傅小紅，姜偉，萬婷，張思甜

（南昌市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，南昌 330000）

西咪替丁，也稱甲氰咪胍，是人類發(fā)現(xiàn)的第一種組胺H2受體拮抗劑，能顯著抑制基礎(chǔ)和夜間胃酸分泌，也能抑制由食物、組胺、分肽胃泌素和胰島素等刺激引起的胃酸分泌，并對(duì)因化學(xué)刺激引起的腐蝕性胃炎、應(yīng)激性胃潰瘍和上消化道出血等的胃病治療有明顯療效[1-3]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，西咪替丁在治療慢性乙型肝炎、心律失常、預(yù)防輸血反應(yīng)、輔助治療支氣管哮喘、上呼吸道感染、雄性激素增多以及癌癥等疾病也有一定療效[4-7]。但長(zhǎng)期用藥或用藥劑量過大時(shí)可出現(xiàn)腹瀉、眩暈或頭痛、肌痙攣或肌痛、皮疹、脫發(fā)、性欲減退、泌乳現(xiàn)象等不良反應(yīng)[8-11]。

西咪替丁的制劑類型涉及片劑、膠囊劑、注射劑、口服液制劑以及口服混懸劑。西咪替丁片于1976年由中美史克制藥有限公司開發(fā)，并于1977年6 月獲FDA 批準(zhǔn)上市。目前，國(guó)內(nèi)最常見的制劑劑型為片劑，生產(chǎn)企業(yè)有319家，涉及批準(zhǔn)文號(hào)328個(gè)。

有關(guān)物質(zhì)是藥品質(zhì)量研究中關(guān)鍵性的項(xiàng)目之一。原料藥的有關(guān)雜質(zhì)在生產(chǎn)制劑過程中全部或部分轉(zhuǎn)移到制劑中，同時(shí)在制劑生產(chǎn)、儲(chǔ)存、運(yùn)輸過程中，主成分自身發(fā)生降解或與輔料相互作用，進(jìn)一步增加了制劑中雜質(zhì)的種類與總量。基于安全性和生產(chǎn)實(shí)際，允許含限定量無害或低毒的雜質(zhì)，但對(duì)毒性較高的雜質(zhì)則應(yīng)嚴(yán)格控制。

現(xiàn)行《中國(guó)藥典》2020 版[12]及其它西咪替丁片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均未設(shè)置有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)。筆者參照中國(guó)藥典、美國(guó)藥典[13]、英國(guó)藥典[14]和歐洲藥典[15]，建立了西咪替丁片有關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)確、可靠的高效液相色譜分析方法，并同時(shí)測(cè)定6種西咪替丁雜質(zhì)，通過對(duì)實(shí)際樣品的測(cè)定分析，闡明了西咪替丁片有關(guān)物質(zhì)的來源，為西咪替丁片安全性和有效性提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：UltiMate 3000型，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

電子天平：(1)BT25S 型，感量0.01 mg，德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；(2)ME204E 型，感量0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。

pH計(jì)：PB-10，德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司。

紫外分光光度計(jì)：UV-2550 型，日本島津有限公司。

數(shù)控超聲波清洗器：KQ-500DB型，昆山市超聲儀器有限公司。

西咪替丁對(duì)照品：100158-201406，純度為99.8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

西咪替丁雜質(zhì)B、西咪替丁雜質(zhì)C、西咪替丁雜質(zhì)D、西咪替丁雜質(zhì)E、西咪替丁雜質(zhì)G、西咪替丁雜質(zhì)H(6 種雜質(zhì)具體分子結(jié)構(gòu)參考英國(guó)藥典[14])對(duì)照品：純度均大于95%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，上海鴻永生物科技有限公司。

甲醇：色譜純，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。

己烷磺酸鈉：分析純，上海展云化工有限公司。三乙胺：分析純，福晨(天津)化學(xué)試劑有限公司。磷酸：分析純，西隴化工股份有限公司。

實(shí)驗(yàn)室用水均為超純水。

淀粉、預(yù)膠化淀粉、玉米淀粉、蔗糖、糊精、微晶纖維素、羥甲基纖維素、羥丙甲纖維素、羧甲淀粉鈉、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鎂、滑石粉、聚山梨酯80、聚維酮K30、二氧化硅、乙醇和亮藍(lán)17種輔料：浙江前進(jìn)藥業(yè)有限公司、安徽金太陽生化藥業(yè)有限公司。

西咪替丁片：市售。

1.2 色譜條件

色譜柱：Welch XtimateTMC18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，月旭科技股份有限公司)；流動(dòng)相：A相為甲醇-水溶液(0.4 mL 三乙胺、0.86 g 己烷磺酸鈉和水780 mL 混合后用磷酸調(diào)pH 2.8)(體積比為24∶78)，B 相為甲醇；梯度洗脫程序：0～55 min 時(shí)A相體積分?jǐn)?shù)為100%，55～60 min時(shí)A相體積分?jǐn)?shù)由100%變?yōu)?5%，60～75 min時(shí)A相體積分?jǐn)?shù)保持為75%，75～75.1 min 時(shí)A 相體積分?jǐn)?shù)由100%變?yōu)?5%，75.1～85 min 時(shí)A 相積分?jǐn)?shù)保持為100%；流量：1.0 mL/min；檢測(cè)溫度：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；進(jìn)樣體積：20 μL。

1.3 溶液的制備

西咪替丁與6 種雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液：分別精密稱取6種西咪替丁雜質(zhì)和西咪替丁對(duì)照品約25 mg，置于7只25 mL容量瓶中，分別加入甲醇，超聲溶解并定容。各對(duì)照品的質(zhì)量濃度均為1.0 mg/mL。

混合對(duì)照品溶液：分別取7 種對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入流動(dòng)相A，定容至標(biāo)線，搖勻，其中各組分質(zhì)量濃度均為0.1 mg/mL。

系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別量取適量的混合對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相A分別稀釋，配制成質(zhì)量濃度為5、10、20、50、80、100、150、200 μg/mL系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

西咪替丁片樣品溶液：西咪替丁的質(zhì)量濃度為0.4 mg/mL。取西咪替丁片樣品20片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于西咪替丁0.2 g)，置50 mL 容量瓶中，加甲醇10 mL超聲使其溶解，再加流動(dòng)相A定容至標(biāo)線，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相A稀釋至標(biāo)線，搖勻。

輔料空白溶液：取17 種輔料，均稱取12.5 mg，置于同一只25 mL容量瓶中，加入10 mL甲醇，超聲使溶解，再用流動(dòng)相A定容至標(biāo)線，搖勻，作為輔料空白儲(chǔ)備液。量取1 mL 輔料空白儲(chǔ)備液，置于5 mL容量瓶中，加入流動(dòng)相A稀釋至標(biāo)線。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

按1.2 色譜條件測(cè)定樣品溶液及加標(biāo)回收樣品溶液，利用色譜峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算出西咪替丁及6種雜質(zhì)的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別取1.3 中7 種對(duì)照品儲(chǔ)備溶液稀釋至合適濃度，在190～400 nm波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，測(cè)得西咪替丁雜質(zhì)B、西咪替丁雜質(zhì)C、西咪替丁雜質(zhì)D、西咪替丁雜質(zhì)E、西咪替丁雜質(zhì)G、西咪替丁雜質(zhì)H以及西咪替丁的最大吸收波長(zhǎng)分別為219、196、195、217、220、220、220 nm，綜合考慮，最終選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

參考國(guó)內(nèi)外藥典標(biāo)準(zhǔn)[12-15]，筆者最初選擇歐洲藥典所提供的色譜條件，A 相為甲醇-水溶液(0.4 mL 三乙胺、0.86 g 己烷磺酸鈉和水780 mL 混合后用磷酸調(diào)pH 2.8)(體積比為24∶76)，B 相為甲醇；按梯度洗脫，洗脫程序：0～60 min 時(shí)A 相體積分?jǐn)?shù)為100%，60～65 min 時(shí)A 相體積分?jǐn)?shù)由100%過渡到90%，65～120 min時(shí)A相積分?jǐn)?shù)保持為90%。但按上述條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)耗時(shí)過長(zhǎng)，因此在此基礎(chǔ)上對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化改良，最終確認(rèn)了1.2 中的色譜條件。結(jié)果表明，在不影響有關(guān)物質(zhì)分析的前提下，按1.2 實(shí)驗(yàn)條件所得的色譜峰峰形更好，分離度更高，且耗時(shí)更短。取混合對(duì)照品溶液，按1.2的色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖，西咪替丁與各雜質(zhì)的分離度均大于1.5，各色譜峰峰形對(duì)稱且理論塔板數(shù)均大于5 000。圖1 為7 種化合物混合劑對(duì)照品溶液色譜圖。

圖1 7種化合物混合對(duì)照品溶液色譜圖

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

取1.3 中輔料空白溶液按1.2 色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，所得的色譜圖見圖2。結(jié)果顯示，輔料空白溶液出峰時(shí)間集中4分鐘之前，且峰面積很小，保留時(shí)間為62～65 min的三個(gè)色譜峰為亮藍(lán)的特征色譜峰，與混合對(duì)照品溶液色譜圖對(duì)比發(fā)現(xiàn)，輔料組成對(duì)樣品溶液有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定不產(chǎn)生干擾。

圖2 輔料空白溶液色譜圖

2.4 線性方程與檢出限

取1.3中的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照1.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以各成分的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積(y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算線性方程和相關(guān)系數(shù)。將1.3 中的混合對(duì)照品溶液用流動(dòng)相A 逐級(jí)稀釋，按照1.2 色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以3倍信噪比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度作為檢出限，所得結(jié)果見表1。

表1 7種化合物質(zhì)量濃度線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取混合對(duì)照品溶液分別于制備后0、4、8、12、16、20、24 h按1.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰面積。各化合物的相對(duì)偏標(biāo)準(zhǔn)差見表2，由表2可知，7種化合物峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.42%～0.96%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)

分別取1.3中輔料空白儲(chǔ)備液1 mL，置于9只5 mL容量瓶中，其中3只分別加入0.2 mL混合對(duì)照品溶液，3 只分別加入0.4 mL 混合對(duì)照品溶液，3 只分別加入0.6 mL混合對(duì)照品溶液，均用流動(dòng)相A定容至標(biāo)線，按1.2色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，加標(biāo)樣品色譜圖見圖3，測(cè)定結(jié)果見表3。由表3可知，7種化合物平均回收率為97.3%～102.2%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.92%～3.32%，表明該方法重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。

圖3 加標(biāo)樣品色譜圖

表3 加標(biāo)回收與精密度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)語

建立了西咪替丁片有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜測(cè)定方法，研究表明，所建立的方法穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)。該方法為科學(xué)評(píng)價(jià)西咪替丁片有關(guān)物質(zhì)和品種配方工藝優(yōu)化提供可靠的實(shí)施途徑，具有重要的研究和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。