guó)小龍蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量位列淡水養(yǎng)殖品種第6位。當(dāng)前國(guó)內(nèi)稻蝦生態(tài)養(yǎng)殖模式下小龍蝦病害防治實(shí)踐方面仍處在起步階段，現(xiàn)行的水產(chǎn)動(dòng)物常規(guī)治療方法，比如用含氯制劑消毒和抗生素等都不能達(dá)到預(yù)期的效果。而且隨著高毒、高殘留、選擇性小的藥劑大量使用，不僅增加了稻蝦的養(yǎng)殖成本，還會(huì)導(dǎo)致食品安全及環(huán)境污染問題。

中草藥作為天然藥物，具有抗病、抗菌等作用，且毒副作用較小、無(wú)耐藥性。中草藥廣泛用于魚類病害防治、免疫增強(qiáng)等方面，受到廣大養(yǎng)殖戶的青睞。

本文以1例小龍蝦細(xì)菌性腸炎防治為案例，通過流行病調(diào)查和病樣解剖檢查準(zhǔn)確診斷疾病，對(duì)癥用藥，選用的3種常用防治小龍蝦細(xì)菌性腸炎中草藥來(lái)自6個(gè)不同廠家，然后經(jīng)過藥效試驗(yàn)，篩選適合的中草藥進(jìn)行精準(zhǔn)防治。

一、流行病基本情況調(diào)查

廣西北流市1個(gè)稻田養(yǎng)殖小龍蝦基地發(fā)現(xiàn)小龍蝦吃食減少，出現(xiàn)少量死亡的情況。該養(yǎng)殖基地為稻蝦綜合生態(tài)種養(yǎng)，符合無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)。養(yǎng)殖基地面積10 畝，2021年9月25日投放蝦苗，規(guī)格5～8克/尾。平時(shí)養(yǎng)殖管理規(guī)范，日投餌量控制在飽食量的70%～80%。10月12日，發(fā)現(xiàn)小龍蝦吃食減少，繼而不食，活性差，抗應(yīng)激弱，喜歡往淺水或岸邊靠，足無(wú)力。兩天后發(fā)現(xiàn)數(shù)尾病蝦死亡，后續(xù)幾天死亡數(shù)量由少到多，日死亡量20～40 尾。現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)養(yǎng)殖水體氨氮、亞硝酸鹽、pH、溶氧等指標(biāo)，未發(fā)現(xiàn)異常。

二、準(zhǔn)確診斷疾病

對(duì)患病的小龍蝦進(jìn)行解剖檢查，發(fā)現(xiàn)肝臟顏色變淺、消化道腫脹充血、腸道有積水并流出黃色液體。根據(jù)流行病調(diào)查和病蝦解剖檢查情況，初步診斷為細(xì)菌性腸炎。

三、篩選中草藥

1.對(duì)癥用漁藥

常見主治水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性腸炎的中藥漁藥有三黃散(主要成分為黃芩、黃柏、大黃、大青葉)、五黃散(主要成分為黃芪)和大黃五倍子散(主要成分為大黃、五倍子)。

在當(dāng)?shù)貪O藥店購(gòu)買6 個(gè)不同廠家的3 種中藥漁藥，分別為三黃散A1、三黃散A2、五黃散B1、五黃散B2、大黃五倍子散C1、大黃五倍子散C2。三黃散、五黃散和大黃五倍子散都是純中藥漁藥，且都是正規(guī)廠家生產(chǎn)的國(guó)標(biāo)水產(chǎn)藥物，主治常見的水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性腸炎等。

2.致病菌的分離與培養(yǎng)

將病蝦用無(wú)菌生理鹽水沖洗干凈，用醫(yī)用酒精消毒病蝦體表；在無(wú)菌操作條件下，用剪刀剪開蝦頭，取其肝臟、鰓、心肌、腸道等組織，分別接種至已編號(hào)的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，在28℃下培養(yǎng)24 小時(shí)。觀察發(fā)現(xiàn)，除心肌培養(yǎng)基未發(fā)現(xiàn)菌落外，其余均有菌落；根據(jù)其形態(tài)，挑選形態(tài)一致的優(yōu)勢(shì)菌純化，連續(xù)接種3次，斜面保存以進(jìn)行藥效試驗(yàn)。

3.藥敏紙片制備

用打孔機(jī)制作直徑為6 毫米左右的圓形濾紙，將制作好的濾紙放入瓶里，用牛皮紙封口進(jìn)行高壓烘干。在無(wú)菌操作下，將藥敏試紙分別放至按照漁藥說明書稀釋的三黃散A1、三黃散A2、五黃散B1、五黃散B2、大黃五倍子散C1、大黃五倍子散C2 藥液中浸泡；4℃下孵育30 分鐘，將紙片平鋪于無(wú)濾紙墊底的滅菌平皿中，置平皿于烘箱中烘干，無(wú)菌密封備用。

4.藥效試驗(yàn)

取適量的單一優(yōu)勢(shì)菌落到10 毫升“腦-心”浸出液肉湯培養(yǎng)基，制得菌懸液；取0.1毫升菌懸液分別均勻涂布于已編號(hào)的平板培養(yǎng)基上，重復(fù)涂布3次；待水分晾干后，用無(wú)菌鑷子夾取漁藥紙片三黃散A1、三黃散A2、五黃散B1、五黃散B2、大黃五倍子散C1、大黃五倍子散C2 平貼于平板表面，每換一種紙片都要對(duì)鑷子滅菌并輕輕按壓，以防紙片掉落和移動(dòng)，且漁藥紙片需完全與培養(yǎng)基接觸。一般直徑9 厘米的平皿可貼7 張藥敏試片，中間1片，其余6片均勻分布其周圍。

5.抑菌效果

將貼好漁藥紙片的平板培養(yǎng)基翻轉(zhuǎn)置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)12～16 小時(shí)，取出測(cè)量抑菌圈大小(表1)。

表1 藥效試驗(yàn)情況

從藥效試驗(yàn)結(jié)果可以看出，三黃散的抑菌效果較好，特別是三黃散A2 抑菌圈直徑最大，抑菌敏感程度最高。

四、中草藥治療

1.漁藥確定

根據(jù)藥效試驗(yàn)結(jié)果，選用三黃散A2，按照該廠家漁藥說明書的用法與用量，每6千克飼料加入100 克三黃散A2 拌料投喂，每天2 次，連續(xù)投喂7天。

2.治療效果

使用三黃散A2 后，第1 天病死蝦數(shù)量增加，但發(fā)病較輕的癥狀有所緩解；第2天病死蝦數(shù)量繼續(xù)上升，但進(jìn)食量相比前幾天有所增加；第3天病死蝦數(shù)量有所減少，小龍蝦進(jìn)食量相當(dāng)于正常的80%；第5 天沒發(fā)現(xiàn)小龍蝦死亡，進(jìn)食恢復(fù)正常。再經(jīng)過兩天的鞏固治療，稻田中的小龍蝦全部恢復(fù)正常，進(jìn)食量甚至比發(fā)病前增加10%左右。

五、分析與總結(jié)

本案例通過藥效試驗(yàn)，用三黃散A2 拌料投喂、精準(zhǔn)用藥，細(xì)菌性腸炎病明顯好轉(zhuǎn)，直至小龍蝦恢復(fù)正常，說明三黃散能防治小龍蝦細(xì)菌性腸炎病。

市場(chǎng)上的“國(guó)標(biāo)藥”和“非藥品”中藥質(zhì)量參差不齊，經(jīng)過藥效試驗(yàn)后，可快速選擇藥物用于生產(chǎn)一線進(jìn)行疾病治療，避免了盲目用藥而造成養(yǎng)殖損失。

當(dāng)然，本文通過藥效試驗(yàn)快速選擇中草藥，還存在一些影響試驗(yàn)科學(xué)性的因素，比如養(yǎng)殖水體的環(huán)境因素、藥效試驗(yàn)基于中草藥對(duì)病蝦體外抑菌的效果試驗(yàn)，由于是快速篩藥治療，缺乏臨床試藥環(huán)節(jié)。