武夢(mèng)麗 ， 王新峰 ， 丁 艷 ， 王 虹 ， 羅 燕 ， 連科迅 ， 谷新利

(石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 ， 新疆 石河子 832003)

甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)是一種可食用和藥用的植物，距今已有2 000多年的歷史，它具有良好的藥用價(jià)值，是中藥中應(yīng)用最為廣泛的藥用植物之一。甘草多糖 (Glycyrrhiza polysaccharide，GP)是甘草的主要有效成分之一，具有調(diào)節(jié)免疫、抗病毒、降血脂、降血糖等功能[1]。硒是動(dòng)物必需的微量元素，在機(jī)體生長(zhǎng)、免疫等方面發(fā)揮重要作用。自然界中硒的存在形式主要分為無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒，與無(wú)機(jī)硒相比有機(jī)硒毒性低，更容易被機(jī)體吸收。硒化多糖主要通過(guò)化學(xué)修飾的方法將多糖與無(wú)機(jī)硒結(jié)合成有機(jī)化合物，研究表明，經(jīng)過(guò)硒化修飾后的多糖免疫調(diào)節(jié)能力和抗凝血活性均顯著增強(qiáng)[2]，雛雞注射1 mL(2 mg/mL)硒化甘草多糖可以提高疫苗免疫后的抗體效價(jià)[3]。本試驗(yàn)旨在探討硒化修飾后的硒化甘草多糖對(duì)雛雞血液指標(biāo)的影響，同時(shí)探究其是否能提高多糖的活性，為硒化多糖在臨床上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 甘草多糖和硒化甘草多糖，均由石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室制備,含糖量為86%,試驗(yàn)時(shí)分別稀釋成2 mg/mL；黃芪多糖，由上海源葉生物科技有限公司提供，試驗(yàn)時(shí)稀釋成2 mg/mL；飼糧，購(gòu)自新疆泰昆集團(tuán)股份有限公司。

1.2 儀器 獸用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀PE-6800VET，深圳市普康電子有限公司；全自動(dòng)生化分析儀V1，天津維納芯科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理 1日齡的京紅1號(hào)雛雞，購(gòu)自新疆中盛裕口禽業(yè)有限公司；試驗(yàn)各組在同一棟雞舍進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)。雛雞入舍前用甲醛對(duì)雞舍進(jìn)行熏蒸消毒。7日齡時(shí)用雞新城疫、傳染性支氣管炎二聯(lián)活疫苗滴鼻免疫，同時(shí)頸部皮下免疫雞新城疫、傳染性支氣管炎、禽流感三聯(lián)滅活疫苗；14日齡時(shí)進(jìn)行雞傳染性法氏囊滴口免疫；21日齡時(shí)進(jìn)行新城疫飲水免疫；28日齡時(shí)進(jìn)行法氏囊飲水免疫。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取300只1日齡的京紅1號(hào)雛雞，隨機(jī)分為4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)14只雞，其中I組為空白組，Ⅱ組為黃芪多糖組，Ⅲ組為甘草多糖組、Ⅳ組為硒化甘草多糖組。各組雛雞先進(jìn)行7 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)，第8天開始第I組肌內(nèi)注射與試驗(yàn)組等容量的生理鹽水、Ⅱ～Ⅳ組分別肌內(nèi)注射1 mL黃芪多糖、甘草多糖和硒化甘草多糖，連續(xù)注射7 d，試驗(yàn)周期45 d。

1.5 指標(biāo)測(cè)定與方法

1.5.1 血液常規(guī)指標(biāo) 試驗(yàn)期間的第15、22、29、36天和第43天，采樣前禁食12 h，保證飲水，每組隨機(jī)選取體重相近的10只雞(每個(gè)重復(fù)選取2只)，采集血液于EDTA采血管中，用獸用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行雛雞血液常規(guī)指標(biāo)的測(cè)定。

1.5.2 血液生化指標(biāo) 試驗(yàn)期間的第15、22、29、36天和第43天，采樣前禁食12 h，保證飲水，每組隨機(jī)選取體重相近的10只雞(每個(gè)重復(fù)選取2只)，采集血液于肝素鋰采血管中，用全自動(dòng)血液生化分析儀和試劑盒進(jìn)行白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、總膽紅素(TB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GLT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、葡萄糖(GLU)、鈣(Ca)、無(wú)機(jī)磷(PHOS)等生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 硒化甘草多糖對(duì)雛雞血液白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞比率和淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響 由表1可知，整個(gè)試驗(yàn)周期中Ⅱ～Ⅳ組雛雞血液中的白細(xì)胞數(shù)(WBC)較空白組增多，第15、22天和第36天經(jīng)過(guò)硒化處理過(guò)的甘草多糖組與空白組相比差異顯著(P<0.05)。第15天和第43天時(shí)，各組雛雞血液中淋巴細(xì)胞比率(LYM%)差異不顯著(P>0.05)；第22、29天和第36天時(shí)，Ⅳ組與空白組比較可顯著提高淋巴細(xì)胞比率(LYM%)(P<0.05)。第36天和第43天時(shí)，Ⅳ組淋巴細(xì)胞數(shù)量(LYM)顯著高于空白組(P<0.05)；第43天時(shí)，Ⅳ組淋巴細(xì)胞數(shù)量(LYM)顯著高于其他各組(P<0.05)。

表1 雛雞血液白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞比率和淋巴細(xì)胞數(shù)Table 1 Total white blood cell count,lymphocyte ratio and lymphocyte count in chicken blood

2.2 硒化甘草多糖對(duì)雛雞肝功能指標(biāo)的影響 由表2可知，整個(gè)試驗(yàn)周期中各組雛雞血液中白蛋白(ALB)的含量呈上升趨勢(shì)，Ⅱ～Ⅳ組白蛋白(ALB)的含量高于空白組；第15天和第22天時(shí)Ⅳ組與空白組相比差異顯著(P<0.05)。第22、29天和第36天時(shí)，Ⅳ組中總蛋白(TP)的含量高于其他各組，且與空白組比較差異顯著(P<0.05)。Ⅱ～Ⅳ組球蛋白(GLB)的含量高于空白組，第22天和第29天時(shí)Ⅳ組顯著高于空白組(P<0.05)。第15天和第29天時(shí)，Ⅳ組總膽紅素(TB)含量顯著高于空白組(P<0.05)。各組間谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GLT)的含量差異不顯著(P>0.05)。雛雞血液中堿性磷酸酶(ALP)的含量在不同階段，Ⅱ～Ⅳ組均高于空白組；第29、36天和第43天時(shí)，Ⅳ組中堿性磷酸酶(ALP)含量顯著高于空白組(P<0.05)。

表2 雛雞肝功能指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果Table 2 Detection results of chicken liver function indexes

2.3 硒化甘草多糖對(duì)雛雞腎功能及血脂的影響 由表3可知，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中各組雛雞血液中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量差異不顯著(P>0.05)。Ⅱ～Ⅳ組中葡萄糖(GLU)的含量高于空白組，尤其在第15天Ⅳ組中葡萄糖(GLU)的含量顯著高于其他組(P<0.05)。Ⅱ～Ⅳ組中膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)的含量低于空白組；第29天和第43天時(shí)Ⅳ組雛雞血液中膽固醇(CHOL)的含量顯著低于空白組(P<0.05)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中Ⅳ組血液中甘油三酯(TG)的含量低于其他各組，第36天時(shí)顯著低于空白組(P<0.05)。

表3 雛雞腎功能及血脂檢測(cè)結(jié)果Table 3 Renal function and blood lipid detection results of chickens

2.4 硒化甘草多糖對(duì)雛雞血液中鈣、無(wú)機(jī)磷和免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，第15、29天和第43天時(shí)，Ⅳ組中鈣(Ca)的含量與空白組比較差異顯著(P<0.05)；第15天和第36天時(shí)，Ⅳ組血液中無(wú)機(jī)磷(PHOS)的水平顯著高于空白組(P<0.05)。試驗(yàn)過(guò)程中，Ⅱ～Ⅳ組血液中溶菌酶(LZM)的含量高于空白組；第29天時(shí)，Ⅳ組溶菌酶(LZM)的含量顯著高于空白組(P<0.05)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中各組雛雞血液中α-酸性糖蛋白(AAG)的含量之間差異不顯著(P>0.05)。

表4 雛雞血液中鈣、無(wú)機(jī)磷和免疫指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果Table 4 Detection results of blood calcium,inorganic phosphorus and immune indexes of chickens

3 討論

3.1 硒化甘草多糖對(duì)雛雞血液生理指標(biāo)的影響 白細(xì)胞是機(jī)體抵御病原微生物等異物入侵的主要防線，具有參與細(xì)胞免疫、吞噬、產(chǎn)生抗體、傳遞免疫信息等功能[4]。白細(xì)胞的總數(shù)直接反映機(jī)體的免疫狀態(tài)，本試驗(yàn)結(jié)果表明，Ⅱ～Ⅳ組雛雞血液中白細(xì)胞的數(shù)量高于空白組，試驗(yàn)第15、22天和第36天時(shí)硒化甘草多糖組血液中白細(xì)胞的數(shù)量較空白組顯著提高，這與劉師旗等[5]研究發(fā)現(xiàn)車前草多糖可刺激早期雞白細(xì)胞增長(zhǎng)的結(jié)果一致。淋巴細(xì)胞數(shù)量也是機(jī)體免疫應(yīng)對(duì)功能的重要組成部分，其數(shù)量的增加代表動(dòng)物機(jī)體抵抗力的增強(qiáng)，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中注射多糖的試驗(yàn)組血液中淋巴細(xì)胞數(shù)量高于空白組，第36天和第43天時(shí)硒化甘草多糖組的淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著高于空白組，表明硒化甘草多糖能提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力且效果要優(yōu)于甘草多糖。

3.2 硒化甘草多糖對(duì)雛雞血液生化指標(biāo)的影響 白蛋白由肝臟合成，用于組織修補(bǔ)和能量的供給；球蛋白由漿細(xì)胞分泌形成，反應(yīng)機(jī)體的抵抗力；總蛋白主要由白蛋白和球蛋白組成，在一定程度上反映了動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收程度。研究發(fā)現(xiàn)，總蛋白的含量升高表明動(dòng)物對(duì)日糧中蛋白質(zhì)的消化吸收能力增強(qiáng)[6]，從而促進(jìn)組織蛋白質(zhì)的合成，利于提高生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，雛雞注射多糖類藥物可以提高雛雞血液中總蛋白、白蛋白和球蛋白的含量，經(jīng)過(guò)硒化處理過(guò)的硒化甘草多糖組，提升血液中總蛋白、白蛋白和球蛋白的能力高于其他各處理組，結(jié)果表明硒化多糖活性明顯優(yōu)于多糖，這與于紹帥等[7]的研究結(jié)果相一致。

肝臟功能的變化影響酶的代謝，當(dāng)肝功能受到影響時(shí)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性會(huì)發(fā)生變化。本試驗(yàn)中各組間谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性差異不顯著，說(shuō)明給雛雞注射多糖以及硒化甘草多糖類藥物并不會(huì)對(duì)雛雞的肝臟產(chǎn)生損害，這為硒化甘草多糖在臨床上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

堿性磷酸酶廣泛分布于機(jī)體肝臟、骨骼、腎等組織，可用于骨骼、肝膽系統(tǒng)疾病的診斷，同時(shí)也是機(jī)體消化代謝的關(guān)鍵酶類，參與脂肪的代謝，它的高低反應(yīng)動(dòng)物機(jī)體的代謝強(qiáng)度和生產(chǎn)性能[8]，堿性磷酸酶能提高物質(zhì)攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)的速度[6]。研究發(fā)現(xiàn)給雛雞注射多糖類藥物糖能通過(guò)提升堿性磷酸酶來(lái)促使體內(nèi)鈣動(dòng)力增強(qiáng)，從而促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)，滿足雛雞快速生長(zhǎng)的需要[9]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)硒化處理過(guò)的甘草多糖提升血液中堿性磷酸酶含量的效果更佳，經(jīng)過(guò)硒化處理過(guò)的甘草多糖增強(qiáng)雛雞生長(zhǎng)的能力高于未經(jīng)硒化處理過(guò)的多糖組。

有研究認(rèn)為，血清尿素氮含量與蛋白質(zhì)的利用率之間存在顯著的負(fù)相關(guān)，當(dāng)肝臟中蛋白質(zhì)代謝和腎臟排泄功能正常時(shí)，其在血清中的含量通常維持在一定范圍內(nèi)[10]，肌酐是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，主要由腎小球?yàn)V過(guò)排出體外，血清尿素氮和肌酐是臨床上評(píng)價(jià)腎功能的重要指標(biāo)，當(dāng)血清中尿素氮和肌酐濃度升高時(shí)，則表明腎功能可能出現(xiàn)異常[11]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組雛雞血液中尿素氮和肌酐的含量較空白組均無(wú)顯著差異，表明多糖類藥物并不會(huì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生不利影響。

血糖是機(jī)體供能和合成蛋白質(zhì)的重要底物，被機(jī)體吸收后可轉(zhuǎn)化為動(dòng)物生長(zhǎng)所需的能量[12]，血糖水平的高低直接關(guān)系著其生長(zhǎng)速度。研究發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)中添加400 mg/(kg·bw)黃芪多糖可以提高血糖濃度[12]。黃小流等[13]研究發(fā)現(xiàn)，馬齒莧多糖能顯著提高斷奶大鼠血清中葡萄糖的含量。本試驗(yàn)結(jié)果表明，硒化甘草多糖組血糖質(zhì)量濃度較空白組有所提高，說(shuō)明硒化甘草多糖在一定程度上能夠促進(jìn)血糖濃度增加，有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收。

張利娟等[14]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，日糧中添加黃芪多糖對(duì)蛋雞血脂水平有一定的調(diào)節(jié)作用，可以降低血清中甘油三酯和膽固醇的含量。劉會(huì)娟等[15]的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飲水中加入米糠多糖，可以降低雛雞血液中甘油三酯和膽固醇水平。這與本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)硒化甘草多糖可以降低雛雞血液中膽固醇、甘油三酯含量的研究結(jié)果一致。

溶菌酶能水解細(xì)胞壁中黏肽的乙酰氨基多糖并使之裂解被釋放出來(lái)從而破壞和消除侵入體內(nèi)的異物，實(shí)現(xiàn)機(jī)體防御功能[16]，能部分反映細(xì)胞免疫功能和機(jī)體抗感染能力?？梢酝ㄟ^(guò)血清中溶菌酶的含量來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體的非特異性免疫功能，研究發(fā)現(xiàn)，0．15%和0．20%濃度的馬尾藻多糖能顯著增強(qiáng)奧尼羅非魚溶菌酶的含量[17]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，多糖類藥物可以提高雛雞血液中溶菌酶的含量，從而提高了雛雞的免疫功能。

α-酸性糖蛋白為急性時(shí)相反應(yīng)物之一，在急性炎癥時(shí)含量增高，與免疫防御功能有關(guān)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各組雛雞血液中α-酸性糖蛋白無(wú)顯著差異，表明注射多糖類藥物不會(huì)對(duì)雛雞的健康產(chǎn)生危害。

綜上所述，硒化甘草多糖能提高雛雞血液中與機(jī)體免疫有關(guān)的各項(xiàng)指標(biāo)，如白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、溶菌酶等的含量，同時(shí)對(duì)肝臟、腎臟無(wú)不良影響，還具有一定的降血脂作用，表明經(jīng)過(guò)硒化處理過(guò)的甘草多糖可以改善雛雞的血液指標(biāo)，提高機(jī)體的抵抗力且效果優(yōu)于未經(jīng)處理過(guò)的甘草多糖。