◎ 楊 針，王東江，黎姝蔓，鄧 雄

（重慶市永川食品藥品檢驗所，重慶 402160）

我國白酒多以高粱、小麥等谷物為原料發(fā)酵后蒸餾儲藏所制，以蒸餾酒為主導(dǎo)[1]。大多數(shù)白酒中含有一定比例的醛類、甲醇和雜醇油等物質(zhì)，這些物質(zhì)易引發(fā)飲酒者的上頭、口干等不適反應(yīng)。名優(yōu)白酒往往通過改進(jìn)釀造工藝提升酸類、酯類等香氣物質(zhì)含量，降低醛類等有害物質(zhì)含量，然而，一些不法商販違規(guī)在白酒中添加頭痛粉（主要成分為對乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因）以緩解劣質(zhì)白酒引起的頭痛等不適癥狀，投機(jī)取巧，以次充好。頭痛粉作為藥品被添加入白酒中本就是非法添加成分[2]，其藥品說明及病例報道也明確表示其與酒精混服對肝功能有損傷[3-4]。

目前，針對頭痛粉及其主要成分出現(xiàn)在白酒中的不良現(xiàn)象報道較多，其作為食品中的非法添加物檢測采用是高效液相色譜法和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5-7]，但檢測方法存在靈敏度不高、分辨率不高、回收率不高、操作復(fù)雜、需不斷更換流動相及分析時間長等不足，相關(guān)方法無法滿足高靈敏度與較強(qiáng)抗干擾能力檢測微量或痕量成分的需求。因此本研究旨在建立蒸餾酒中對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的UPLC-MS/MS檢測方法，為蒸餾酒中非法添加頭痛粉的準(zhǔn)確、快速判定檢測提供科學(xué)依據(jù)，為市場監(jiān)管部門執(zhí)法提供有力的技術(shù)支撐，從而達(dá)到保障人們飲食用藥安全的 目的。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水楊酸標(biāo)準(zhǔn)對照品，壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號為1921804，含量為99.7%；對乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)對照品，壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號為1201801，含量為98.0%；咖啡因標(biāo)準(zhǔn)對照品，壇墨質(zhì)檢-標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號為0981904，含量為98.0%；蒸餾酒酒樣，市售；甲酸（色譜純），山東西亞化學(xué)股份有限公司；甲醇（色譜純），Merck KGaA。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1290型高效液相色譜儀（包括二元泵，在線脫氣機(jī)，自動進(jìn)樣器），Agilent 6420型三重四極桿質(zhì)譜儀（包括電噴霧離子源，Masshunter數(shù)據(jù)工作站），美國Agilent公司；XP205型萬分之一電子天平，瑞士梅特勒-托利多儀器公司；JA5003N型千分之一電子天平，上海佑科儀器儀表有限公司；HH-8型水浴鍋，江蘇盛藍(lán)儀器制造有限公司；Mtegral5型超純水機(jī)，美國密理博公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別精密稱定對照品對乙酰氨基酚10.50 mg，咖啡因10.60 mg，水楊酸10.90 mg置于 25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻。分別得到對乙酰氨基酚儲備液（411.60 μg·mL-1）、咖啡因儲 備液（415.52 μg·mL-1）和水楊酸儲備液 （434.69 μg·mL-1），-18 ℃低溫避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別精密移取對乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因儲備液各2.5 mL于同一20 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度并搖勻，得到混混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因的濃度分別為51.450 μg·mL-1、51.940 μg·mL-1和54.336 μg·mL-1， 4 ℃避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別精密移取對乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因?qū)φ掌穬湟焊?.1 mL于同一20 mL容量瓶中，用超純水稀釋定容至刻度并搖勻，得到混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，乙酰氨基酚、水楊酸和咖啡因的濃度分別為2.058 μg·mL-1、2.078 μg·mL-1和2.173 μg·mL-1，4 ℃避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)曲線系列工作液：分別吸取適量體積的混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液，用水稀釋，配制成濃度分別為0 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、80 ng·mL-1、 100 ng·mL-1和120 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.2 樣品前處理優(yōu)化

準(zhǔn)確稱取5 g試樣（精確至0.01 g）置于50 mL燒杯中，于60 ℃水浴加熱30 min，殘渣全部轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用純水定容至刻度并搖勻，經(jīng)0.22 μm水相微孔濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。

1.3.3 色譜條件優(yōu)化

色譜柱：ZORBAX RRHD SB-C18（2.1 mm×100 mm， 1.8 μm）；流速：0.3 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：2.0 μL。流動相及梯度洗脫程序，如表1所示。

表1 流動相梯度洗脫程序表

1.3.4 質(zhì)譜條件

電噴霧電離正負(fù)離子模式：ESI（±）；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；離子化溫度：350 ℃；干燥器流量：10 L·min-1；噴霧電壓（IS）：+4000 V/-3500V； 霧化器壓力：30 psi；監(jiān)測離子及對應(yīng)檢測參數(shù)如表2所示。

表2 監(jiān)測離子及對應(yīng)參數(shù)表

（1）定性測定。在相同的實(shí)驗條件下測定試樣溶液，若試樣溶液質(zhì)量色譜圖中各物質(zhì)的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液一致（變化范圍在±2.5%以內(nèi)），且試樣定性離子的相對豐度與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中定性離子的相對豐度，其偏差不超過表3中規(guī)定，則可判定樣品中存在該物質(zhì)。

表3 定性離子相對豐度的最大允許偏差表

（2）定量測定。將試樣溶液注入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀中，得到各物質(zhì)的定量離子峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算試樣溶液中各物質(zhì)的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢出限與定量限的確定

將各組分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)逐級稀釋，找到信噪比S/N=3時各組分濃度，結(jié)果確定對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的檢出限分別為6 ng·mL-1、6 ng·mL-1、6 ng·mL-1，定 量 限（S/N=10）分 別 為20 ng·mL-1、20 ng·mL-1、 20 ng·mL-1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按照濃度由低到高的順序進(jìn)樣測定，以各組分定量離子的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以對應(yīng)的濃度作為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程見圖1。

由圖1可得，對乙酰氨基酚標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=180.486176x+529.528216，相關(guān)系數(shù)為0.99936；咖啡因標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=53.704895x+50.217223，相關(guān)系數(shù)為0.99993；水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=11.006995x+21.250089，相關(guān)系數(shù)為0.99989。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程圖

2.3 檢測精密度及回收率

選用的蒸餾酒酒樣基質(zhì)均為空白基質(zhì)，本底值均為未檢出。

2.3.1 精密度

由表5可知，3種非法添加物質(zhì)在空白基質(zhì)中按照1倍、2倍、5倍定量限進(jìn)行添加，樣品經(jīng)處理后上機(jī)檢測，實(shí)驗結(jié)果精密度均≤3.0%，表明該方法處理的樣品含量結(jié)果精密度高。

表5 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸檢測結(jié)果表

2.3.2 回收率

由表6可知，3種物質(zhì)在不同的加標(biāo)濃度水平下的平均回收率為95.2%～105.0%。

表6 對乙酰氨基酚、咖啡因、水楊酸回收率表

2.4 譜圖

50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖見圖2。

圖2 50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖

50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的提取離子色譜圖見圖3。

圖3 50 ng·mL-1對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液的提取離子色譜圖

2.5 樣品測定結(jié)果

采用本檢驗方法對市售的20種白酒進(jìn)行了檢測，均未檢出非法添加對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因。

3 結(jié)論

蒸餾酒中非法添加物質(zhì)的查處和檢測能夠完善市場監(jiān)管需求。本文用超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測蒸餾酒中頭痛粉的3種主要成分（包含水解成分），即對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因。結(jié)果顯示，該方法靈敏度、加標(biāo)回收率高，重復(fù)性好，不僅對蒸餾酒中非法添加對乙酰氨基酚、水楊酸、咖啡因的分析檢測方法起到了優(yōu)化作用，還為食品安全的市場監(jiān)管工作提供了準(zhǔn)確有效的科學(xué)依據(jù)。