李 靜

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河南 南陽 473000)

馬紅球菌(Rhodococcusequi,R.equi)屬紅球菌屬，是一種人畜共患的機(jī)會(huì)致病菌，約1/3的馬紅球菌會(huì)引起敗血癥、肺炎、扁桃體炎、腦膜炎、尿道炎、腎炎和心內(nèi)膜炎等[1]?，F(xiàn)將其分離鑒定方法、抗生素敏感性及臨床療效的結(jié)果進(jìn)行總結(jié)和分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 標(biāo)本：標(biāo)本來源于2019年4月至2020年4月臨床科室送檢的痰、尿、腦脊液、血培養(yǎng)等標(biāo)本。對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，并從中選取17例經(jīng)分離鑒定確定攜帶馬紅球菌的患者為治療組(抗生素敏感性聯(lián)合用藥)，另選取17例同期分離鑒定確定攜帶馬紅球菌的患者為對(duì)照組(經(jīng)驗(yàn)用藥治療)，比較兩組治療效果。

1.1.2 試劑：血平板由鄭州安圖生物有限公司提供，麥康培養(yǎng)基為實(shí)驗(yàn)室自配。

1.2 方法

1.2.1 菌株的培養(yǎng)與分離：按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》操作[2]，鑒定根據(jù)《實(shí)用臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)與圖譜》[3]， 將各標(biāo)本接種于鄭州安圖有限公司提供的血瓊脂、麥康、沙氏培養(yǎng)基上嚴(yán)格無菌操作， 置CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。將血平皿37 ℃培養(yǎng)24 h后，血平板上長(zhǎng)出細(xì)小、無色或乳黃色的小菌落，48 h后菌落增大為紅黃色(圖1A)，分離出單個(gè)菌落，與金黃色葡萄球菌ATCC25P23標(biāo)準(zhǔn)菌株垂直劃線于血平板上形成類CAMP樣反應(yīng)(B族鏈球菌能產(chǎn)生一種CAMP因子，使葡萄球菌β溶血素產(chǎn)生的溶血帶增大)[4]。

1.2.2 菌落形態(tài)與染色：菌落形態(tài)；細(xì)小、直徑為0.5 mm左右，黏液狀、表面光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊，大部分菌落產(chǎn)生桔紅色或橙紅色色素，革蘭染色涂片鏡檢(圖1B)，此菌為革蘭陽性球桿菌，抗酸染色呈弱陽性(圖1C)。

1.2.3 細(xì)菌生理、生化特征及鑒定：根據(jù)菌落形態(tài)及生化反應(yīng)進(jìn)行鑒定，生理、生化反應(yīng)如下(表1)。

上述生化反應(yīng)與馬紅球菌一致，故鑒定為馬紅球菌。

1.2.4 藥物敏感性試驗(yàn)方法：用MIC(minimum inhibitory concentraction)法，用接種環(huán)挑取3～5菌落置于稀釋液瓶?jī)?nèi)，先配置成0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙?，?jīng)MH肉湯1 000倍稀釋后，依次加入藥敏檢測(cè)孔內(nèi)，向每孔中加100 μL，密封后置35 ℃普通空氣孵育箱中，孵育16～20 h后，用美華MH-120鑒定儀進(jìn)行藥敏檢測(cè)。結(jié)果判斷，以在小孔內(nèi)完全抑制細(xì)菌增殖的最低藥物濃度為MIC。

1.2.5 臨床療效觀察方法：根據(jù)馬紅球菌的抗生素藥物敏感性結(jié)果聯(lián)合用藥，以提高臨床療效。臨床療效根據(jù)《抗菌藥物臨床研究指導(dǎo)原則》分為顯效、有效、無效3級(jí)。顯效：癥狀較治療前明顯減輕；有效：癥狀有所減輕；無效：治療前后臨床癥狀無改善。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

A.colony of 48 hours; B.gram dyeing; C.weak acid fast dyeing圖1 馬紅球菌菌落形態(tài)Fig 1 Colony morphology of R.equi

表1 17株馬紅球菌的生理、生化特征

2 結(jié)果

2.1 抗生素敏感性試驗(yàn)

馬紅球菌對(duì)紅霉素、利福平、萬古霉素、氨基糖苷類和糖肽類敏感，對(duì)青霉素G、苯唑西林耐藥。其中萬古霉素、阿米卡星、利福平、環(huán)丙沙星、紅霉素等藥物對(duì)馬紅球菌敏感性最高(表2)。

2.2 臨床療效比較

治療組臨床效果明顯高于對(duì)照組(χ2=4.497，P<0.05)(表3)。

表2 17株馬紅球菌的抗生素敏感性試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Antibiotic sensitivity test results of 17 strains of R.equi

表3 17例馬紅球菌聯(lián)合用藥臨床療效比較Table 3 Clinical efficacy comparison of 17 cases of R.equi

3 討論

近年來馬紅球菌感染的報(bào)道逐漸增多，常發(fā)生于細(xì)胞免疫受損的患者，尤其是一些艾滋病(AIDS)患者、免疫功能低下的患者重要的機(jī)會(huì)性感染病源菌之一[5]。最近發(fā)現(xiàn)可從AIDS等患者血液、腦脊液、呼吸道及尸檢解剖標(biāo)本分離出馬紅球菌[6]。馬紅球菌致人類感染以呼吸道感染最為常見，其臨床送檢標(biāo)本大部分以痰液為主[7]。由于痰液標(biāo)本有時(shí)雜菌較多，且該菌增殖緩慢，培養(yǎng)18～24 h后菌落較小，產(chǎn)生色素不明顯，容易漏檢，應(yīng)將平板放置48～72 h后再觀察，以提高檢出率。

一旦確診為馬紅球菌，應(yīng)根據(jù)抗生素敏感性結(jié)果選擇聯(lián)合用藥，據(jù)觀察聯(lián)合用藥治療馬紅球菌感染者，臨床療效顯著[8]，但對(duì)中樞神經(jīng)感染治療的患者，因受血腦屏障的影響，應(yīng)強(qiáng)調(diào)繼續(xù)使用一種體外抗生素敏感的藥物(如紅霉素、環(huán)丙沙星)[9]，以提高治愈率而降低病死率。