◎ 譚敏捷

（清遠市食品檢驗中心，廣東 清遠 511500）

氟苯尼考是動物體內(nèi)專用的抗生素類藥物，一種半合成的廣譜抗菌藥，氟苯尼考屬于氯霉素類藥物的其中一種，其毒副作用明顯低于氯霉素，因此在畜禽及水產(chǎn)品養(yǎng)殖中使用日益頻繁。隨著氟苯尼考的廣泛使用，動物源性食品中氟苯尼考殘留問題越來越受關(guān)注。目前氯霉素類藥物殘留量的檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法。由于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法定性準確、特異性高、靈敏度強，本研究建立了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬肉和雞蛋中氟苯尼考殘留量的方法[1-3]。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

甲醇、乙腈、正己烷（HPLC級，德國Merck）， 甲酸（Aladdin）、氯化鈉（廣試）、氟苯尼考標準品純度為99.9%（德國Dr.Ehrenstorfer公司）、大連中食國實檢測技術(shù)有限公司蛋粉中氟苯尼考質(zhì)控樣（CFAPA-QC1060B-2）。樣品均為抽檢 樣品。

1.2 儀器與設(shè)備

液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀HPLC-MS/MS（Thermo Scientific TSQ Quantis）、組織搗碎勻漿機（崢嶸）、振蕩機（Heidolph）、臺式高速離心機（赫西）、超聲機（EMERSON）、全自動平行濃縮儀（Reeko AUTO EVA）、超純水機（Milli-Q Integral 5）和電子分析天平（艾安得）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品提取與凈化

稱取5.00 g已勻質(zhì)的試樣（精確至0.01 g）至50 mL離心管中，加入11 mL乙腈和2 g氯化鈉，旋渦30 s，2000 r·min-1振蕩提取10 min，然后轉(zhuǎn)移至超聲機超聲10 min，7500 r·min-1離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至另一50 mL離心管中，殘渣再加入11 mL乙腈，重復上述操作再提取一次，合并兩次上清液，用乙腈定容至25 mL，加入15 mL乙腈飽和的正己烷，振蕩2 min，7500 r·min-1離心5 min，棄去上層液，取5 mL下層乙腈提取液于15 mL氮吹管中，45 ℃氮吹至干。殘渣用1.0 mL乙腈水（1+1）復溶，旋渦混勻，過0.22 μm尼龍濾膜，待測定[4-5]。

1.3.2 標準溶液配制

（1）標準儲備液。精密稱取氟苯尼考10.0 mg，至于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成1 mg·mL-1的標準儲備液。

（2）標準工作曲線繪制。分別吸取適量1 mg·mL-1氟苯尼考標準儲備液，用經(jīng)過1.3.1樣品提取與凈化制備的空白基質(zhì)溶液稀釋，配成0.5 μg·L-1、1 μg·L-1、 2 μg·L-1、2.5 μg·L-1、3 μg·L-1、4 μg·L-1和5 μg·L-1標準工作液，進行液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，以基質(zhì)標液濃度為橫坐標（X），定量離子色譜峰面積為縱坐標（Y）繪制標準工作曲線，計算出回歸線性方程和相關(guān)系數(shù)。

1.3.3 儀器分析

（1）液相色譜條件。色譜柱：Accucore C18(2.1 mm×150 mm，2.6 μm)；柱溫：40 ℃；流動相：A相：0.1%甲酸水，B相：乙腈；流速：0.3 mL·mL-1；進樣量：20 μL。采用梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序表

（2）質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM；電噴霧電壓：-2500 V；離子傳輸溫度：325 ℃；離子源溫度350 ℃[6]。氟苯尼考定性離子對355.912/184.917、355.912/335.988；定量離子對355.912/335.988；采集時間42.699 ms；去簇電壓定性離子和定量離子分別為18.61 V和10.23 V；碰撞能125.99 V。

1.3.4 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）

分別在豬肉和雞蛋空白樣品中加入適量目標物，按照1.3.1前處理步驟操作，上機，測得目標物信噪比S/N≥3時的濃度為檢出限，信噪比S/N≥10時的標液濃度為定量限。

1.3.5 精密度的測定

分別稱取5.00 g（精確至0.01 g）均質(zhì)的空白豬肉樣品和空白雞蛋樣品，準確加入25 μg·L-1標準溶液 0.5 mL，使目標物在不同基質(zhì)中的濃度為2.5 μg·kg-1，按照1.3.1前處理步驟操作，上機，同一天內(nèi)重復測定 7次，求出平均值，計算相對標準偏差。

1.3.6 回收率的測定

稱取5.00 g（精確至0.01 g）均質(zhì)的空白豬肉樣品和空白雞蛋樣品，分別添加3個不同濃度的目標物，每個濃度3個平行，經(jīng)過1.3.1前處理步驟操作，上機，求出回收率[7-8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)標準曲線

不同基質(zhì)的氟苯尼考在0.5～5 μg·L-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r2≥0.99，結(jié)果見表2。

表2 標準曲線和相關(guān)系數(shù)表

2.2 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）

以信噪比S/N≥3時所對應(yīng)的濃度為檢出限，得到本方法的檢出限濃度為0.05 μg·kg-1，見圖1。

圖1 檢出限色譜圖

以信噪比S/N≥10時所對應(yīng)的濃度為定量限，得到本方法的定量限濃度為0.1 μg·kg-1，見圖2。

圖2 定量限色譜圖

2.3 加標回收率

在空白豬肉樣品和空白雞蛋樣品，分別添加 0.6 μg·kg-1、1 μg·kg-1、3 μg·kg-13個水平5平行加標回收率的測定，結(jié)果見表3。

表3 豬肉和雞蛋中氟苯尼考的加標回收率表

2.4 精密度

分別于陰性豬肉和雞蛋中添加氟苯尼考濃度為 7.0 μg·kg-1，雞蛋同一個樣品一天內(nèi)重復測定7次，相對標準偏差為2.1%，一周內(nèi)重復測定7次，相對標準偏差為4.3%；豬肉同一個樣品一天內(nèi)重復測定7次，相對標準偏差為1.1%，一周內(nèi)重復測定7次，相對標準偏差為2.0%，結(jié)果見表4。

表4 豬肉和雞蛋中氟苯尼考精密度的測定表

2.5 方法驗證

為了驗證本方法的準確性和科學性，采用大連中食國實檢測有限公司蛋粉中氟苯尼考質(zhì)控樣對該方法進行驗證測定，結(jié)果均符合｜Z｜評分≤2，見表5。

表5 雞蛋凍干粉質(zhì)控樣品測定結(jié)果表

3 結(jié)論

本方法結(jié)果表明，豬肉和雞蛋基質(zhì)曲線線性良好，3個加標水平回收率良好以及精密度較好，均符合《獸藥殘留實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》（NY/T 1896—2010）。 本方法采用超高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法檢測，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性良好，靈敏度高，定量準確，不需要經(jīng)過固相萃取柱凈化，前處理操作簡單，提取溶劑消耗少，分析測定時間短，檢出限和定量限均滿足食品安全國家標準氟苯尼考殘留量的測定 要求。