中國醫(yī)學裝備協(xié)會眼科專業(yè)委員會眼科檢驗檢測學組，中國中西醫(yī)結合學會檢驗醫(yī)學專業(yè)委員會眼科疾病實驗診斷專家委員會

病毒是常見的引起眼內(nèi)感染的病原體之一。目前，已知能夠引起眼內(nèi)感染的病毒包括皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)、西尼羅病毒、麻疹病毒、風疹病毒及登革熱病毒等[1]。病毒感染可引起眼前段炎癥，如角膜內(nèi)皮炎、前葡萄膜炎、青光眼睫狀體炎綜合征及Fuchs葡萄膜炎綜合征等[2]。有研究顯示，約67%對糖皮質激素治療不敏感的前葡萄膜炎由病毒感染所致[3]。病毒感染同樣能引起后葡萄膜炎，包括壞死性視網(wǎng)膜炎及非壞死性視網(wǎng)膜炎，前者又包括急性視網(wǎng)膜壞死、巨細胞病毒性視網(wǎng)膜炎及進行性外層視網(wǎng)膜壞死[1]等。文獻報道，實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)技術檢測眼內(nèi)液皰疹病毒的靈敏度為80.9%～98.8%，特異度為97.4%～100.0%[4-8]。采集疑診為病毒性葡萄膜炎患者的眼內(nèi)液進行病毒核酸檢測已成為明確病因及確定后續(xù)治療方案的重要手段[4,9-14]。

目前，多種檢測方法已成功應用于眼內(nèi)液病毒核酸檢測，包括熒光定量PCR、Southern印跡雜交、多重PCR和下一代測序(next-generation sequencing，NGS)等。Kashiwagi等[15]利用Southern印跡雜交技術在HIV陽性患者的房水及視網(wǎng)膜下液中均檢出HIV病毒。多重PCR可用于多種病原體的同時檢測以及某些病原微生物、遺傳病及癌基因的分型鑒定，該檢測方法對眼內(nèi)病原體感染的檢測敏感性達98.8%，特異性達98.5%[8]。NGS技術通過對臨床標本中上萬甚至上億條序列的讀取來檢測標本中含有的病毒，不僅能檢測到未知的新病毒，還能檢測病毒基因組的變異及對抗病毒藥物的抗藥性[16]。該技術與傳統(tǒng)PCR對眼內(nèi)病原體感染的檢測符合率為87%[17]。Ai等[18]通過NGS在1例因直接接觸豬的污染物而導致眼內(nèi)炎的女性患者中檢出假狂犬病病毒。但迄今為止，熒光定量PCR仍然是國內(nèi)針對眼內(nèi)液病毒核酸檢測應用最廣泛的技術手段。

為了建立一套標準化的眼內(nèi)液病毒核酸檢測流程及臨床應用規(guī)范，以提供穩(wěn)定、可靠、有效的檢測數(shù)據(jù)，促進眼內(nèi)液病毒核酸檢測的規(guī)范化及標準化，助力眼內(nèi)病毒性感染相關疾病的精準診斷，中國醫(yī)學裝備協(xié)會眼科專業(yè)委員會眼科檢驗檢測學組與中國中西醫(yī)結合學會檢驗醫(yī)學專業(yè)委員會眼科疾病實驗診斷專家委員會組織相關專家進行討論，以熒光定量PCR方法為基礎，對眼內(nèi)液病毒核酸檢測流程及其臨床應用規(guī)范達成共識如下。

1 眼內(nèi)液病毒核酸檢測實驗室建設標準

當前醫(yī)療行業(yè)已經(jīng)邁入精準醫(yī)學時代，精準檢測作為精準醫(yī)療的一部分受到業(yè)界越來越多的關注。隨著分子生物技術的進步，作為眼科精準檢測內(nèi)容之一的眼內(nèi)液檢測也取得了長足發(fā)展。目前，國內(nèi)不少實驗室均可開展科研層面上的眼內(nèi)液檢測，但涉及臨床診療層面的眼內(nèi)液檢測，必須在有資質開展核酸檢測的實驗室進行，并對檢測項目進行備案。

眼內(nèi)液的檢測須建立嚴格的管理制度、標準化的操作程序及質量管理體系，這是確保眼內(nèi)液病毒核酸檢測實驗室生物安全及檢測結果準確的前提。眼內(nèi)液病毒核酸檢測實驗室的設置與運行應符合《醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法》(衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2006]73號)及修正內(nèi)容(國衛(wèi)辦醫(yī)函[2020]560號)的要求；工作制度及標準操作程序應符合《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2008)；工作原則及注意事項應符合《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》(衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)[2010]194號)。實驗室防護級別應符合生物安全二級實驗室要求，實驗人員應分區(qū)穿戴工作服、一次性醫(yī)用口罩、醫(yī)用帽子及單層手套(必要時需穿戴雙層手套)。病毒核酸檢測實驗室應設置以下幾個區(qū)域：試劑貯存及準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)及擴增產(chǎn)物分析區(qū)，必要時增加標本接收與預處理區(qū)，以及報告發(fā)放區(qū)。如使用自動分析儀(擴增產(chǎn)物閉管檢測)，可將擴增區(qū)與擴增產(chǎn)物分析區(qū)合并。具體實驗室分區(qū)應依據(jù)所使用的技術平臺、檢驗項目及工作量而定。上述各個區(qū)域必須設置成獨立空間且單一流向，做到氣流、人流、物流不交叉，以防止在核酸提取及擴增等過程中發(fā)生污染[19]。實驗室檢測技術人員應具備相關專業(yè)大專以上學歷，并有2年以上的實驗室工作經(jīng)驗及基因檢驗相關培訓合格證書；實驗室配備的工作人員應當與所開展檢測項目及標本量相適宜，以保證及時、精準地進行實驗及報告解讀，保證結果的準確性。

2 眼內(nèi)液病毒核酸檢測流程

眼內(nèi)液病毒核酸檢測的實驗技術包括眼內(nèi)液標本采集、標本處理、核酸提取、上機檢測等4個步驟。其中，眼內(nèi)液標本采集過程由送檢醫(yī)師完成，標本處理由送檢醫(yī)師與實驗室共同完成，核酸提取及上機檢測在實驗室內(nèi)進行。

2.1 眼內(nèi)液標本采集 眼內(nèi)液是眼球內(nèi)液體的統(tǒng)稱，主要包括房水及玻璃體液；有些病理狀態(tài)下還可出現(xiàn)視網(wǎng)膜下液及脈絡膜上腔積液。目前用于病毒核酸檢測的眼內(nèi)液標本主要包括房水及玻璃體液。規(guī)范地采集眼內(nèi)液標本是確保眼內(nèi)液檢測結果可靠性的基礎，同時也能夠有效地避免發(fā)生醫(yī)源性損傷及醫(yī)患糾紛。在標本采集前，應向患者或其監(jiān)護人介紹檢測知情同意書的內(nèi)容條款，在患者或監(jiān)護人理解并且接受的前提下指導其簽署知情同意書；同時評估是否存在操作禁忌證，如眼表活動性感染、前房極淺等。在標本采集完成后，應由標本采集人員填寫檢測申請單，并核對申請單上的患者基本信息、檢測項目是否與實際一致，確認無誤后將申請單及所采集的眼內(nèi)液標本置于標本袋，并共同轉運至檢測實驗室；若檢測實驗室具備完善的信息登記系統(tǒng)，也可通過該系統(tǒng)直接發(fā)送標本信息。

2.1.1 眼內(nèi)液采集的適應證及時機 臨床醫(yī)師應把握眼內(nèi)液采集的適應證。眼內(nèi)液病毒核酸檢測應針對臨床疑診為活動性眼內(nèi)病毒感染的患者。病毒性前葡萄膜炎的臨床特征包括單眼發(fā)病(多數(shù)情況下)、易復發(fā)、發(fā)病時常眼內(nèi)壓升高及眼后節(jié)正常。眼科檢查可發(fā)現(xiàn)角膜從上皮至內(nèi)皮的各種損害、角膜后羊脂狀或色素性沉著物(keratic precipitates，Kp)及虹膜節(jié)段性或彌漫性萎縮[20]。急性視網(wǎng)膜壞死的臨床特征包括眼內(nèi)壓升高、前房浮游細胞或羊脂狀Kp、玻璃體炎性混濁、周邊視網(wǎng)膜隨病程進展逐漸融合的白色病灶、視網(wǎng)膜動脈炎及視盤充血[13]。巨細胞病毒性視網(wǎng)膜炎及進行性外層視網(wǎng)膜壞死的共同特點是好發(fā)于免疫功能低下的患者；前者發(fā)病時可見前房、玻璃體的輕微炎癥，視網(wǎng)膜病灶可表現(xiàn)為黃白色壞死夾雜紅色出血、顆粒樣病變或霜樣視網(wǎng)膜血管炎[21]；后者的臨床特征表現(xiàn)為進展迅速的視網(wǎng)膜外層壞死。表1羅列了眼科常見的病毒性葡萄膜炎及其臨床表現(xiàn)，可幫助臨床醫(yī)師有效把控眼內(nèi)液采集的適應證。臨床醫(yī)師應根據(jù)患者的病史、其他器官病毒感染情況以及眼部體征綜合判斷患者是否存在眼內(nèi)活動性病毒感染的可能。對疑似病例進行眼內(nèi)液病毒核酸檢測有助于明確診斷，避免因漏診、誤診造成角膜內(nèi)皮失代償、視網(wǎng)膜脫離、視神經(jīng)萎縮等嚴重并發(fā)癥的發(fā)生。一般情況下，對疑似活動性眼內(nèi)病毒感染的患者，采集前房水即能滿足病毒核酸檢測的需要；患者存在玻璃體手術指征，如合并玻璃體積血或視網(wǎng)膜脫離時，也可直接在手術時采集玻璃體原液送檢。同時，合適的眼內(nèi)液采集時機對檢測結果也非常重要，建議在眼內(nèi)炎癥急性發(fā)作期進行采集，避免因采集時間延后造成眼內(nèi)液病毒核酸轉陰，從而導致臨床誤診。

表1 眼科常見的病毒性葡萄膜炎及其臨床表現(xiàn)Tab.1 Clinical manifestations of the common viral uveitis of ophthalmology

2.1.2 眼內(nèi)液采集前的感染預防措施 在采集眼內(nèi)液前，應預防性地給予局部抗菌藥物；如擇期進行眼內(nèi)液采集，應對患眼使用含有抗菌藥物的滴眼液(如妥布霉素滴眼液、氧氟沙星滴眼液等)進行點眼，每天4～6次，持續(xù)3 d；如當天進行眼內(nèi)液采集，可頻繁點眼6～8次[22]。前房水采集可在眼科專用治療室或手術室內(nèi)進行，玻璃體液采集需在手術室內(nèi)進行。若在治療室內(nèi)進行采集操作，房間須經(jīng)紫外線消毒至少30 min，應注意房間消毒期間關閉門窗；若在手術室內(nèi)進行采集操作，應按照手術室要求進行日常消毒。負責眼內(nèi)液采集的操作人員應使用消毒液消毒手部，戴無菌手套及手術帽。在采集眼內(nèi)液前，應對患者眼周皮膚進行消毒；在治療室內(nèi)操作，建議使用含有抗菌藥物的滴眼液沖洗患者結膜囊；在手術室內(nèi)操作，建議使用5%聚維酮碘沖洗患者結膜囊，并按照眼科手術要求進行鋪巾、貼膜、開瞼器撐開眼瞼。

2.1.3 前房水采集 根據(jù)醫(yī)院要求及患者配合情況，可采用平躺位或于裂隙燈顯微鏡下坐位采集患者的前房水標本。建議在自然瞳孔大小狀態(tài)下，選用25 G注射針頭(相當于1 ml注射器)或針尖更細的注射針頭進行前房穿刺以采集前房水。表面麻醉后，從透明角膜緣穿刺，針尖朝向偏離瞳孔區(qū)，針尖斜面朝向角膜內(nèi)皮面(如5:00時鐘位進針，針尖朝向7:00時鐘位穿刺)。針頭在角膜層間最好穿行約1 mm后進入前房，以盡量避免誤傷晶狀體，同時提高穿刺口自閉性；針尖進入前房后，囑患者勿移動眼球，向外緩緩拉動注射器活塞，抽出0.05～0.1 ml前房水后拔出針尖[23]；也可在穿刺前事先將注射器活塞拔出，在針尖進入前房的同時使用棉簽輕壓眼球，靠眼內(nèi)壓的作用將房水壓出至針管內(nèi)，以避免拉動活塞抽液操作的不穩(wěn)定，從而降低誤傷虹膜甚至晶體的可能。

2.1.4 玻璃體液采集 玻璃體液標本的采集需采用微創(chuàng)玻璃體切割手術進行，在不具備微創(chuàng)玻璃體切割手術條件時，可采用傳統(tǒng)20 G玻璃體切割系統(tǒng)進行采集。若判斷玻璃體液化明顯，可行玻璃體抽液術獲取玻璃體液標本，該技術適用于60歲以上的患者。常規(guī)穿刺距角膜緣距離為3.5 mm，無晶體眼為3 mm，高度近視眼為4 mm，嬰兒依據(jù)月齡而定。穿刺前，應仔細檢查周邊眼底(尤其是存在周邊增殖的患者，如眼弓蛔蟲病)；必要時，可結合超聲生物顯微鏡檢查結果，避開增殖明顯的部位。

2.1.4.1 玻璃體抽液術 建議在散大瞳孔狀態(tài)下進行?；颊咂教桑⒁暻胺?，眼球局部麻醉后選用23 G(相當于2 ml注射器)的針頭經(jīng)鞏膜斜行穿刺后垂直進針，約1/2針頭長度(12.5 mm)進入玻璃體腔后，在顯微鏡下見針頭位置后向外抽動注射器活塞，抽出0.3 ml玻璃體液即可拔出針頭。如玻璃體液不能順利抽出，可嘗試旋轉針頭方向，或輕度改變針頭角度及前后位置。

2.1.4.2 玻璃體切割術 盡量選用27 G、25 G、23 G等微創(chuàng)玻璃體切割手術系統(tǒng)。眼球局部麻醉后經(jīng)鞏膜斜行穿刺后垂直進針，分別置入灌注及玻璃體切割套管。完成玻璃體原液取材前保持灌注關閉，確保沒有灌注液進入玻璃體腔；在確保玻璃體切割器的管道內(nèi)沒有液體的情況下，旋開玻璃體切割器的管道螺旋帽，接上1 ml或2 ml注射器針管，將切割頻率設置在2500次/min以上，玻璃體切割頭置于玻璃體混濁明顯處或視網(wǎng)膜病灶附近，踩動腳踏板，緩緩向外抽動注射器活塞，吸出0.3～0.5 ml玻璃體液即可。退出玻璃體切割器，打開灌注恢復眼壓，用注射器抽出切割器管道內(nèi)剩余標本，采集完成后拔出套管，仔細檢查有無滲漏[23]；也可只做1個穿刺口，在吸出標本后再插入灌注管恢復眼壓。在抽動注射器活塞的過程中應緩慢均勻，避免吸力過大牽拉視網(wǎng)膜導致裂孔形成。

2.1.5 眼內(nèi)液采集后的感染預防措施 眼內(nèi)液采集完畢后，應在結膜囊內(nèi)使用含有抗菌藥物的眼膏(如妥布霉素地塞米松眼膏、氧氟沙星眼膏等)，并使用眼墊包扎。于次日打開眼墊后檢查有無眼紅、眼痛加劇等醫(yī)源性感染征象，并使用含有抗菌藥物的滴眼液點眼，每天4～6次，持續(xù)3 d。避免污水、污物等入眼。

2.2 眼內(nèi)液標本處理

2.2.1 醫(yī)師端處理 眼內(nèi)液從前房或玻璃體腔中取出后，為避免背景污染及核酸降解等，應立即從針管注入無菌無酶可密封容器內(nèi)。對于脫氧核糖核酸(DNA)病毒(如皰疹病毒)的檢測，若運輸時間不超過72 h，可常溫運輸標本；若運輸時間超過72 h，則需通過4 ℃以下冷鏈運輸標本；若不能立即送檢，計劃在30 d以內(nèi)送檢的標本可置于-20 ℃環(huán)境下無菌保存，30 d以上送檢的標本置于-80 ℃環(huán)境下無菌保存。長時間低溫保存對DNA病毒核酸檢測結果陽性率無明顯影響，標本應避免反復凍融。而對于核糖核酸(RNA)病毒(如HIV、西尼羅病毒、登格病毒、風疹病毒、麻疹病毒等)的檢測，標本需通過4 ℃以下冷鏈運輸至實驗室，并在48 h內(nèi)完成RNA的提取[24]；如預計運輸時間較長，可按比例添加核糖核酸酶(RNase)抑制劑，以減少標本RNA降解，并盡快送達實驗室。

2.2.2 實驗室端的接收與保存 實驗室標本接收人員負責審核送檢標本量及標本類型是否符合檢測要求，以及申請單上患者信息與檢測項目是否清晰可溯源。若出現(xiàn)眼內(nèi)液標本量不足、保存條件不符合要求、標本類型與申請單填寫信息不符、申請單填寫不清晰或無申請單等情況，則判定該標本為不合格。對于不合格標本，若眼內(nèi)液標本量不足或標本保存條件不符合要求，則通知送檢醫(yī)師重新取樣；如無法完成重新采樣，但又有檢測需求，需在報告單上注明，如標本量少、對結果產(chǎn)生的影響等信息；若申請單填寫不清晰或無申請單，則由檢測實驗室聯(lián)系送檢醫(yī)師確認申請單內(nèi)容。拒收不合格標本時，應填寫標本拒收登記表。

對于實驗室檢測后的標本，若有剩余可保存以備日后復檢或科研用途。若預計保存時間在1周之內(nèi)，考慮到反復凍融對蛋白樣品的破壞，建議于4 ℃冰箱內(nèi)保存；若預計保存時間在1個月以內(nèi)，可于-20 ℃冰箱內(nèi)保存；若預計保存時間在1個月以上，可于-80 ℃冰箱內(nèi)或液氮罐內(nèi)保存。

2.3 病毒核酸提取與熒光定量PCR擴增 實驗室應選擇國家藥品監(jiān)督管理局(National Medical Products Administration，NMPA)批準的試劑，試劑中標稱的標本類型應包含眼內(nèi)液標本。依據(jù)試劑說明書形成標準操作程序(standard operating procedure，SOP)，相關處理步驟均應嚴格按照SOP進行操作。在用于臨床檢測前，應對試劑及設備的分析性能進行驗證，形成性能驗證報告。定量項目的性能驗證應包括但不限于精密度、正確度、線性、測量和(或)可報告范圍、抗干擾能力等[25]。

如果NMPA批準的試劑檢測標本類型中不包含眼內(nèi)液，則改變商品試劑的預期用途，在用于臨床檢測前，應針對改變的標本類型等進行性能確認，形成性能確認報告[26-27]。經(jīng)過性能確認的方法形成SOP，在臨床檢驗過程中嚴格按照SOP進行。

2.4 實驗結果解讀 實驗結束后，用熒光定量PCR系統(tǒng)軟件分析結果，包括標準曲線、基線、陰性及陽性質控品等，以確定當日結果是否有效。所有分析參數(shù)及質控品均“在控”時，本批次結果才有效，保存好各種操作及原始記錄，并將最終結果錄入檢驗報告發(fā)放系統(tǒng)，經(jīng)雙人審核后方可發(fā)放檢驗報告。

熒光定量PCR檢測結果的報告方式：高于檢測下限的，結果報告為定量值；未檢出的，結果報告為小于檢測下限；有檢測值但該值低于檢測下限的，結果報告為小于檢測下限，但臨床備注提示有病毒檢出。

報告內(nèi)容如下：(1)患者基本信息，如患者姓名、性別、年齡、臨床信息等；(2)標本信息，如標本類型、采集時間、送檢時間、報告時間、唯一編號等；(3)結果信息，如檢測方法、結果單位、參考區(qū)間、檢測下限等；(4)實驗室信息，如實驗室名稱、聯(lián)系方式、檢測者、報告審核者等；(5)檢測方法的局限性說明。

3 實驗室病毒核酸檢測流程質量控制[28]

3.1 分析前質量控制 病毒核酸檢測試劑及檢測設備的質量對于實驗結果的準確性有直接影響，因此實驗室應建立試劑及關鍵耗材(如離心管、帶濾芯的吸頭)的驗收程序，相應程序中應有明確的判斷符合性的方法及質量標準。應該選用待檢標本類型包括眼內(nèi)液的試劑，如果試劑適用的標本類型不包括眼內(nèi)液，則應進行性能確認。在開展臨床核酸檢測前，應對檢測試劑及設備進行性能驗證。對于不同批號、不同批次運輸或更換不同廠家試劑時，應對其外包裝、運輸條件及存放條件進行監(jiān)控，同時采用實驗比對的方法對更換的試劑性能進行評價(如留樣再測等)，只有當比對結果可接受時方能用于臨床檢測。在進行樣本前處理時，應在生物安全柜中規(guī)范操作，避免樣本污染。

熒光定量PCR檢測的性能驗證內(nèi)容至少應包括精密度、正確度、線性、測量和(或)可報告范圍、抗干擾能力等。檢測使用的關鍵設備應定期進行維護保養(yǎng)，進行年度檢定/校準，包括擴增儀的溫控系統(tǒng)及光學系統(tǒng)、生物安全柜、超凈工作臺、加樣器、離心機、恒溫金屬浴等。

3.2 分析中質量控制 工作人員在進行檢測時要嚴格按照PCR檢測SOP進行。每批次實驗均應進行室內(nèi)質控，包括核酸提取及擴增在內(nèi)的整個實驗過程均應包含室內(nèi)質控品。定量項目每批次應包括3個水平的室內(nèi)質控：陰性、弱陽性及陽性[25]。質控物可以商業(yè)購買，亦可實驗室自制。自制室內(nèi)質控物應對其均一性及穩(wěn)定性進行驗證、評價和記錄。

試劑規(guī)定的一些分析參數(shù)必須在有效范圍內(nèi)，本次實驗方為有效，如某些試劑規(guī)定，病毒核酸陰性對照品擴增曲線不成S型或Ct值為UNDET(低于檢測下限)；陽性對照品有S型擴增曲線，Ct值在試劑規(guī)定范圍內(nèi)，標準曲線相關系數(shù)應≤0.98，以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則實驗視為無效。

當檢測結果出現(xiàn)假陽性或假陰性失控時，應停止本批次報告發(fā)放，立即查找原因。出現(xiàn)假陰性結果的主要原因包括：(1)眼內(nèi)液標本中含有病毒核酸，但其含量低于最低檢測限時可能無法檢測到，表現(xiàn)為陰性的結果；(2)標本采集、保存不規(guī)范，核酸降解等；(3)反應體系或標本容器中有擴增抑制物；(4)實驗室操作不規(guī)范；(5)引物設計位點發(fā)生基因突變等。出現(xiàn)假陽性結果的主要原因包括：(1)試劑本身存在非特異反應；(2)實驗室污染，包括標本交叉污染、陽性質控污染、產(chǎn)物污染等，或因操作不當所致。找到失控原因并采取糾正措施后應對本批次標本進行復測，質控均在控時方可發(fā)放檢驗報告；同時對失控過程、原因及糾正措施進行記錄存檔。

3.3 分析后質量控制 原始記錄是實驗室出具檢測報告的基本依據(jù)，也是溯源資料。因此，每次檢測均應對眼內(nèi)液標本的名稱與編號、使用儀器設備的名稱與編號、檢測日期、檢測方法、檢測用試劑、檢測結果、檢測時的環(huán)境條件及檢測人員信息進行詳細記錄。在質量體系文件中對于檢測報告的編制、簽發(fā)及修改進行規(guī)范，對檢驗報告發(fā)放時限、標本保存期限等均應進行規(guī)定。

3.4 室間質量評價 實驗室應定期參加國家臨床檢驗中心或省級臨床檢驗中心組織的室間質評或能力驗證，沒有室間質評或能力驗證的項目可以與其他實驗室進行室間比對。對每次室間質評或室間比對的結果進行回顧分析，對于不可接受的結果進行原因分析，落實整改措施，并記錄存檔。

4 眼內(nèi)液病毒核酸檢測對眼內(nèi)病毒性感染的診斷價值及局限性

眼內(nèi)液病毒核酸檢測作為一種重要的輔助診斷工具，具有較高的靈敏度及特異度，在眼內(nèi)病毒性感染相關疾病的診斷中具有一定的價值，但其固有的缺陷及臨床應用的局限性也不容忽視。例如，利用熒光定量PCR方法檢測眼內(nèi)液病毒核酸，其結果可能受到眼內(nèi)液標本量較少、反應體系中存在擴增抑制物、微生物多態(tài)性等因素的影響而出現(xiàn)假陰性結果[29]。在眼內(nèi)病毒感染的后期，由于眼內(nèi)病原體被機體自身免疫系統(tǒng)清除或病毒載量降低至檢測下限以下，也可能導致檢測結果與臨床診斷不符。因此，如單次病毒核酸檢測結果不能判斷是否為活動性病原體，臨床醫(yī)師應動態(tài)觀察患者的眼部體征，并結合患者的病史、全身情況及其他實驗室檢查進行綜合判斷。

5 總 結

病毒核酸檢測是眼內(nèi)液檢測最常涉及的項目之一，本共識涵蓋了眼內(nèi)液病毒核酸檢測應用于臨床病例的標本采集、運輸、保存、檢測及臨床應用規(guī)范，有助于實驗室進行規(guī)范化的檢測，可為臨床眼科醫(yī)師提供精準可靠的檢測數(shù)據(jù)，實現(xiàn)對受檢患者進行針對性診斷及精準治療的目的。隨著檢測技術的不斷發(fā)展，眼內(nèi)液病毒核酸檢測流程的細節(jié)及步驟仍需不斷更新及補充。實驗室應與臨床眼科醫(yī)師就檢測病例的選擇、眼內(nèi)液取樣途徑、標本送檢方式及檢測技術的選擇等進行實時溝通，以提高實驗室在眼內(nèi)液病毒核酸檢測方面的能力，為早日實現(xiàn)眼科精準檢測及治療貢獻力量。

執(zhí)筆：李堅(杭州市第一人民醫(yī)院眼科)

終審：陶勇(首都醫(yī)科大學附屬北京朝陽醫(yī)院眼科)，鄭美琴(溫州醫(yī)科大學附屬眼視光醫(yī)院檢驗科)

專家組成員(按姓名拼音順序排列)：常青(復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院眼科)，丁小燕(中山大學中山眼科中心)，馮云(北京大學第三醫(yī)院眼科)，高磊(濰坊眼科醫(yī)院/煙臺正大光明眼科醫(yī)院)，高磊(中國醫(yī)學科學院病原生物學研究所)，高玲(中南大學湘雅二醫(yī)院眼科)，侯婧(北京大學人民醫(yī)院眼科)，黃德光(臺灣臺北榮民總醫(yī)院眼科)，黃厚斌(解放軍總醫(yī)院眼科)，孔文君(首都醫(yī)科大學附屬北京佑安醫(yī)院眼科)，李堅(杭州市第一人民醫(yī)院眼科)，李甦雁(徐州市第一人民醫(yī)院眼科)，李自強(北京智德醫(yī)學檢驗所)，梁丹(中山大學中山眼科中心)，梁慶豐(首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院眼科中心/北京市眼科研究所)，梁燕(首都醫(yī)科大學附屬北京朝陽醫(yī)院檢驗科)，鹿秀海(山東第一醫(yī)科大學附屬眼科醫(yī)院檢驗科)，錢竹韻(北京智德醫(yī)學檢驗所)，蘇文如(中山大學中山眼科中心)，孫揮宇(首都醫(yī)科大學附屬北京地壇醫(yī)院眼科)，陶勇(首都醫(yī)科大學附屬北京朝陽醫(yī)院眼科)，王海燕(陜西省眼科醫(yī)院，西安市人民醫(yī)院眼科)，王輝(北京大學人民醫(yī)院檢驗科)，王逸軒(香港養(yǎng)和醫(yī)院)，王毓琴(溫州醫(yī)科大學附屬眼視光醫(yī)院眼科)，王志良(復旦大學附屬華山醫(yī)院眼科)，吳開力(中山大學中山眼科中心)，夏涵(予果生物科技(北京)有限公司)，許松濤(中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所)，姚進(南京醫(yī)科大學附屬眼科醫(yī)院)，趙潺(中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院眼科)，鄭美琴(溫州醫(yī)科大學附屬眼視光醫(yī)院檢驗科)