(1.新疆兵團第七師胡楊河市畜牧獸醫(yī)站，新疆 奎屯 833200；2.新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，新疆 烏魯木齊 830000；3.新疆天潤牧業(yè)股份有限公司，新疆 烏魯木齊 830000)

0 引言

隨著奶牛養(yǎng)殖集約化、規(guī)模化發(fā)展，有效預防奶牛疾病變得愈發(fā)重要。困擾規(guī)?；龅膬纱蠹膊。籂倥８篂a和奶牛乳房炎，都與環(huán)境有密切聯(lián)系，外界環(huán)境中病原微生物隨時會入侵動物機體，一些被感染的牛群也會污染周圍環(huán)境。同時，規(guī)?；膛鲲曫B(yǎng)密度較大，牛群接觸頻繁，使病原菌傳播更快速。選擇適合有效的消毒劑，制定合理的消毒程序，能夠有效阻止疫病發(fā)生和傳播。本研究針對奎屯墾區(qū)大型規(guī)模奶牛養(yǎng)殖場，在春季奶牛乳房炎和犢牛腹瀉的高發(fā)期進行采樣，挑選出牛場中具有代表性的病原微生物，用不同的消毒劑進行處理，以探求適合奶牛場的消毒劑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基

營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(生產(chǎn)批號：201112)、M-H瓊脂平皿(生產(chǎn)批N21GK001)、血瓊脂平板(生產(chǎn)批號：T21GT003)、麥康凱瓊脂平板(生產(chǎn)批號：N21GK001)、營養(yǎng)瓊脂平板(生產(chǎn)批號：N20GK006)，以上均選購自南通凱恒生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.1.2 消毒劑

選擇了5種常用消毒劑，用來篩選抑菌效果，具體如表1所示。

1.1.3 儀器設(shè)備

超純水儀(KZ-CK-50L)，上?？浦苇h(huán)保設(shè)備有限公司；電子天平 (FA1204)、高壓滅菌鍋(DGS-280C+)，力辰科技有限公司；高速離心機(TG16G)，河南北弘實業(yè)有限公司，凈化工作臺(SW-CJ-2FD)，蘇州凈化設(shè)備公司。

表1 5種常用消毒劑

1.2 方法

1.2.1 樣品的采集

樣品采集于新疆奎屯墾區(qū)2個規(guī)模牛場。共采集環(huán)境樣品41個，分別取自消毒通道、犢牛舍、擠奶廳、運動場等場所。使用無菌棉簽采集相關(guān)場所的環(huán)境樣品后分別放置裝有無菌生理鹽水的10 mL離心管中并且做好標記。將標記的樣品密封在無菌袋中，放在帶冰袋的泡沫盒中，并保存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 細菌培養(yǎng)及分離純化

取100 μL樣品上清液放入營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12 h，用接種環(huán)蘸取菌液在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基中劃線培養(yǎng)12 h，觀察培養(yǎng)基中的細菌菌落，挑取差異較大的進行革蘭氏染色鏡檢，觀察出不同細菌后繼續(xù)進行分離純化，最后用接種環(huán)蘸取純化的細菌菌落接種在營養(yǎng)肉湯中進行增菌。

1.2.3 藥敏制片的制備

用打孔機將定性濾紙打成6 mm直徑的圓形小紙片。將圓紙片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)121℃，15～20 min高壓消毒后，放在37℃溫箱中數(shù)天，使其完全干燥。在上述紙片的青霉素瓶內(nèi)加入按照說明書稀釋過的消毒劑0.25 mL，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過夜，干燥后即密蓋。

1.2.4 消毒劑敏感性試驗

將培養(yǎng)的細菌溶液用無菌鹽水稀釋至濃度為0.5麥氏比濁濃度，將100 μL細菌溶液吸到M-H藥物敏平板上，用涂布器涂均勻，靜置 1 min。將5張制備好的含不同消毒劑的藥敏制片均勻地貼在不同的藥敏平板上，放在37℃的培養(yǎng)箱中18～24 h，然后根據(jù)測量抑菌環(huán)的直徑判斷消毒劑的敏感度。標準判定參考表2。

表2 消毒劑敏感性 單位：mm

2 結(jié)果與分析

2.1 致病菌分離結(jié)果

從養(yǎng)殖場采集的樣品中分離出具有代表性的致病菌為化膿隱秘桿菌、大腸桿菌、葡萄球菌、腸球菌等。

2.2 藥敏試驗結(jié)果

從養(yǎng)殖場樣品中分離出的致病菌通過K-B藥物敏感性試驗，根據(jù)測量抑菌環(huán)的直徑判斷消毒劑的敏感度。結(jié)果表明，所測得的幾種致病菌主要對新潔爾滅、葵甲溴銨碘、戊二醛較為敏感。其中對甲酚皂耐藥的細菌最多，葡萄球菌對聚維酮碘中敏，具體如表3所示。

表3 消毒劑藥敏試驗結(jié)果 單位：mm

3 討論

牛場中最理想的消毒劑應該具有對人和牛都安全無害、副作用低、殺菌能力強、殺菌普廣等優(yōu)點[1]。消毒劑分為很多種，按成分可以將消毒劑分為酚類、醇類、醛類、鹵素類、酸類、堿類、氧化劑類及季銨鹽類[2]。復方甲酚皂屬于酚類消毒劑，主要殺菌成分為甲酚[3]，在本次試驗分離出的4種病原菌中，復方甲酚皂，只有化膿隱秘桿菌對其敏感，其他病原菌都顯示耐藥，這與之前該牧場大量使用復方甲酚皂未及時更換消毒液有關(guān)。新潔爾滅屬于季銨鹽類消毒劑，在本次實驗中所有致病菌都對其比較敏感，且在吳俊容的研究中新潔爾滅在有機物存在時仍舊具有良好的抑菌效果，比較適合牛場使用[4]。聚維酮碘和葵甲溴銨碘屬于含碘類消毒劑，但此類消毒劑性質(zhì)不穩(wěn)定，有機物、pH值及溫度都對其效果影響較大[5]。在本次試驗中除了葡萄球菌對聚維酮碘是中敏以外，其他病原菌都對其敏感，說明此類消毒劑對該牧場的病原菌殺滅效果較好。戊二醛屬于醛類消毒劑，在此次實驗中所有病原菌對其都較為敏感，但此類消毒劑成本較高，氣味較大。

4 結(jié)論

本試驗中4種病原菌都敏感的消毒劑有：新潔爾滅、葵甲溴銨碘、戊二醛。實驗結(jié)果對前期這2個牧場飼養(yǎng)環(huán)境的消毒工作具有較強的指導意義[6]。建議牧場采用這3種消毒劑，進行替換使用，避免長時間使用一種消毒劑造成耐藥性，以達到最佳消毒效果。