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        泛素羧基末端水解酶L1、膠質(zhì)纖維酸性蛋白水平對(duì)新生兒窒息腦損傷的診斷價(jià)值

        2022-01-27 08:18:14鄭小冬祝毓斌林魯飛蔡文燕吳岳彪
        安徽醫(yī)藥 2022年2期
        關(guān)鍵詞:病兒泛素腦損傷

        鄭小冬,祝毓斌,林魯飛,蔡文燕,吳岳彪

        新生兒窒息是一種由各種原因所致母體-胎兒間通過(guò)胎盤血流進(jìn)行氣體交換發(fā)生急性障礙時(shí),胎兒出現(xiàn)嚴(yán)重缺氧和酸中毒及呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制,致使胎兒出生后不能正常呼吸的兒科臨床危重疾病[1]。近年研究表明,中國(guó)新生兒窒息發(fā)病率呈較高水平[2]。腦損傷指產(chǎn)前、產(chǎn)時(shí)、出生后各種病理因素所引起的不同程度的腦缺血或出血性損害,新生兒窒息后主要并發(fā)癥之一,腦損傷嚴(yán)重時(shí)會(huì)引發(fā)腦癱等后遺癥,影響新生兒生命健康。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)新生兒窒息后腦損傷相關(guān)研究已有較多,但對(duì)其早期診斷方面研究仍有不足。因此繼續(xù)探尋新生兒窒息后腦損傷診斷因子,對(duì)及時(shí)發(fā)現(xiàn)并治療新生兒窒息后腦損傷有重要意義。程啟慧等研究發(fā)現(xiàn),急性缺血性腦卒中患者血清泛素羧基末端水解酶L 1(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L 1,UCH-L 1)水平顯著升高,與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)[3]。祝善堯等[4]研究報(bào)道,膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)在嬰兒痙攣癥病兒血清和腦脊液中高表達(dá),有助于判斷病兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損程度。有研究表明,UCH-L 1和GFAP聯(lián)合檢測(cè)可用于評(píng)估心臟驟停病兒腦損傷水平[5]。由于UCH-L 1和GFAP在新生兒窒息后腦損傷中聯(lián)合探究鮮有報(bào)道,本研究通過(guò)檢測(cè)新生兒窒息后腦損傷病兒血清UCH-L 1、GFAP表達(dá)水平,分析二者與疾病進(jìn)展關(guān)系及對(duì)疾病診斷價(jià)值。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料選取2016年1月至2019年5月??谑械谒娜嗣襻t(yī)院收治的窒息新生兒126例,病兒日齡1~5 d。根據(jù)Apgar評(píng)分[6]標(biāo)準(zhǔn)將入組病兒分為重度窒息組57例,其中男30例,女27例,1 min Apgar評(píng)分為0~3分;輕度窒息組69例,男38例,女31例,1 min Apgar評(píng)分為4~7分。另根據(jù)病兒出生后1~5 d顱腦B超、CT或核磁共振掃描結(jié)果(是否患有缺血缺氧性腦病[6]),將入組病兒分為腦損傷組(77例)和無(wú)腦損傷組(49例)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合新生兒窒息診斷標(biāo)準(zhǔn)[7];(2)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)早產(chǎn)兒;(2)合并患有感染性、先天性代謝類疾??;(3)合并患有黃疸、溶血性疾??;(4)母體孕期患有妊娠期高血壓疾病。另選取同期在??谑械谒娜嗣襻t(yī)院出生的健康新生兒123例為對(duì)照組,健康新生兒日齡1~5 d。本研究中所有受試新生兒近親屬對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

        1.2 主要儀器和試劑多功能酶標(biāo)儀(型號(hào)Multiskan MK3,美國(guó)Thermo公司)、UCH-L 1酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒(貨號(hào)JL19379,上海江萊生物科技有限公司)、GFAP ELISA試劑盒(貨號(hào)JL023505,上海江萊生物科技有限公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 樣本采集及一般資料收集 受試窒息新生兒及健康新生兒均于入組后第2天清晨(7:00~9:00)收集外周靜脈血2 mL。4℃、3 000 r/min離心20 min后,于?80℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

        入組時(shí)收集新生兒性別、胎齡、日齡、出生時(shí)體重等一般資料,并于出生后14 d時(shí)對(duì)窒息新生兒進(jìn)行新生兒神經(jīng)行為評(píng)估(neonatal behavioral neurological assessment,NBNA)評(píng)分[8]測(cè)定。NBNA 評(píng)分總分為40分,<37分為異常。

        1.3.2 血清UCH-L 1、GFAP水平測(cè)定 采用ELISA法測(cè)定所有受試新生兒血清UCH-L 1、GFAP水平,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 21.0對(duì)本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計(jì)量資料以±s表示,兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析,總體有差異者再進(jìn)行LSD-t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例(%)表示,用χ2檢驗(yàn)。Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析,logistic回歸模型分析進(jìn)行危險(xiǎn)因素分析,ROC曲線進(jìn)行診斷價(jià)值分析,P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 重度窒息組、輕度窒息組及對(duì)照組一般資料比較重度窒息組、輕度窒息組及對(duì)照組性別、胎齡、平均日齡、出生時(shí)體質(zhì)量比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。重度窒息組病兒1 min Apgar評(píng)分明顯低于輕度窒息組和對(duì)照組(P<0.05),輕度窒息組1 min Apgar評(píng)分明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。重度窒息組NBNA評(píng)分明顯低于輕度窒息組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

        表1 窒息新生兒126例重度窒息組、輕度窒息組及對(duì)照組一般資料比較

        2.2 重度窒息組、輕度窒息組及對(duì)照組血清UCHL 1、GFAP水平比較重度窒息組血清UCH-L 1、GFAP水平均明顯高于輕度窒息組和對(duì)照組(P<0.05),輕度窒息組血清UCH-L 1、GFAP水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

        表2 窒息新生兒126例重度窒息組、輕度窒息組及對(duì)照組血清UCH-L 1、GFAP水平比較/(ng/mL,±s)

        表2 窒息新生兒126例重度窒息組、輕度窒息組及對(duì)照組血清UCH-L 1、GFAP水平比較/(ng/mL,±s)

        注:UCH-L 1為泛素羧基末端水解酶L 1,GFAP為膠質(zhì)纖維酸性蛋白。①與對(duì)照組比較,P<0.05。②與輕度窒息組比較,P<0.05。

        例數(shù)123 69 57 UCH-L 1 0.78±0.25 1.36±0.42①2.19±0.71①②201.30 0.000組別對(duì)照組輕度窒息組重度窒息組F值P值GFAP 0.48±0.16 1.14±0.28①1.65±0.49①②322.90 0.000

        2.3 腦損傷和無(wú)腦損傷組病兒血清UCH-L 1、GFAP水平比較腦損傷組血清UCH-L 1、GFAP水平明顯高于無(wú)腦損傷組(P<0.05),腦損傷組NBNA評(píng)分明顯低于無(wú)腦損傷組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

        表3 腦損傷和無(wú)腦損傷組病兒血清UCH-L 1、GFAP水平比較/±s

        表3 腦損傷和無(wú)腦損傷組病兒血清UCH-L 1、GFAP水平比較/±s

        注:UCH-L 1為泛素羧基末端水解酶L1,GFAP為膠質(zhì)纖維酸性蛋白,NBNA為神經(jīng)行為評(píng)估。

        例數(shù)49 77 UCH-L 1/(ng/mL)0.57±0.18 2.31±0.60 19.72 0.000組別無(wú)腦損傷組腦損傷組t值P值GFAP/(ng/mL)0.39±0.12 1.76±0.43 21.74 0.000 NBNA評(píng)分/分37.24±2.18 31.62±3.11 11.03 0.000

        2.4 窒息后腦損傷病兒血清UCH-L 1、GFAP水平與NBNA評(píng)分相關(guān)性窒息后腦損傷病兒血清UCH-L 1、GFAP水平均與NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=?0.471,P=0.000;r=?0.415,P=0.000),見(jiàn)圖1,2。

        圖2 窒息后腦損傷病兒血清GFAP水平與NBNA評(píng)分相關(guān)性

        2.5 新生兒窒息后腦損傷危險(xiǎn)因素分析以本研究資料為樣本,以新生兒窒息后是否發(fā)生腦損傷為應(yīng)變量建立Logistic回歸模型,將1 min Apgar評(píng)分、NBNA評(píng)分、UCH-L 1水平、GFAP水平轉(zhuǎn)化為二分類變量后為自變量納入Logistic回歸模型,選擇逐步向后法、行LR檢驗(yàn)。結(jié)果顯示,低1 min Apgar評(píng)分、低NBNA評(píng)分、高UCH-L 1水平、高GFAP水平是影響新生兒窒息后腦損傷發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。

        2.6 血清UCH-L 1、GFAP對(duì)新生兒窒息后腦損傷診斷價(jià)值由圖3分析可知,血清UCH-L 1預(yù)測(cè)新生兒窒息后腦損傷的曲線下面積為0.802,閾值為1.35,靈敏度為83.10%,特異度為82.00%。血清GFAP預(yù)測(cè)新生兒窒息后腦損傷的曲線下面積為0.829,閾值為1.12,靈敏度為84.40%,特異度為76.00%。兩者聯(lián)合預(yù)測(cè)新生兒窒息后腦損傷的曲線下面積為0.876,靈敏度為89.60%,特異度為88.00%。

        圖3 血清UCH-L 1、GFAP水平對(duì)新生兒窒息后腦損傷診斷效能ROC曲線圖

        3 討論

        窒息新生兒娩出時(shí)出現(xiàn)全身皮膚青紫或蒼白、呼吸淺表、肌肉張力松弛等癥狀,可能引起腦損傷等并發(fā)癥,出現(xiàn)智力低下、肢體抽搐、語(yǔ)言功能障礙、聽(tīng)覺(jué)障礙等,給家庭和社會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重精神和經(jīng)濟(jì)方面壓力[9]。早期診斷有助于病情及早發(fā)現(xiàn)和控制。本研究結(jié)果顯示,重度窒息組病兒NBNA評(píng)分明顯低于輕度窒息組病兒,提示窒息新生兒腦損傷程度隨窒息程度增大而加重。

        泛素羧基末端水解酶(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase,UCH)與泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解過(guò)程有關(guān)。UCH-L 1屬于UCH家族成員,具有去泛素化、抑制泛素連接酶活性、穩(wěn)定泛素單體等作用,可參與細(xì)胞增殖、周期、分化、凋亡等過(guò)程,與機(jī)體炎癥、免疫、損傷修復(fù)等調(diào)控有關(guān)[10],在腦中樞神經(jīng)和周圍神經(jīng)中分布廣泛。Wang等[11]研究發(fā)現(xiàn),UCHL 1可能作為外傷性腦損傷標(biāo)志物,用于預(yù)測(cè)患者患病嚴(yán)重程度及預(yù)后。有研究證實(shí),新生兒缺氧缺血性腦病病兒出生后24 h血漿中UCH-L 1表達(dá)水平升高,與病兒腦損傷加重有關(guān)[12]。本研究結(jié)果顯示,重度窒息組病兒血清UCH-L 1水平均明顯高于輕度窒息組病兒和對(duì)照組,輕度窒息組病兒血清UCH-L 1水平均明顯高于對(duì)照組。且腦損傷組病兒血清UCH-L 1水平明顯升高,與NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān)。與Massaro等[12]研究結(jié)果相似,提示血清UCH-L 1水平升高可能與新生兒窒息后腦損傷發(fā)生及嚴(yán)重程度有關(guān)。Li等[13]研究報(bào)道,農(nóng)藥中毒后病人血清UCH-L 1升高,檢測(cè)血清UCH-L 1濃度有助于預(yù)測(cè)農(nóng)藥中毒后認(rèn)知功能障礙發(fā)生。Carlos等[14]研究發(fā)現(xiàn),促炎因子IL-1β可能通過(guò)介導(dǎo)UCH-L 1參與的泛素化過(guò)程,影響阿爾茨海默病發(fā)生發(fā)展。提示本研究中新生兒窒息后腦損傷時(shí)可能增加腦組織炎癥反應(yīng),促進(jìn)神經(jīng)元釋放UCH-L 1進(jìn)入血液,影響病兒血清UCH-L 1水平升高。

        GFAP是一種主要表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞的Ⅲ型中間絲狀蛋白,對(duì)神經(jīng)和星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)功能維持有重要作用。有研究報(bào)道,阿爾茨海默病模型大鼠海馬組織中GFAP表達(dá)水平上調(diào),與神經(jīng)功能發(fā)生障礙后星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活性提高及增殖有關(guān)[15]。錢紅等[16]研究證實(shí),腦出血后腦損傷大鼠腦組織中GFAP表達(dá)水平升高,降低GFAP表達(dá)可減輕腦損傷。本研究結(jié)果顯示,對(duì)照組、輕度窒息組、重度窒息組血清GFAP水平依次顯著升高,且腦損傷組病兒血清GFAP水平明顯高于無(wú)腦損傷組病兒,與NBNA評(píng)分呈負(fù)相關(guān),提示GFAP水平異常升高可能與新生兒窒息后腦損傷發(fā)生發(fā)展有關(guān)。沈露等[17]研究發(fā)現(xiàn),癲癇部分性發(fā)作患者血清GFAP水平明顯高于對(duì)照組,GFAP水平下調(diào)預(yù)示患者病情好轉(zhuǎn)。Shu等[18]研究表明,腦膜腦脊髓炎患者腦組織中GFAP高表達(dá),與細(xì)胞炎性反應(yīng)增加有關(guān)。GFAP與膠質(zhì)細(xì)胞活性和遷移能力密切相關(guān),F(xiàn)eng等[19]研究表明,視網(wǎng)膜受損時(shí)GFAP水平上調(diào),激活小膠質(zhì)細(xì)胞,促進(jìn)炎癥因子IL-1β介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。提示本研究中GFAP可能通過(guò)影響星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖、促進(jìn)腦組織中炎癥反應(yīng)發(fā)生,參與新生兒窒息后腦損傷進(jìn)展。

        進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),低1 min Apgar評(píng)分、低NBNA評(píng)分、高UCH-L 1水平、高GFAP水平是影響新生兒窒息后腦損傷發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。UCH-L 1與GFAP聯(lián)合預(yù)測(cè)新生兒窒息后腦損傷的曲線下面積為0.876,靈敏度為89.60,特異度為88.00%。二者聯(lián)合診斷價(jià)值較高,可能作為預(yù)測(cè)新生兒窒息后腦損傷發(fā)生的生物標(biāo)志物。

        綜上所述,窒息新生兒血清UCH-L 1、GFAP水平顯著升高,與窒息程度及腦損傷發(fā)生有關(guān)。血清UCH-L 1、GFAP可作為生物標(biāo)志物,對(duì)新生兒窒息后腦損傷有一定診斷價(jià)值。但由于本研究樣本量有限,因子具體作用機(jī)制還需增大樣本量全面深入研究。

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